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ANNALES 


DE L'INSTITUT PASTEUR 


SCEAUX, — IMP. CHARAIRE ET C". 


ANNALES 

DE L'INSTITUT PASTEUR 

(JOURNAL DE MICROBIOLOGIE) 

PUBLIÉES SOUS LE PATRONAGE DE M. PASTEUR 


M. E. DU CL AUX 

MEMBRE nE l'iXSTITUT 
PROFESSEUR A LA SORBONXE 

Et un Comité de rédaction composé de MM. 

CHAMBERLAND, chef de service à l'Institut Pasteur, 
Dr GRANCHER, professeur à la Faculté de médecine, 

METCHNIKOFF, ciief de service à l'Institut Pasteur. 

NOCARD, directeur de l'École vétérinaire d'Alfort, 
Dr ROUX, chef de service à l'Institut Pasteur, 
Dr STRAUS, professeur à la Faculté de médecine. 


SIXIEME ANNEE 

1892 

Avec douze planches 


PARIS 

Gr. MASSON, ÉDITEUR 

LIBRAIRE DE L'ACADÉMIE DE MÉDECINE 
120, BOULEVARD SAINT-GERMAIN 

EN FACE DE l'ÉCOLE DE MÉDECINE 

1892 


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()'"e ANNEE. JANVIER 1892. N» 1. 


ANNALES 


DE 


L'INSTITUT PASTEUR 


LA PlIilGOCYTOSl MIISCUIAIM 

C'ONTRIIilîTIOX A L'ITI'DE DE l'I.MLiMMATIO\ PARENCnïMATEM 

Par MM. El. METCHNIKOFF et J. SOUDAKEWITCH. 


PREMIERE PARTIE 


ATROPHIE DES MUSCLES PENDANT LA TRANSFORMATION DES BATRACIENS 

rai- M. El. METCHNIKOFF. 
(Avec planches I, II.) 


I 

Dans ces dernières années, l'étude des phénomènes phago- 
cytaires s'est concentrée presque exclusivement sur l'acte de la 
destruction des microbes par les phagocytes. Far contre, le rôle 
de ces éléments dans la série des phénomènes atrophiques n'a 
presque pas été étudié. Et cependant ce rôle, qui est très mani- 
feste, présente un intérêt d'un ordre général. 

Au début de mes recherches sur la phagocytose chez les 
animaux supérieurs, j'ai déjà attiré l'attention des observateurs 
sur l'atrophie des organes de la queue des têtards, due à la des- 
truction des éléments des tissus par les phagocytes. J'ai signalé 
dans une note, parue il y a plus de huit ans \ que notamment 
les muscles et les nerfs des têtards en voie de transformation 

i. Btologisches Centralblatt, 1883, p. 361. 


2 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

sont englobés et digérés par des phag'ocytes dont je n'ai point 
précisé Torigine. 

Occupé par d'autres travaux et ne pouvant par conséquent 
poursuivre ce sujet d'une façon complète, j'ai pensé que d'autres 
observateurs se chargeraient de l'étude détailléedes phénomènes 
phagocytaires dans la métamorphose des batraciens. 

Deux jeunes savants ont abordé ce thème, et ont publié des 
travaux volumineux sur l'atrophie de la queue des têtards dans 
le cours de la métamorphose. 

Le travail de M. Looss ', qui lui a mérité le prix de l'Académie 
de Leipzig, traite des phénomènes de dégénération en général et 
de l'atrophie de la queue des têtards en particulier. L'ouvrage 
de M. Bataillon -^ est une thèse de doctorat et a pour objet la 
métamorphose des batraciens. 

Bien que les résultats de ces deux observateurs se contredisent 
sous beaucoup de rapports, il sont d'accord sur vn point de la 
plus haute importance, à savoir que les muscles sont en plus ou 
moins grande partie digérés par le liquide de la lymphe, et que 
les phagocytes ne jouent dans l'atrophie qu'un rôle tout à fait 
secondaire (Looss, p. 108, Bataillon, p. 38). 

Les deux savants sont aussi unanimes à considérer les pha- 
gocytes qui englobent les muscles, comme des leucocytes. Ils 
m'attribuent la même pensée, quoique je n'aie jamais donné lieu 
à une interprétation semblable. 

Pour M. Looss, dans l'atrophie des muscles, « un concours 
actif de la part des leucocytes ne peut être nullement démontré ; 
la désagrégation s'opère d'une façon tout à fait indépendante, 
comme aussi dans les autres tissus ». (P. 52.) 

D'après cet observateur, c'est la substance qui relie les 
fibrilles qui se dissout la première, de sorte que ces éléments 
se désagrègent, conservant encore leur structure striée. Quelque 
temps après, les muscles se transforment en tronçons irréguliers, 
désignés souvent sous le nom de sarcolytes. Ces fragments, qui 
gardent assez longtemps la striation transversale, se dissolvent 
dans le liquide environnant, comme s'il s'agissait d'une véritable 

1. Ucber Degenerations-Erscheinungen im Thierreich, Preissclirifteii der f. 
lablonoivski'schen Gesellschafl zii Leipzig, n° X, -1889. 

2. Recherches anatomiques et expérimentales sur la métamorphose des amphibies 
anoures. Paris, iS'Jl. 


LA PHAGOCYTOSE MUSCULAIRE. 3 

dig-cstion. Les slries s'effacent, les sarcolyles deviennent 
arrondis et réfringents, et tous les restes du muscle dispa- 
raissent complètement. 

M, Looss ne nie pas que quelques sarcolytes ne se rencontrent 
aussi dans l'intérieur des phagocytes, mais ce fait présente, 
d'après lui, quelque chose de tout à fait accidentel et secondaire. 

D'après une statistique, dressée par M. Looss, il ne se ren- 
contre que 3 de sarcolytes englobés par des phagocytes, 
tandis que 90 à 96 restent parfaitement libres et sans 
rapport quelconque avec ces cellules. 

M. Bataillon ne partage pas du toutcette manière de voir. Pour 
lui, la grande majorité des sarcolytes, environ 9") 0/0, se trouve 
dans l'intérieur des cellules. Et cependant il n'attribue pas une 
grande importance à ce fait, parce que la désagrégation des 
muscles s'accomplit indépendamment des phagocytes, et que 
leur dissolution définitive s'opère par le liquide environnant. 

Les adversaires de la théorie des phagocytes dans la patho- 
log-ie des maladies infectieuses se sont emparés de ces critiques, 
pour souligner que, même dans la partie physiologique de cette 
théorie, l'importance des phagocytes a été démesurément exa- 
gérée'. Dans l'atrophie des organes aussi bien que dans la des- 
truction des microbes, les phagocytes ne joueraient qu'un rôle 
très médiocre et purement secondaire. 

Comme mes premières recherches sur la métamorphose des 
batraciens ont été faites surtout avec les têtards du Bomhinator 
ifineus et de ÏHyla arborea, tandis que MM. Looss et Bataillon se 
servaient d'autres espèces, j'étais d'abord tenté d'admettre que 
la divergence des opinions s'expliquait en partie par le choix du 
matériel. Mes espèces, plus commodes pour l'observation m vivo, 
pourraient fournir des données plus précises que celles employées 
par mes contradicteurs. Voilà pourquoi, en reprenant l'étude de 
l'atrophie de la queue au printempsde 1891, j'ai eu soin de m'a- 
dresser à des espèces plus communes, comme la Rana tempora- 
f/a, qui a servi pour les recherches de M. Looss, et la Rana agilis. 

Les phénomènes de l'atrophie musculaire ont été observés 
sur le vivant, ainsi que sur des têtards traités par l'alcool de 
M. Ranvier (à 1/3) et par le sublimé. 

1. Lubarscb, Centralbl. f. Bactériologie, 1889, t. VI, n' 20. 


4 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

Les queues, traités par l'alcool, ont été dissociées et colorées 
avec la vésuvine, tandis que les organes, traités par le sublimé, 
ont été coupés et colorés par le carmin boracique de M. Gre- 
nacher, ainsi que par d'autres procédés. 


II 


Dans les faisceaux musculaires des têtards de batraciens, c'est 
surtout le sarcoplasma qui mérite d'attirer notre attention. Cette 
partie du contenu musculaire est composée de protoplasma 
amorphe et très linement granuleux, qui remplit les interstices 
entre les fibrilles et se concentre autour des noyaux musculaires. 
L'examen des muscles tout jeunes démontre facilement que le 
sarcoplasma tire son origine du protoplasma de la cellule qui 
donne naissance au faisceau musculaire (PL I, fig, 1, 2). Les 
grains de pigment noir, si fî'équents dans le sarcoplasma, déri- 
vent directement du pigment vitellin de l'œuf et des blasto- 
mères. 

La quantité de sarcoplasma dans les faisceaux musculaires 
des têtards est souvent très considérable. Ainsi on observe des 
petits muscles, dont le sarcoplasma, muni d'appendices proto- 
plasmiques, est presque ou tout aussi volumineux que la partie 
contractile, ou le myoplasma (PI. II, fig. 12). Bien des fois le 
sarcoplasma se concentre à la périphérie du faisceau musculaire, 
autour des noyaux, présentant un aspect bosselé très bizarre 
(PLI, fig. 3; PI. II, fig. 1.3). 

Un autre élément important du faisceau musculaire, ce sont les 
noyaux. Placé dès le début à la périphérie de la cellule (PL I, 
fig. 1, 2), le noyau primitif produit un plus ou moins grand 
nombre d'autres noyaux qui se disposent également à la péri- 
phérie du faisceau musculaire (PL I, fig. 3, 4). 

La substance proprement musculaire ou contractile, le 
myoplasma, occupe la partie centrale du faisceau. 

Les changements des muscles dans la période de la métamorphose 
débutent par une croissance notable du sarcoplasma et des noyaux. 
Le nombre de ceux-ci devient notablement plus grand. Les 
noyaux multipliés se disposent non seulement à la périphérie, 
mais aussi et surtout dans la partie centrale du faisceau (PL I, 


LA PHAGOCYTOSE MUSCULAIRE. 5 

fiii". 6). Le sarcoplasma, qui est généralement lié aux noyaux, les 
suit dans leur déplacement, et se retrouve également dans 
rintérieur du faisceau musc-nlaire, entourant les noyaux (PI. II, 
fig. Lt). 

L'examen des coupes, et surtout celui des muscles vivants ou 
traités par l'alcool de Hanvier, ne laisse aucun doute sur ce que 
Je sarcoijlasma avec les noyaux se dilf'é rende en un certain nombre 
de cellules qui se trouvent placées au milieu des fibrilles. Les cellules 
ainsi formées poussent des prolongements dans les interstices 
entre les fibrilles et disloquent le faisceau musculaire (PL 11, 
fig. 16). 

Celui-ci se transforme ainsi en plusieurs bandes parallèles, 
composées de myoplasma, et en un nombre plus ou moins grand 
de cellules, constituées par le sarcoplasma et les noyaux (PL I, 
fig. 7). 

Dans la suite de ces phénomènes, les cellules sarcoplastiques 
englobent les tronçons du myoplasma, manifestant ainsi leur 
nature phagocytaire. L'étude des coupes (PL II, fig. 16, 17), et 
des muscles dissociés, nous apprend d'une façon tout à fait i^rà- 
cïse que le faisceaumiisculaire entier setransformeemine niasse de pha- 
gocytes, renfermant dans leur intérieur la substance striée du muscle. 

Ces phagocytes musculaires dérivent donc du sarcoplasma avec 
les noyaux musculaires, mis en état de suractivité considérable, 
et ne proviennent nullement des leucocytes. 

M. Loess a donc eu raison d'affirmer que les leucocytes ne 
jouent aucun rôle dans l'atrophie des muscles, seulement il a eu 
tort de confondre les phagocytes avec les leucocytes, et de nier 
l'importance de la phagocytose. Il a eu également tort de m'attri- 
buer la pensée que les phagocytes des muscles ne seraient autre 
chose que des leucocytes. Persuadé, dès le début de mes études 
phagocytologiques, de la variabilité des phagocytes, il ne m'est 
jamais arrivé de les identifier avec des leucocytes. 

L'examen minutieux démontre en réalité que les leucocytes 
ne prennent aucune part à l'atrophie des muscles des têtards. 
Pendant ce phénomène, on n'observe ni diapédèsedes leucocytes, 
ni leur accumulation autour des muscles en voie de métamor- 
phose. Cherchant l'intervention de cellules extramusculaires dans 
les phénomènes d'atrophie, je n'ai pu voir que très rarement les 
éléments du perimysium s'ïns'muer dans la substance musculaire 


6 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

(PL II, fig'. IS). Comme règle générale, ce sont toujours les 
éléments du faisceau musculaire même qui fournissent les pha- 
gocytes. 

Les changements du tissu musculaire, décrits par MM. Looss 
et Bataillon comme préliminaires de l'atrophie, résultent sûre- 
ment de lésions artificielles, occasionnées avec des pinces ou 
d'autres instruments. Ainsi les muscles modifiés, représentés 
par M. Looss sur les fig'ures 32-34 (PI. II), et par M. Bataillon 
sur la figure 27 (PL III) de leurs mémoires, n'ont sûrement rien 
à faire avec l'atrophie normale et ne peuvent être rapportés qu'à 
des organes lésés d'une façon quelconque. 

Ni la dislocation des fibrilles, ni la formation des tronçons 
myoplasmiques, ou sarcohitcs, ne se produisent jamais spon- 
tanément, sans le concours actif des phagocytes musculaires. 
Toute la statistique de M. Looss et ses raisonnements, fondés sur 
cette statistique, doivent être rejetés, comme ne correspondant 
point à la réalité des phénomènes. Sa tentative de se faire une 
idée des choses d'après l'examen des muscles dissociés, prouve 
une fois de plus que cette méthode n'est point applicable pour 
une recherche de ce genre. M. Looss a trouvé dans le raclage 
plus de 90 0/0 de sarcolytes libres, et cependant en réalité il n'en 
existe point du tout, par la simple raison que la formation des 
sarcolytes est due à l'activité des phagocytes. 

Si je ne suis point en état de partager la manière de voir de 
M. Looss, je ne puis non plus m'associer à M. Bataillon, lors- 
qu'il admet que les sarcolytes sont englobés par des simples leu- 
cocytes. Dans un cas de phagocytose aussi prononcé que l'est 
celui de l'atrophie des muscles des têtards, on est naturellement 
tenté avant tout de chercher le rôle des leucocytes. Et cependant, 
plus on approfondit l'étude du phénomène, plus on voit que les 
leucocytes sont complètement étrangers à la production des 
phagocytes musculaires. En admettant le contraire, M. Bataillon 
s'appuie surtout sur l'étude des coupes, dans lesquelles on trouve, 
d'après lui, « toute la gamme des intermédiaires entre les glo- 
bules blancs libres et les globules enveloppant les sarcolytes » 
(p. 51). Bien que l'étude des coupes soiten général trèsinstructive, 
il faut lui associer encore l'observation sur le vivant qui. est si 
facile, non seulement chez les Bombinator et les Hijla, mais aussi 
chez les grenouilles rousses {Rana temporal ia et agilis). Or, cette 


LA PHAGOCYTOSE MUSCULAIRE. 7 

élude combinée démontre de la façon la plus claire la non parti- 
cipation des leucocytes dans les phénomènes d'atrophie qui nous 
intéressent. 

Dans une période tout à fait initiale, lorsque l'aspect extérieur 
de la larve ni de sa queue ne font présumer l'approche de 
la métamorphose, on voit déjà certains faisceaux musculaires 
transformés en amas de phagocytes (PI. I, fig. 8). Et cependant 
ni dans le muscle même, ni dans son voisinage, on n'aperçoit 
jamais d'a!.;gloméralion de leucocytes. Ce n'est point du dehors, 
mais bien du dedans que se fait Tatrophie des muscles, qui s'étend 
lentement d'un faisceau à l'autre, et comprend dans son ensemble 
une période de plusieurs jours. 


III 


Le phénomène essentiel de l'atrophie musculaire des têtards 
se résume donc en ceci : une partie du faisceau, le sarcoplasma et 
les nojjaux, manifeste une suractivité extraordinaire et se développe 
aux dépens du myoplasnm., qui finit par devenir la proie des phagocytes 
sarcoplastiques. 

La destruction du myoplasma s'opère à l'aide d'un processus 
dig-estif qui ne se manifeste jamais en dehors des phagocytes. 
L'observation sur le vivant accuse ce fait d'une façon précise. 
Mais M. Looss pense tout autrement. Il admet que la dig^estion 
des sarcolytes libres, d'après lui) se fait en dehors des cellules, 
dans le liquide environnant. Il s'appuie sur l'observation de 
sarcolytes dégagés de la queue et transportés dans une solution 
de NaCl à 75 0/0, dans laquelle ils s'imbibent et éclatent au 
bout de peu de minutes. M. Looss ne fournit pas de preuves de ce 
que dans l'animal les phénomènes se passent de la même façon. 
L'étude de ces phénomènes par des procédés différents démontre 
que la digestion des sarcolytes chez les têtards se fait beaucoup 
plus lentement. Ainsi l'observation sur le vivant, prolongée pen- 
dant des beures, ne révèle point de chang-ements appréciables, 
tandis que d'après M. Looss (p. 67, PL III, fig'. 42), un sarcolyte 
strié se digérerait complètement en un quart d'heure. 

La digestion des sarcolytes dans les phagocytes musculaires 
demande sûrement une période d'au moins plusieurs heures. Après 


8 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR, 

des stades, dans lesquels les sarcolytes conservent leur structure 
rayée, on en observe d'autres, où ces corps se présentent sous forme 
de fragments arrondis ou ovoïdes, privés de stries, et se colorant 
moins bien par les procédés ordinaires. Les débris musculaires 
se fragmentent ensuite en éléments de plus en plus petits. Pen- 
dant ce processus de digestion intracellulaire, il se forme souvent 
des vacuoles autour des débris musculaires, et la quantité de pro- 
toplasma augmente visiblement (PI. II, fig. 18). 

Avec la marche de la digestion des sarcolytes, le caractère 
cellulaire des phagocytes musculaires s'accentue déplus en plus. 
Ces éléments ne sont plus aussi fragiles qu'au début de leur 
formation, et peuvent être plus facilement étudiés à l'état vivant 
dans l'humeur aqueuse ou dansun autre liquide indifférent (Pl.I, 
fig. ^, 10). On peut s'assurer alors de la façon la plus nette de la 
mobilité amiboïde de ces phagocytes, qui poussent des prolon- 
gements très fins et visiblement mobiles (PI. I, fig li). 

L'application de toutes sortes de réactifs démontre sûrement 
que la digestion des muscles ne se fait point dans un milieu 
acide. L'alizarine sulfacide, réactif si sensible, qui prouve facile- 
ment que la digestion intracellulaire des protozoaires se fait dans 
un milieu acide', ne donne jamais cette réaction chez les phago- 
cytes musculaires. D'un autre côté, la réaction alcaline de ces 
cellules, sous l'influence de l'alizarine sulfacide, n'est pas plus 
prononcée que celle du protoplasme en général. Il est donc très 
probable que la digestion des sarcolytes par les phagocytes 
musculaires doit être rangée parmi les cas de digestion intracel- 
lulaire dans un milieu neutre. 

Les phagocytes musculaires, après avoir absorbé le myo- 
plasma et réduit les sarcolvtes en corps ronds ou ovoïdes et réfrin- 
gents, quittent le lieu de leur formation. On rencontre souvent, 
en examinant la queue des têtards en voie de métamorphose, 
à la place où se trouvaient des faisceaux musculaires, un espace 
libre. Ce fait ne peut être expliqué que par l'émigration des pha- 
gocytes musculaires, ce qui est confirmé par l'apparition d'une 
grande quantité de cellules tout à fait semblables dans la cavité 
abdominale du têtard. 

Au fur et à mesure que la queue diminue de volume, les cel- 

i. V. Le Dantec, ces Annales, i890, p. 776; 1891, p. 163. 


LA PHAGOCYTOSE MUSCULAIRE, 9 

Iules amiboïdes qui la remplissent passent dans la cavité géné- 
rale du corps, y apparaissent sous forme de leucocytes delà 
lymphe. Ces cellules nous présentent donc un ensemble d'élé- 
ments doués de propriétés analogues, mais d'origine diverse. 
Comme parmi ces leucocytes il y a sûrement des phag'ocytes 
musculaires, on conçoit facilement la possibilité de transforma- 
tion d'un certain nombre de cellules amiboïdes en cellules mus- 
culaires. Il serait utile d'étudier avec soin cette question de la 
régénération de muscles striés aux dépens de leucocytes. 

Le tableau de l'atrophie musculaire que nous avons pu 
tracer, ne nous permet pas de pénétrer dans l'intimilé physio- 
logique du phénomène. On voit bien que les premiers pas de ce 
processus accusent une hypertrophie du sarcoplasma, ainsi qu'une 
suractivité de cette partie et des noyaux musculaires, mais on 
n'a aucun droit d'admettre que le myoplasma Représente de son 
côté quelque altération fonctionnelle. Il est vrai que la queue, 
dans la période initiale de l'atrophie musculaire,jouit pleinement 
de ses mouvements, et que l'ien ne fait supposer un trouble phy- 
siologique primaire de son système musculaire. Il est vrai aussi 
que les muscles, même désagrégés en tronçons, présentent 
encore leur striation et leur structure parfaitement normale (PLI, 
fig-. 7). Et pourtant il pourrait bien se faire que le début de l'a- 
trophie soit marqué par quelque altération initiale du myo- 
plasma. Les muscles qui, à l'inspection sur le vivant ainsi qu'à 
l'examen des faisceaux dissociés, présentent un myoplasma 
parfaitement normal, n'accusent plus sur des coupes leurs 
fibrilles avec la môme netteté qu'auparavant (PI. II, fig. 14). Des 
recherches à l'aide des méthodes physiologiques permettront 
peut-être d'approfondir la question. 


lY 


L'atrophie des muscles des batraciens présente un grand intérêt 
non seulement à cause de la facilité avec laquelle on peut étudier 
ce processus, mais aussi parce qu'elle peut servir de type pour 
un grand Tiombre de phénomènes patholog"iques. 

Depuis longtemps on a constaté que dans beaucoup d'affec- 
tions musculaires, les faisceaux présentaient des changements 


10 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 

réguliers dont la signification ne pouvait être saisie. Ce sont 
notamment l'hypertrophie et l'augmentation des noyaux muscu- 
laires, qui ont attiré l'attention des observateurs en leur qua- 
lité de phénomènes constants. Bien des fois on a vu la fragmen- 
tation de faisceaux musculaires en sarcolytes, et souvent on a 
observé la formation de faisceaux remplis de caWuies [M uskelzel- 
lenschlauche des auteurs allemands). Quelquefois on a vu se 
former de véritables cellules géantes dans l'intérieur des fais- 
ceaux musculaires atteints, (^'estainsique M. F. Schultze' a con- 
staté un grand nombre de cellules géantes musculaires dans un 
cas d'atrophie musculaire progressive. 

Quelques observateurs ont déjà accepté comme exacte la 
formation des phagocytes dans les affections musculaires, comme 
dans la fièvre typhoïde ou dans l'atrophie musculaire primaire. 
Ainsi par exemple M. Lévine- cite un cas de formation de pha- 
gocytes aux dépens des noyaux et du protoplasma musculaires. 
Mais il est évident que la notion de la phagocytose musculaire 
doit être beaucoup plus éteudue. 

L'hypertrophie et la multiplication des noyaux, ainsi que la 
formation des cellules géantes musculaires, doivent être consi- 
dérés comme des phénomènes de l'évolution des phagocytes. Dans 
la production des cellules géantes dans n'importe quel foyer 
inflammatoire, les noyaux manifestent une grande activité, 
s'hypertrophient et se multiplient. On ne connaît pas encore le 
véritable sens de ces modifications, et ce n'est qu'à titre d'hypo- 
thèse qu'on peut supposer l'utilité de cette suractivité nucléaire 
dans les phénomènes de digestion intracellulaire. Il faut se rap- 
peler que ce sont justement les noyaux des glandes digestives 
qui présentent souvent un développement extraordinaire. 

Le travail suivant de M. Soudakewitch sur les changements 
dans les faisceaux musculaires sous l'influence des trichines, 
fournit une preuve encore à l'appui de l'interprétation des phé- 
nomènes nucléaires comme acte de l'évolution des phago- 
cytes. 

La formation des sarcoiyles doit être sûrement envisagée 
toujours comme une désagrégation, due à l'activité phago- 


1. Ueb. d. prorpessiven Muskelschwual, Wiesbaden, 1886. 

2. Wratch, ISS'J. 


LA PHAGOCYTOSE MUSCULAIRE. 11 

cytaire. C'est ainsi qu'elle a été conçue par M. Kowalevsky ' 
dans son admirable travail sur la métamorphose des mouches. 
Le même fait a été retrouvé par M. van Reess ^ chez les mômes 
insectes. Comme nous l'avons démontré dans cet article, chez 
les batraciens la formation des sarcolytes se fait toujours, — 
malgré l'assertion contraire de MM. Looss et Bataillon, — grâce 
aux phagocytes qui désagrègent le faisceau musculaire avec 
leurs appendices protoplasmiques. Les cas de formation des 
sarcolytes dans l'atrophie musculaire, la fièvre typhoïde et dans 
d'autres affections des muscles striés, doivent être interprétés 
de la même façon. 

Mais, en dehors de la phagocytose musculaire proprement 
dite, il y a des cas oii les faisceaux sont attaqués par des pha- 
gocytes d'autres espèces, notamment par les leucocytes immi- 
grés. L'exemple de la trichinose, étudié par M. Soudakewitch, 
en fournit une démonstration. Cette phagocytose, pour ainsi 
dire supplémentaire, doit intervenir sur une échelle plus ou moins 
grande dans beaucoup d'autres affections musculaires. Comme, 
d'après la nomenclature de M. Podwyssotsky\, touslesphagocytes 
qui englobent des muscles, sont désignés sous le nom générique 
de mijopliages. on n'a pas le droit d'appliquer ce nom à des pha- 
gocytes musculaires, c'est-à-dire à des cellules qui prennent leur 
naissance aux dépens des muscles mêmes. 

Il serait très intéressant d'étudier de plus près aussi les phé- 
nomènes de phagocytose dans le tissu nerveux. D'après les don- 
nées, recueillies dans la science, ces phénomènes doiventêtre très 
répandus. Dans les atrophies des nerfs on a plusieurs fois 
constaté ^ une hypertrophie et une prolifération des noyaux 
de la gaîne, fait qui doit être rapproché des phénomènes ana- 
logues dans le tissu musculaire. La substitution des éléments 
nerveux, ainsi que la croissance de la névroglie et du tissu con- 
jonctif, examinés au point de vue de la phagocytose, doivent 
sûrement fournir un champ d'investigation très fécond. 

Le résultat principal de cette étude peut être formulé dans 
la proposition suivante : l atrophie musculaire, ainsi que certains 

1. Zeilschrift ftir loissenschaftliclie Zoolojie, 1887, t. 45. 

2. Zoologische lahrbûcher, 1888, t. III. 

3. Jrailé de pathologie générale (en russe), 1891, p. 201. 

4. V. le mémoire de V. Biingner, Beitrdge z.pathol. Anatomie, t. X, 1891, p. 321. 


12 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

processus pathologiques^ présentant le caractère de f'uillammalion 
parenchymateuse {dans le sens le plus strict), doivent être rangés 
dans le groupe des phénomènes phagocytaires. 


EXPLICATION DES PLANCHES 

PLANCHE I 

FiG. l. — Un jeune faisceau musculaire de la queuG d'une \avvc d' A ly tes 
olistetricans, âgée de huit jours. Alcool à 1/3. — Grossissement: oculaire 2, 
système F de Zeiss. 

FiG. 2. — Un faisceau musculaire d'une larve de Rana ayitis. Même 
préparation et même grossissement que dans la fig. 1. 

FiG. 3. — Une partie d'un faisceau musculaire d'un têtard de Rana 
tcrnporaria à la période initale de l'atrophie musculaire. Alcool 1/3. Vésu- 
vine. Ocul. 2. syst. I). 

Fig. 4. — Coupe transversale d'un faisceau normal d'un têtard de 
R. temporaria. Carmin et bleu de méthylène. Ocul. 2, Syst. L'18. 

Fig. 5. — Coupe transversale d'un autre faisceau, avec un sarcoplasma 
très développé. 

Fig. 6. — Coupe transversale d'un faisceau avec un grand nombre de 
noyaux. 

Fig. 7. — Dissociation et englobement du myoplasma par les phago- 
cytes musculaires. Début de l'atrophie musculaire chez le têtard de R. tem- 
poraria. Alcool de Ranvier. Vésuvine. Ocul. 2, syst. F. 

Fig. 8 — Faisceaux musculaires d'une larve de Romt)inator igneus dans 
la période initiale d"atrophie. Pris sur le vivant. Ocul. 3, syst. 7 de 
Hartnack. 

Fig. 9 et 10. — Deux phagocytes musculaires d'une larve de ilyla 
arborea. Ocul. 4, syst. 9 de Hartnark. 

Fig. 11. — Un phagocyte amiboïde d'un têtard de R. esculenta. 

PLANCHE II 

Fig. 12. — Coupes de faisceaux avec beaucoup de sarcoplasma; jR. tem- 
poraria. 

Fig. 13. — Coupes de faisceaux musculaires avec un grand développe- 
ment du sarcoplasma. 

Fig. 14. — Coupe d'un faisceau en voie d'atrophie. Le faisceau renferme 
plusieurs phagocytes musculaires. 

Fig. 15. — Coupe d'un faisceau avec une cellule du perimysium, inva- 
ginée dans le myoplasma. 

Fig. 16. — Englobement du myoplasma par les phagocytes muscu- 
laires. Coupe transversale. 

Fig. 17. — Faisceau transformé en un amas de leucocytes. Coupe 
transversale. 

Fig. 18. — Phagocytes musculaires en train de digérer le myoplasma. 
Coupe transversale. 

Toutes les figures de la planche II ont été faites avec la combinaison 
oc. 2. syst. 1/18. 


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DEUXIEME PARTIE 


MODIFICATIONS DES FIBRES MUSfl'LÂIRES DANS LA TRICHINOSE. 

Par M. J. SOUDAKEVVITCH. 

(Travail du laboratoire de M. Metchnikofi, à l'Institut Pasteur.) 
(Avec Planche III.) 


Un aperçu général des divers phénomènes pathologiques 
inflammatoires des muscles nous montre que les modifications 
survenant dans ce tissu ne sont presque toujours que secon- 
daires. Le processus inflammatoire se localise au déhut dans le 
tissu conjonctif, le perimysium. Ce n'est qu'après une période 
plus ou moins longue que les phénomènes pathologiques s'éten- 
dent aux muscles. 

La trichinose peut au contraire servir d'exemple tout à fait 
frappant d'une lésion primaire desmuscles, d'une myositeparen- 
chymateuse pour ainsi dire. 

Dans cette maladie, les parasites laissent de côté le tissu con- 
jonctif intermédiaire, et pénètrent directement dans les fibres 
musculaires. Ils y siègent en provoquant une modification pro- 
fonde des muscles. 

Le seul fait de pouvoir constater pendant la trichinose des 
phénomènes de myosite parenchymateuse rendait ce processus 
pathologique intéressant par lui-même ; mais il l'est encore plus 
sous d'autres points de vue. 

Il est bien établi aujourd'hui que la phagocytose joue un 
rôle important et préservatif dans toute une série de processus 
pathologiques, provoqués par l'introduction d'êtres étrangers 
dans l'organisme. 

C'est avec une netteté frappante que l'on peut étudier le 
rôle et l'influence des phagocytes dans quelques maladies. 
L'activité phagocytaire est aussi très manifeste dans les phéno- 


U ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

mènes de réaction, provoqués par la présence de tissus nécro- 
sés ou de corps étrangers. 

C'est pourquoi on pouvait s'attendre a priori à trouver de la 
phagocytose dans la maladie provoquée parla trichine. Il restait 
à savoir quels sont ici les éléments cellulaires qui jouent le rôle 
de phagocytes. Comme la dimension des parasites est compa- 
rativement g'rande et qu'il est possible de toujours constater 
s'ils sont vivants ou morts, on devait aussi s'attendre à voir des 
tableaux de phagocytose extraordinairement clairs. 

Toutes ces considérations m'ont poussé à accepter la pro- 
position que me fit M. Metchnikoff d'étudier les modifications 
histologo-pathologiques des muscles dans la trichinose. 

Mes observations furent faites sur les différents muscles des 
rats blancs. J'avais fait ingérer à ces animaux de la viande 
crue d'un porc infecté par des trichines. Cette viande m'avait 
été aimablement procurée par M. le professeur Nocard. Les six 
rats nourris de viande infectée présentèrent, après 3 à 4 jours, des 
symptômes de la maladie sous formes de troubles intestinaux. 

L'un des rats succomba le Séjour à une diarrhée intense. Les 
autres se rétablirent rapidement. Chez un rat, sacrifié par le 
chloroforme une semaine après l'ing-eslion, on trouva une grande 
quantité de parasites dans les mucosités de l'intestin grêle et 
du gros intestin ; mais il n'y en avait encore point du tout dans 
les muscles. On en trouva, au contraire, en abondance dans 
presque tous les muscles d'un rat, tué 26 jours après l'ingestion 
de trichines. Ce sont justement les divers muscles de cet animal 
(les muscles du diaphragme, des extrémités, du dos, le muscle 
masseter, temporal) qui ont servi de point de départ pour mes 
recherches. Je lés faisais durcir dans le liquide de Muller et 
dans l'alcool. 

J'avais à ma disposition, outre les muscles de rat, quelques 
morceaux de ceux d'un homme. Ils avaient été gracieusement 
envoyés à M. Metchnikoff par M. le professeur Lichtheim, de 
Kunigsberg, qui les avait retirés à l'autopsie d'un individu mort 
de la trichinose dans sa clinique, le 7 janvier de cette année. 

Ce cas a été publié, ainsi que les résultats de l'examen 
microscopique des muscles, par M. A. Lévine, dans le 11° 14 du 
Vratch, 1891. 

Pour faire des coupes, j'emboîtais les morceaux de muscles 


LA PHAGOCYTOSE MUSCULAIRE. 15 

dans la paraliine par le procédé habituel. Comme les coupes se 
déchiraient facilement quand elles étaient très minces, j'ai dû en 
faire des séries que je collais sur la lamelle à l'aide d'un mélange 
de 1 de collodion et de 3 d'essence de girofle, 

La coloration était faite parl'hématoxyline-éosine acide gly- 
cérinée d'Ehrlich. On obtenait des résultats tout aussi bons par 
la coloration des coupes avec le carmin borique; la différencia- 
tion étant faite par l'alcool à 70o acidulé avec IICl. Après un 
lavage à l'eau, on colorait pendant3 à 4 minutes dans du bleu de 
méthylène. Les coupes ainsi préparées avaient les noyauxcolorés 
en bleu foncé, la substance musculaire en carmin assez vif, 
même dans le cas où elle était désagrégée en petites parcelles : 
le protoplasme des diverses cellules avait une teinte mixte. 

Sur les préparations des muscles durât, nousavions toujours 
affaire à des stades de modification peu avancés. Dans toute la 
série des coupes examinées, il n'y avait que quelques trichines 
contournées en spirale caractéristique. Les autres trichines, en 
majorité jeunes, n'étaient que légèrement recourbées ou bien 
alignées le long des fibres musculaires. 

Le perimysium était parsemé de petites infiltrations cellu- 
laires nettement délimitées. 

En examinant les coupes avec un faible grossissement, on 
était' frappé de la quantité de grands noyaux ovales à l'inté- 
rieur des faisceaux musculaires. 

Ceux-ci ne sont point ou ne sont que très peu modifiés dans 
la première période de la trichinose. 

J'ai souvent vu que ces faisceaux avaient complètement con- 
servé leur structure striée, leurs noyaux un peu agrandis étaient 
en nombre habituel. 

La trichine était disposée le long du faisceau musculaire, et 
on voyait très distinctement les contours de la cavité qu'elle 
occupait. Très souvent cette cavité était élargie à l'une de ses 
extrémités ou dans toute sa longueur; cela indiquait, évidemment, 
que le parasite avait dû se mouvoir dans l'intérieur du muscle. 

Dans les stades ultérieurs,quand la trichine a déjà des dimen- 
sions plus grandes, la substance musculaire subit certaines modi- 
fications. La striation des muscles disparaît peu à peu ; les 
noyaux ovales commencent à s'agrandir et à se multiplier, ils 
sont disposés tantôt sans ordre, tantôt en groupes, tantôt ali- 


16 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

gués. Ces noyaux se colorent presque toujours très bien par 
l'hématoxyline ou le bleu de méthylène ; ils contiennent un ou 
deux nucléoles plus intensément colorés. 

Nous avions donc affaire à un phénomène très probléma- 
tique : d'un côté on observe la destruction du protoplasme (delà 
substance contractile), d'un autre la multiplication considérable 
des noyaux. 

Ce problème exigeait une solution. 

Mon attention se porta avant tout sur le fait que les noyaux 
se disposent assez souvent, pendant leur multiplication, en 
groupes nettement délimités et isolés. Ensuite on voit, surtout 
dans les préparations colorées par le carmin ou le bleu de méthy- 
lène, que la substance environnant directement les groupes de 
noyaux, se colore un peu différemment du reste de la substance 
musculaire. Elle prend notamment une teinte mixte, comme le 
protoplasme cellulaire. Enfin j'ai observé les tableaux suivants 
sur des coupes longitudinales du masséter: une jeune trichine 
était disposée dans une dos extrémités des faisceaux, la sub- 
stance musculaire était fortement modifiée, sa striation avait 
complètement disparu, son aspect était quelque peu semblable 
à celui qui est dû à la dégénérescence de Zenker : les faisceaux 
musculaires étaient désagrégés en tronçons longitudinaux assez 
grands; ceux-ci étaient divisés par une substance d'un tout autre 
aspect. Elle avait toute les propriétés du protoplasme vivant non 
dégénéré, c'est elle qui contenait les grands noyaux de multi- 
plication. Dans une partie du faisceau musculaire, le protoplasme 
ne s'insinuait qu'à peine entre les tronçons désagrégés ; dans 
une autre il les divisait complètement; le plus souvent il entou- 
rait les tronçons, les englobait pour ainsi dire. 

En examinant l'extrémité du faisceau oii siégeait le parasite, 
je m'aperçus que celui-ci était aussi entouré de grands noyaux en 
quantité notable. Une série de coupes longitudinales et trans- 
versales démontra que les noyaux n'étaient point libres, mais 
aussi contenus dans du protoplasme semblable à celui qui vient 
d'être décrit. 

Les groupes de noyaux avec leur protoplasme environnant 
ne différaient en rien, surtout à l'examen des coupes transversales, 
des cellules géantes typiques. Ils contenaient dans leur centre 
une section oblique ou transversale de la trichine. 


LA PHAGOCYTOSE MUSCULAIRE. 17 

Quelle est donc l'origine des masses protoplasmiques vivantes 
que je viens de décrire? 

Elle nous est indiquée par la structure histologique des 
muscles striés. Nous savons qu'il y a ù l'intérieur du sarco- 
lemme, outre les fibrilles musculaires proprement dites, une 
substance homoi^ène. Elle sert à souder les fibrilles entre elles 
et recouvre la surface interne du sarcolemme d'une couche 
mince, contenant de grands noyaux ; c'est le sarcoplasme de 
Rollet. C'est donc évidemment aux dépens de ce sarcoplasme 
nucléeux que se développent les cellules protoplasmiques g-éantes, 
sous Tiniluence de l'irritation provoquée par le parasite, et 
malgré la destruction des fibrilles musculaires proprement dites. 

Dans les muscles trichinoses del'homme, j'ai pu observer des 
stades de modification plus avancés que ceux qui viennent d'être 
décrits. 

La quantité des parasites était beaucoup moins g-rande ; ils 
se présentaient presque tous contournés en spirale. Les fais- 
ceaux musculaires qui les contenaient étaient très élargis. Il y 
avait d'assez notables infiltrations de petites cellules dans le tissu 
interstitiel, surtout autour des faisceaux tricbineux. 

Les faisceaux musculaires contenaientaussi de grands noyaux 
ovales, qui se coloraient beaucoup moins bien. Les nucléoles 
étaient plus grands et se coloraient par l'éosine. 

Je cherchai naturellement à retrouver ici des tableaux ana- 
logues à ceux que j'avais observés chez le rat. Mais cela ne me 
réussit pas, malgré la grande quantité des coupes examinées : les 
muscles humains semblaient présenter des modifications tout à 
fait particulières. 

La considération suivante me servit de g'uide pour me 
retrouver. La trichine continue de se mouvoir après avoir pénétré 
dans l'intérieur du faisceau. Ceci est étabh par la description de 
latrichinose que j'ai donnée pour le rat, et aussi par le fait qu'en 
grandissant le parasite change sa position rectiligne pour se 
recourber en spirale. 

Il est donc évident qu'il ne faut pas s'attendre à trouver le 
même aspect des tissus que chez le rat, car les stades de trichi- 
nose observés chez l'homme sont beaucoup plus avancés; les 
parasites y sont déjà enroulés en spirale; ils ont donc dû délruire 

2 


18 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

par leurs mouvements les groupes des grandes celliiles envi- 
ronnantes. 

Et réellement un examen attentif des préparations muscu- 
laires de l'homme présente le tableau suivant. La substance du 
faisceau trichineux est notablement modifiée, elle ne se colore 
ni par le carmin, ni par le bleu de méthylène; les noyaux dis- 
posés à l'intérieur du faisceau se colorent faiblement ou pas du 
tout. Ils sont entourés de portions limitées de substance, prenant 
une coloration mixte (comme le protoplasme cellulaire), et 
tranchant visiblement avec la substance dégénérée. Les proto- 
plasmes entourant les divers noyaux se fusionnent à l'aide de 
prolongements tantôt minces et filiformes, tantôt épais et irré- 
guliers. On aperçoit dans les mailles irrégulières du réseau ainsi 
formé des amas de substance musculaire dégénérée ne prenant 
pas de coloration. En un mot, grâce au mouvement de la 
trichine, de la substance musculaire des faisceaux se trouvait 
entremêlée avec la substance sarcoplastique moins modifiée. 
Dans quelques-uns des faisceaux, la substance sarcoplastique 
s'était conservée en amas plus grands, contenant de 3 à 
6 noyaux. Mais on ne trouvait naturellement jamais de groupes 
cellulaires intacts comme chez le rat. 

L'examen parallèle des muscles du rat et de ceux de l'homme 
démontra la dégénérescence graduelle du sarcoplasme entourant 
les noyaux. Ce sont ces noyaux qui résistent le plus longtemps; 
mais eux aussi finissent par dégénérer. Ils deviennent libres et 
subissent une série de modifications spéciales, semblables à 
celles décrites dans l'article de A. Lévine. 

Les modifications des faisceaux trichineux aboutissent donc 
au dépérissement complet du faisceau musculaire dans toutes 
ses parties. 

A côté de pareils faisceaux, on en trouvait d'autres, chez le 
ratet surtout chez l'homme, qui ne contenaient point de trichines, 
mais avaient subi néanmoins la dégénérescence de Zenker. 
Je n'ai pas de données directes sur l'origine de cette dégéné- 
rescence. Est-elle due, comme le croit Lévine, aux produits 
élaborés par la trichine, ou simplement au passage de celle-ci à 
travers des faisceaux ? 

Dans tous les cas, ces faisceaux, ainsi que (quoique plus rare- 
ment) les faisceaux trichineux complètement détruits, se com- 


LA PHAGOCYTOSE MUSCULAIRE. 19 

portent comme des corps étrangers, provoquant une réaction de 
la part des éléments environnants. 

Les faisceanx rtaiiMit entourés à leur périphérie de petites 
cellules, à noyaux taiîtôt ronds et réguliers, tantôt lobés. 

Une grande quantité de ces cellules s'insinuait dans les 
fissures produitesle longdes faisceau.x, dont les bords présentaient 
des entailles semi-lunaires ou presque rondes, remplies de leu- 
cocytes. Les contours de ces faisceaux devenaient de plus en 
plus irréguliers, comme rongés; les fissures longitudinales et 
transversales s'accentuaient de plus en plus, de sorte que le fais- 
ceau finissait par se désagrég-er en petits tronçons de substance 
musculaire, entourée par de nombreux groupes de leucocytes. 
(Les tronçons conservaient la coloration du carmin.) On voyait, 
à l'aide de forts grossissements, que les petits amas isolés des 
tronçons étaient eng-Iobés dans le protoplasme des leucocytes 
agrandis. On rencontrait quelquefois, parmi les petites cellules, 
des cellules géantes typiques, contenant des parcelles du fais- 
ceau musculaire. De pareils tableaux étaient démonstratifs au 
même degré sur les coupes long-itudinales et transversales. 

Je me borne pour le moment aux deux phénomènes exposés 
dans cet aperçu de la trichinose musculaire. Nous voyons, d'après 
cette description, que les faisceaux musculaires, indépendamment 
du tissu intermédiaire, réagissent eux-mêmes envers l'irritation 
provoquée parla trichine. Bientôt après l'introduction duparasite, 
la substance contractile subit des modifications de dégénéres- 
cence; la partie sarcoplastique du faisceau aug-mente de volume, 
ses noyaux se multiplient, etles masses cellulaires ainsi formées 
et semblables à des plasmodes entourent les régions dégénérées. 
Une autre partie du sarcoplasme à noyaux multiples s'amasse 
autour de la trichine en formant une espèce de grande cellule 
géante. 

Nous avons donc devant nous une activité des phagocytes, 
qui se sont développés à l'intérieur et directement aux dépens du 
faisceau musculaire. 

Cette activité énergique des phagocytes musculaires n'est 
pourtant pas de longue durée. La trichine détruit bientôt par ses 
mouvements toutes les cellules vivantes, etles mélange aux restes 
de la substance musculaire détruite antérieurement. Dans ce cas, 
comme dans celui où toutes les parties du faisceau musculaire 


20 > ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

dégénèrent en même temps, ce sont les phagocytes étrangers, 
les leucocytes, qui s'introduisent dans le faisceau. Ils le désa- 
grègent en petits morceaux qu'ils englobent ensuite. 

Ce sont là, en somme, les modifications les plus intéressantes 
et importantes qui ont lieu dans les muscles trichineux. Elles 
nous expliquent suffisamment et laprésence de noyaux libres dans 
les faisceaux, et le développement endogène des cellules, décrit 
par A. Lévine, et qui paraissait si problématique à première vue. 

Il va sans dire que les phénomènes décrits n'épuisent pas 
toutes les modifications que subissent les muscles trichineux. On 
y observe des phénomènes d'atrophie simple, de vacuolisationet 
de dégénérescence graisseuse. La description détaillée de ces 
modifications, ainsi que celle des stades plus avancés de lamaladie 
où a lieu la formation de la capsule du parasite, fera le sujet 
d'un autre article. 


EXPLICATION DE LA PLANCHE IIL 

Toutes les figures ont été faites avecl'oculaire 3 et les systèmes 3 et 4 de 
Verick; sauf pourtant la fig. 7, faite avec le système 9 de Hartnack. 

FiG. 1. — Un faisceau musculaire nécrosé, transformé en tronçons à 
l'aide de leucocytes. Dans certains endroits on voit des leucocytes, en- 
trés dans l'intérieur des tronçons musculaires et logés dans une sorte de 
vacuole. Dans la partie inférieure de la figure, on observe une fissure 
longitudinale du faisceau. Trichinose de l'homme. Cas de la clinique de 
M. le professeur Lichtheim. Carmin borate et bleu de méthylène. 

FiG. 2. — Faisceau musculaire d'un rat blanc. Le sarcoplasma hyper- 
trophié avec des noj'aux multipliés entoure des tronçons nécrosés de la 
substance contractile. Hématoxyline-éosine d'Ehrlir.h. 

Fig. 3. — t^aisceau semblable au précédent, avec une larve de trichine 
dans l'intérieur. Autour de la trichine on constate une agglomération de 
noyaux sarcoplastiques. Même traitement que dans la fig. 2. 

Fig. 4. — Coupe transversale d'un faisceau semblable à celui de la 
fig. 1. Carmin, bleu de méthylène. 

Fig. 5. — Coupe transversale d'un faisceau, dont la substance contrac- 
tile a été, à la suite des mouvements du parasite, mélangée avec fe sarco- 
plasma (plus foncé). Celui-ci présente en a les noyaux musculaires, dans 
lesquels on peut observer la r dégénérescence érythrochromatique des 
nucléoles », de M. Lévine. Trichinose de l'homme. Carmin et bleu de 
méthylène. 

Fig. g. — Coupe longitudinale d'un faisceau semblable à celui de la 
fig. 5. Dans rinlérieur du faisceau se trouve une trichine contournée. Le 
sarcoplasma avec les noyaux entoure le^ parasite de tous les côtés. Tableau 
très net d'un mélange de la substance contractile nécrosée avec le sarco- 
plasma. Trichinose de l'homme. Carmin, bleu de méthylène. " 

Fig. 7. — Un leucocyte renfermant un tronçon d'un faisceau nécrosé et 
dissocié. Tricliinose de l'homme. Carmin, bleu de méthylène. 


ACTION 
!)E L\ IIESSKTATKIN, DE L'AIlt, ET IIE LA lUMlÈIiE 

SliR LA Wmîmii flIAHiiO.WEl'SE FILAMENTEUSE, 

Par m. L. MOMONT. 

(Travail du laboratoire de M. Roux, à l'Institut Pasteur.) 


La manière dont les microbes pathogènes supporleiit l'action 
des agents physiques et cosmiques offre un grand intérêt pour 
l'étiologie des maladies contagieuses. Aussi de nombreuses 
recherches ont été faites sur l'influence de l'air, de la chaleur 
et de la lumière sur les divers organismes microscopiques. La 
bactéridie charbonneuse, qui a été le premier microbe pathogène 
bien connu, a servi souvent dans ces études. Le plus grand 
nombre des expérimentateurs ont porté leurs investig-ations sur 
les spores du bacillus anihracis, qui jouent le rôle le plus impor- 
tant dans la propagation du charbon. La résistance de la bacté- 
ridie filamenteuse aux divers agents a été moins étudiée, et les 
données que l'on trouve sur ce sujet sont souvent contra- 
dictoires. Nous avons repris cette étude en nous efforçant do 
disting:uer l'action exercée sur le mycélium du bacillus anihracis 
par la dessiccation, la chaleur, la lumière et Toxygène de l'air. 

I 

RÉSISTANCE A LA DESSICCATION DE LA BACTÉRIDIE FILAMENTEUSE 

SANS SPORES. 

Davaine cite des exemples de sang- charbonneux desséché 
encore virulent après un an et plus. Pour lui, l'étiologie du 
charbon s'expliquait par la long-ue vitalité de la bactéridie dessé- 
chée. Après la découverte de la spore charbonneuse par M. Koch, 


22 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

on interpréta d'une façon nouvelle l'expérience de Davaine. Les 
spores, qui n'existent jamais dans le corps de l'animal au moment 
de la mort, se forment facilement dans le sang sorti du cadavre 
et exposé au contact de l'air, à une température de 20° environ. 
Ces conditions se trouvaient peut-être réalisées dans les expé- 
riences de Davaine, qui aurait alors opéré, à son insu, non plus 
avec de la bactéridie mycélienne, mais avec des spores. Cepen- 
dant, si Davaine n'indique pas comment il desséchait le sang, 
il dit que la dessiccation était rapide, et dans ces circonstances 
on ne comprend pas comment les germes ont pu se former. 
M. Koch déclare que du sang charbonneux desséché en couche 
mince ne renferme plus de bactéridies vivantes après 30 heu- 
res. Il est évident que des expériences qui aboutissent à des 
résultats aussi différents ont été faites dans des conditions 
dissemblables. Nous avons essayé, dans ce qui va suivre, d'étu- 
dier d'une façon précise la résistance de la bactéridie filamen- 
teuse à la dessiccation. 

Résistance de la bactéridie filamenteuse dans le sang charbonneux. 

Dans cette série d'expériences, nous avons employé tantôt des 
bactéridies ordinaires, tantôt des bactéridies de la race asporo- 
gène. La dessiccation était rapide, faite à basse température et 
à l'abri de l'air : les spores ne[)ouvaient donc pas se former. 

Expériences. — Le sang recueilli dans le cœur d'un lapin mort 
du charbon est distribué dans des tubes à essai stérilisés, fermés 
par un tampon de coton. Chaque tube reçoit une goutte de sang 
qui est étalée aussi également que possible sur sa paroi interne. 
Les tubes ainsi préparés sont placés dans un exsiccâteur à vide, 
sur l'acide sulfurique pur. Le vide est obtenu rapidement au 
moyen d'une trompe à eau, la dessiccation est accomplie en quel- 
ques instants. Mais on ne retire les tubes qu'après 12 heures, 
pour être assuré qu'ils ne renferment plus trace d'humidité. 
Une partie est conservée au contact de l'air qui pénètre à travers 
le tampon de coton. Le vide est fait dans les autres tubes au 
moyen de la trompe à eau, avec rentrées successives d'hydro- 
gène (jusqu'à 7 et 8 fois), et ils sont scellés à la lampe privés de 
gaz. Les tubes sont alors placés, par moitié, à l'étuve obscure 
à 33", et dans une armoire à la température de la chambre. Tous 
les deux jours on prélève un tube de chaque catégorie, on y 


ACTION DE LA DESSICCATION, DE L'AII{, ETC. 2;j 

introduit du bouillon et ou le met à l'étuve à 33" pour voir s'il y 
a culture. 

Voici les résultats obtenus : 

[A] Sang desscché., conscrvi' à la température de la chambre 
(16° à 22°). 

1° Au contact de l'air. Durée maxima de la bactéridie : 
57 jours. La dernière culture s'est faite avec un retard de 
24 heures. Inoculée à un cobaye, elle le tue en 30 heures; la 
virulence n'est donc pas atténuée. 

2° Dans lo vide. Durée maxima de la bactéridie : 48 jours. 
, (^} Samj desséché, conservé à l'étuve à 33°. 

1° Au contact de l'air. Durée maxima de la bactéridie : 
45 jours. La dernière culture se fait avec un retard de 3 jours. 
Elle tue un cobaye en 37 heures. 

2° Dans le vide. Durée maxima de la bactéridie : 50 jours, 
La dernière culture tue un cobaye en 36 heures. 

Dans une deuxième série d'expériences, les résultats obtenus 
furent très concordants : 

i" A l'air à IG^-ââ", la durée maxima de la bactéridie fut de GO jours. 

Dans le vide à 160-22°, — fut de 48 jours. 

2° A l'air à 33°, la durée maxima de la bactéridie fut de 48 jours. 

Dans le vide à 33°, — fut de 52 jours. 

Les dernières cultures inoculées tuèrent les cobayes dans 
l'espace de 30 à 36 heures. 

La dessiccation suffit donc à tuer la bactéridie filamenteuse, 
même en dehors de l'action de l'air, si elle est assez prolongée. 
Lorsque la température est élevée, l'action de Tair est plus mar- 
quée, et alors la bactéridie vit plus longtemps dans le vide. Au 
contraire, à basse température, elle a résisté plus long-tem])s à 
l'air que dans le vide. 

Des fils de soie stérilisés et imprégnés de sang- charbonneux 
d'après le procédé de M. Koch, ont été desséchés rapidement 
dans le vide sur l'acide sulfurique, puis conservés dans un tube 
à essai fermé par un tampon de coton, à une température de 16° 
à 22° à la lumière diffuse. La durée maxima de la bactéridie fut 
dans ces conditions de 70 jours. La dernière culture tuait un 
cobaye en 36 heures. Si on introduit directement un fragment 
de ces fils de soie sous la peau d'un cochon d'Inde, celui-ci 


21 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

n'éprouve aucun mal lorsque le fil est préparé depuis une dizaine 
de jours. Ce même fil porté dans du bouillon donne une culture. 
On pourrait donc supposer que la bactéridie qu'il contient est 
atténuée par la dessiccation. 11 n'en est rien, car la culture 
inoculée aux coba3'es les fait toujours périr. Les bacilles dessé- 
chés, introduits sous la peau avec le fil, ne se rajeunissent que 
lentement; ils sont englobés par les cellules migratrices et digé- 
rés avant d'avoir pullulé, mais leur virulence est intacte puis- 
qu'elle se retrouve dans la culture. 

Action des températures élevées sur le sang charbonneux desséché. 

La température de So^-SS" suffit pour tuer en une heure 
toutes les bactéridies contenues dans du sang charbonneux frais; 
dans le sang- desséché les bacilles résistent à une chaleur beau- 
coup plus élevée. Davaine avait remarqué qu'une température 
voisine de 100° ne fait pas perdre sa virulence au sang char- 
bonneux sec. Dans les expériences de Davaine, dont les condi- 
tions ne sont pas bien précisées, on peut toujours supposer la 
présence des spores charbonneuses. Nous avons repris ces 
essais en chautfa)it, dans une étuve de Gay-Lussac bien réglée, 
des tubes contenant du sang charbonneux desséché, et aussi des 
lamelles de verre stérilisées sur lesquelles le sang était étalé en 
couche mince bien sèche. A 92°, la plus longue survie des bacilles 
a été d'une heure et demie, qu'ils soient maintenus au contact de 
l'air ou chauffés dans le vide. Le résultat a été le même avec le 
sang de cobayes tués parla bactéridie ordinaire ou parla bacté- 
ridie asporogène. Pour stériliser par la chaleur sèche des objets 
souillés par du sang charbonneux, il faudrait donc les maintenir 
au voisinage de 100° pendant un temps assez long, pendant près 
de deux heures. 

Résistance du sang charbonneux sans spores, conservé à l'état 
humide à 33°. 

Du sang charbonneuxrenfermant la bactéridie asporogène est 
conservé dans des tubes à essai, munis de tampons de coton et 
fermés à la lampe. Dans ces conditions, le sang se maintient 
humide dans une atmosphère limitée d'air; les bacilles y ont 


ACTION DE LA DESSICCATION, DE L'AIR. ETC. 25 

perdu leur vitalité au bout de TiO jours. Ils vivent donc à peu 
près le même temps à l'air, à 33°, en milieu humide, que lors- 
qu'ils sont desséchés. 

Le même sang' charbonneux, enfermé dans des ampoules de 
verre complètement remplies et scellées à la lampe à leurs extré- 
mités effilées, contenait encore dos bactéridies vivantes après 
(10 jours. A une température plus élevée, la mort de la bactéridie 
survient plus vite : MM. Pasteur et Perdrix ont en effet montré 
que du sang- charbonneux mis en tubes scellés, sans air, ne 
donne plus de culture après quelques jours passés à 4.5°. 

Il peut paraître surprenant qu'à l'air la bactéridie ait péri 
plus vite que dans les tubes clos; puisqu'elle est aérobie il sem- 
ble qu'elle dût mourir plutôt dans les tubes sans air où elle ne 
peut pas végéter, que dans les tubes aérés oii elle peut se repro- 
duire. Ce résultat tient sans doute à ce que, en présence de l'air, 
les bacilles charbonneux ont élaboré des substances chimiques 
qui finissent par nuire au myeéhum, tandis que dans les tubes 
clos ils sont restés sans activité, à l'état de vie latente. 


II 

RÉSISTANCE A LA DESSICCATION DES CULTURES CHARBONNEUSES 
SANS SPORES. 

Des essais semblables à ceux que nous venons de rapporter 
sur le sang- charbonneux ont été faits avec des cultures de bacté- 
ridies en bouillon. Pour être bien certain que celles-ci ne con- 
tenaient pas de spores, nous avons employé la race de bactéri- 
dies asporogènes découverte par MM. Ghamberland et Roux, et 
qu'il est facile d'obtenir en ensemençant du sang- charbonneux 
ordinaire dans du bouillon légèrement phéniqué. Ces bactéridies 
sans spores sont aussi virulentes que les bacilles sporogènes. 

Une goutte de culture récente (36 heures) était déposée dans 
des tubes à essai et desséchée comme nous l'avons fait pour le 
sang dans les expériences précédentes. 

La vitalité des bactéridies persista à la lumière diffuse : 

l" A l'air, h la température de IB^-ââ", pendant 18 jours. 

Dans le vide, — — 16 — 

1° A rair,àla tempéralurede33°à l'obscuritépendant 12 

Dans le vide, — — 8 — 


26 ANNALES DE LINSTITUT PASTEUR. 

Dans une deuxième expérience, la plus longue durée de la 
vie fut : 
1" A l'air, à la température de 16"-2:2'', à la lumière diffuse, de 21 jours. 

Dans le vide, — — — 17 — 

2'^ A l'air, à la température de 33". à l'obscurité de iO — 

Dans le vide, — — — 12 — 

Dans une culture en bouillon desséchée, labactéridie résiste 
donc beaucoup moins que dans le sang desséché. On ne peut pas 
expliquer cette différence par un affaiblissement de la race aspo- 
rogène qui a servi dans les expériences, car labactéridie aspo- 
rogèue contenue dans le sang résiste aussi bien à la dessiccation 
que la bactéridie sporogène ordinaire. 

Peut-être, dans le sang desséché, la bactéridie est-elle 
mieux protégée parla couche albumineuse qui Teutoure? Pour 
vérifier cette supposition, nous avons refait l'expérience en 
ajoutant à la culture, au moment de la dessécher, .50 0, Ode 
sérum de sang de mouton. 

La présence d'albumine autour de la bactéridie n'a pas pro- 
longé sa vie de beaucoup. La plus longue durée a été : 

1" A l'air à 16°-22o, à la lumière diffuse, de 23 jours. 

Dans le vide, — — 23 — 

2" A l'air à 33", à l'obscurité, — de 1-4 jours. 

Dans le vide, — — 13 — 

La survie dans le milieu albuminé n'est que de quelques 
jours. La protection dune couche d'albumine n'explique pas les 
différences observées entre le sang charbonneux et la culture en 
bouillon, desséchés. Il faut peut-être faire entrer en compte 
l'action des substances dissoutes dans le bouillon (sels et autres) 
qui pendant l'évaporation se concentrent et nuisent aux bacilles. 
Quoiqu'il en soit, il est acquis que les bactéridies filamenteuses 
se conservent vivantes beaucoup plus longtemps dans le sang 
desséché que dans les cultures en bouillon, desséchées dans les 
mêmes conditions. 

Résistance, aux températures élevées, des bactéridies sans spores^ 
cultivées en bouillon. 

La moindre résistance des bactéridies filamenteuses cultivées 
en bouillon se retrouve encore lorsqu'on les soumet aux tempé- 
ratures élevées. Dans trois essais, elles étaient mortes après 
i 2 heure de chauffage à 86°, oO minutes de chauff'age à 73'^, et 
40 minutes de chautlai;e à 8Ù\ 


ACTION DE LA DESSICCATION, DE L'AIR, ETC. 27 

III 

ACTION DE LA LUMIÈRE SOLAIRE SUR LA BAC.TÉRIDIECH ARBONNEUSE. 

L'action de la lumière sur le développement des microbes a 
été mise en évidence par un grand nombre d'expériences. La 
plupart des organismes microscopiques cessent de se développer 
quand ils sont exposés à la lumière solaire (Downes et Blunt) * ; 
mais la résistance à l'insolation varie non seulement avec les 
espèces, mais suivant l'état de sécheresse ou d'humidité; elle 
estbeaucoup plus grande pour les spores que pour les mycéliums 
(Duclaux "). Pour la bactéridie charbonneuse, ce dernier résultat 
paraissait contredit par les expériences de M. Arloing- ^ qui a vu 
que du bouillon contenant des spores restait stérile, lorsqu'on le 
mettait à l'étuve, après deux heures d'exposition au soleil de 
juillet. Les cultures mycéliennes, au contraire, étaient encore 
vivantes après 27 et 30 heures d'insolation dans les mêmes con- 
ditions. M. Straus * a trouvé que les spores de charbon, en sus- 
pension dans Teau pure, résistaient longtemps à l'action du soleil, 
et la véritable interprétation de l'expérience de M. Arloing- a été 
donnée par M. Roux ', qui a fait voir que les spores insoléesdans 
le bouillon ne croissaient pas, non parce qu'elles avaient péri, mais 
parce que le bouillon exposé au soleil était devenu impropre à leur 
germination par suite de modifications chimiques que l'air et la 
lumière lui avaient fait subir. 

D'autres expérimentateurs, comme J\I. Gaillard ® à Lyon et 
Pansini ' à iNapies, ont traité le même sujet. M. Pansini exposait 
au soleil des cultures sur gélose et sur pommes de terre. Cette 
méthode est défectueuse, car, ainsi que M. Duclaux ^ Fa fait 
observer, la lumière ne pénètre pas dans les couches profondes 

4. Proceedinrjs of Royal Society, t. 26, p. 4-88, 1877. — T. 27, p. ■199, 1878. 
14. 1886. 

2. Comptes rendus, t. C. et CI. Acad. des se. 

3. Comptes rendus, t. C. et t. CI, Acad. des se. et Archiv. Phijs., 1886. 

4. Société de bioloyie, 1886, p. 473. Voir Straus, Charbon de l'homme et des 
animaux. 

b. Ces Annales, 1887. 
6. Thèse Lyou, 1888. 
T. liicista d'Igiene, 1889 
8. Ces Annales, 1889. 


28 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

des cuUures. M. Pansini a obtenu des résultais plus intéressants 
en insolant des cultures en gouttes suspendues, et en les ense- 
mençant ensuite dans la gélatine. Il a vu le nombre des colonies 
décroître rapidementàmesure que le temps d'insolationaugmente, 
mais il ne sépare pas l'action de la lumière de celle de l'air, et ne 
donne pas d'indications suffisantes sur la résistance des spores 
comparée à celle de la bactéridie filamenteuse. 

Résistance à la lumière, du sang charbonneux et des cultures sans 
spores desséchées. — Dans toutes nos expériences, le sang ou les 
cultures ont été desséchés dans des tubes à essai comme nous 
l'avons dit plus haut. Les tubes étaient suspendus sur une ter- 
rasse isolée, en plein soleil, à un mètre du sol. Au milieu d'eux, 
un tube contenant un thermomètre indiquait la température, qui 
durant les expériences, a varié de 23*' à 3o° pendant les heures 
d'insolation (mois de mai, juin et juillet). Les chiffres que 
nous donnons n'ont pas une valeur absolue, ils varient avec 
l'intensité de la lumière, le milieu de culture, les bacilles 
employés, et même avec le nombre des cellules microbiennes 
exposées, car toutes ne périssent pas en même temps, etc. ; mais 
ils sont comparables entre eux, car nous avons toujours 
fait simultanément et dans les mêmes conditions, les expé- 
riences dont les résultats devaient être rapprochés. Ceux-ci font 
donc ressortir nettement l'influence des divers agents que l'on a 
mis en action. 

1 ° Résistance des bactéridies sans spores dans le sang charbonneux 
sec. — La durée maximum de la vie chez les bactéridies insolées, 
a été 

1" Dans le sang desséché au contact de l'air. ... 8 heures. 
La dernière culture s'est faite avec un retard de 48 heures. 
2" Dans le sang desséché dans le vide Il heures. 

La dernière culture s'est faite avec un retard de 24 heures. 

Des cobayes inoculés avec ces cultures sont morts en 
36 heures. Ni dans l'un ni dans l'autre cas il n'y a eu d'atté- 
nuation. 

Par comparaison, nous avons insolô le même sang- charbon- 
neux maintenu humide dans des tubes à essai fermés à la lampe 


ACTION T>K LA DESSICCATION, DE L'AIR, ETC. 29 

et pleins dair. La bactéridie y a péri, une foisaprès 12 heures, et 
après 14 heures dans un deuxième et un troisième essai. 

Au lieu de dessécher le sang- sur la paroi de tubes de verre 
et sous ractiou du vide sec, nous en avons imprégné des mor- 
ceaux de papier buvard stérilisé qui furent placés dans des 
verres flambés laissés au soleil. Toutes les heures, des frag- 
ments de ce papier étaient ensemencés dans du bouillon et 
d'autres introduits sous la peau de cobayes. Les papiers insolés 
1 heure, 2 heures, 3 heures... jusqu'à 15 heures, amenèrent 
la mort des cobayes dans un temps qui a varié de 3G heures à 
3 jours. Après 16 heures d'insolation, le papier inoculé directe- 
ment ne tua plus les cochons d'Inde, mais donna des cultures 
qui étaient virulentes. 

La même expérience fut faite en étalant du sang en couche 
mince sur des lamelles stérilisées que l'on exposait ensuite au 
soleil. Au bout de 6 heures 1/2 d'insolation, un fragment de 
lamelle introduit dans le tissu cellulaire d'un cobaye ne lui 
donne pas le charbon. Un autre morceau de la même lamelle 
est mis dans du bouillon : il se développe des bactéridies qui sont 
virulentes pour le cobaye. Les bactéridies protégées par les 
fibrilles du papier sont mortes moins rapidement que celles 
étalées sur le verre. 

2° Résistance à la lumière des bactéridies sans spores, cuUivéesdans 
le bouillon et desséchées. — Dans deux séries d'expériences, la 
durée maxima de la vie a été : 

l'e série. 2c série. 

1" Culture sèche iusolée à l'aii". ... 5 heui'cs 1/2 5 heures. 
2" — — dans le vide. G h. 1/2 6 h. 1/2. 

Les cultures étaient âgées de 24 heures quand elles furent 
desséchées, les bacilles étaient donc jeunes. Nous avons remar- 
qué qu'ils résistaient plus longtemps que les bacilles âgés. 

Les mêmes cultures furent additionnées de 50 0/0 de sérum 
puis desséchées et insolées; la durée de la vie fut : 

\° A l'air 4 heures. 

2° Dans le vide 7 — 

ri^ Action de la lumière sur la bactéridie sans spore, cultivée dans 
le bouillon et à l'état humide. — Nous avons exposé au soleil les 
mêmes cultures de bactéridie asporogène, dans des tubes scellés 


30 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

à la lampe et pleins d'air. Chaque tube contenait une goutte de 
culture qui ne pouvait pas se dessécher. Par comparaison, nous 
avons mis au soleil des tubes étroits contenant environ 1/2 cen- 
timètre cube de culture. Ils étaient pleins de liquide, ne con- 
tenaient pas d'air et étaient scellés à la lampe à leurs extrémités 
effilées. 

La durée maxima de la vie fut pour les bactéridies insolées, à 
l'état humide, au contact de l'air, de 2 heures 12; les bactéridies 
sans air étaient encore vivantes après 50 heures d'insolation. 

Ces chitîres montrent d'une façon frappante que la lumière 
seule a peu d'action sur les bactéridies mycéliennes humides, 
mais que les rayons solaires favorisent beaucoup l'action de l'air. 
Les dernières cultures obtenues étaient très virulentes pour les 
cobayes, 

4° Action de la lumière sur les spores. — Des spores sèches, 
insolées pendant plus de 100 heures au contact de l'air, donnaient 
encore des cultures avec un retard de 1 à 4 jours. Ces cultures 
étaient virulentes. Des spores sèches de même origine, insolées 
pendant plus de 100 heures dans le vide, germaient dans le 
bouillon, et, rajeunies, faisaient rapidement périr les cobayes. 

Des spores mises en suspension dans l'eau pure, au contact 
de l'air (uns goutte d'eau chargée de spores dans un tube à essai 
scellé), ont péri après 44 heures d'insolation; dans un tube étroit 
privé. d'air, elles étaient vivantes encore après 110 heures d'expo- 
sition au soleil. Les cultures de ces spores étaient virulentes 
dans les deux cas. 

Les spores charbonneuses sèches résistent donc très long- 
temps à l'action de la lumière, soit à l'air, soit à l'abri de l'air. 
Les spores humides périssent assez rapidement quand, à l'action 
de la lumière, se joint celle de l'air; elles vivent très longtemps 
au soleil si on les soustrait à l'influence de l'air. Nos résultats 
confirment donc sur ce point ceux qui ont été publiés déjà par 
M. Roux. 

CONCLUSIONS. 

La bactéridie, sans spores, contenue dans le sang desséché, 
peut rester vivante pendant plus de soixante jours à la tempé- 
rature ordinaire. Elle résiste à un chaulîage de plus d'une 
heure et demie à 92°, 


ACTION DE LA DESSICCATION, DE L'AIR, ETC. 31 

La bacléridie sans spores, cultivée dans le bouillon, résiste 
moins bien à la dessiccation que celle qui est contenue dans le 
sang charbonneux. 

L'action de Tair est peu marquée sur les bactéridies dessé- 
chées. Ces bactéridies desséchées, conservées à l'air ou à l'abri 
de l'air, meurent sans avoir présenté d'affaiblissement dans leur 
virulence. 

Les bactéridies sans spores et desséchées meurent plus vite 
à la lumière solaire qu'à la lumière diiïuse. Les bacilles de cul- 
ture périssent plus vite que ceux contenus dans le sang. A la 
lumière, l'action de l'air contribue à tuer les bactéridies sèches. 
Elles meurent sans que les dernières cultures montrent un 
aflfaiblissemetit dans la virulence. 

L'action de l'air sur le mycélium bactéridien humide est très 
exaltée sous l'influence de la lumière ; la lumière seule, sans air, 
a peu d'action sur les bactéridies filamenteuses humides. 

Les bactéridies filamenteuses humides, exposées à l'influence 
de la lumière et de l'air, périssent sans que les dernières cultures 
obtenues cessent d'être virulentes. 

Lesbactéridiesmycéliennessèches ou humides, résistentbeau- 
coup moins longtemps à l'actiou de la lumière et à celle de l'air 
que les spores. 

Les spores sèches supportent très longtemps l'action de la 
lumière et de l'air sans périr et sans perdre leur virulence. Les 
spores humides résistent très longtemps à l'insolation à l'abri 
de l'air, elles meurent beaucoup plus vite quand elles sont 
insolées au contact de l'air, sans présenter d'atténuation avant 
leur mort. 


LE muM 

AU MOYEN 

DES AIBIJMOSES EXTRAITES I)ES CIJlTIiRES, 

Par m. PETERMANN. 

(Travail du laboratoire de M. Roux, à l'Institut Pasteur.) 


Les curieuses expériences dans lesquelles M. Hankin a réussi 
à conférer l'immunité contre le charbon, à l'aide d'injections 
préalables d'une albumose extraite des cultures du bacille char- 
bonneux dans des bouillons additionnés de fibrine, ont tellement 
frappé l'attention des savants, et ont une portée si grande, qu'il m'a 
paru utile de les recommencer, pour tâcher de démêler les 
influences qui y entrent en jeu. 

Je me suis conformé pour cela aux indications du travail de 
M. Hankin. Le bouillon fait avec ^ d'extrait Liebig-, rendu 
légèrement alcalin et stérilisé à l'autoclave, était additionné de 
10, 25 et 50 0/0 de librine venant deTabatloir, et stérilisée elle- 
même soit à 100° (1"^^ et 2<^ exp.), soit à 120" pendant 15 minutes 
(3*^ et 4^ exp.). Ce chauffage n'a aucun inconvénient et ne pepto- 
nifie la fibrine qu'en quantités minimes. Pendant les 8 jours 
que durait la culture de la bactéridie virulente, la librine dispa- 
raissait complètement dans les ballons à 10 et 20 0/0, et à moitié 
dans les ballons à 50 0/0. 

Au bout de 8 jours, on séparait la fibrine non dissoute, on 
filtrait, on saturait par le sulfate d'ammoniaque, et on acidulait 
avec de l'acide acétique jusqu'à réaction faiblement acide au 
papier de tournesol. Le précipité formé, séparé parle filtre, était 
soumis, dans un sac de parchemin, à une dialyse rapide dans un 
courant d'eau chautlè à 42"-45°. Dans ces conditions, la dialyse 
était terminée en 12 à 18 heures. 


RECHERCHES SUIl L'IMMUNITE CONTRE LE CHARBON. 33 

L'albumose restée dans le sac de parchemin a été d'abord 
déshydratée au moyen de l'alcool mélhylique. Mais ce procédé est 
long, et on peut avantageusement le remplacer par une évapo- 
ration à basse température (20^) dans le vide. C'est ce qu'on 
a fait après la l''" expérience. Il se dépose toujours un peu de 
phosphate de chaux. La solution d'albumose décantée était pré- 
cipitée par l'alcool absolu, filtrée, et redissoute dans l'eau dans 
la proportion de O^'",! de matière pour 100>îij d'eau. On détermi- 
nait cette quantité en évaporant à sec, pesant et calcinant pour 
pouvoir défalquer les cendres. 

J'ai d'abord étudié l'influence des doses, que j'ai fait varier 
de 1/3,000,000 à 1/200,000 du poids de l'animal, pour des inocu- 
lations hypodermiques et intra-veineuses. J'ai ensuite poussé 
jusqu'à 1/20,000 du poids de l'animal, en injections intra-vei- 
neuses. Ces doses considérables ne se sont nullement montrées 
toxiques. Le seul etfet observé a été une élévation de tempéra- 
ture de 1 à 2\ 

Les inoculations charbonneuses à diiïérentes virulences ont 
été faites 2, 4, 8, 10, 12 et 18 jours après les injections d'albu- 
mose. Mes animaux sont tous morts à la suite de ces injections, 
mais leur survie a été variable suivant la virulence du charbon 
inoculé. 

Dans la première expérience seulement, les deux lapins qui 
avaient subi les injections préventives multiples qu'on trou- 
vera consignées au tableau des expériences sont morts 104 et 
114 heures après l'inoculation du charbon, avec un retard sur 
les lapins témoins qui sont morts en o3 et 34 heures. 

Dans les expériences suivantes, on n'a pu constater aucune 
influence des vaccinations préventives par l'albumose, et même 
il est arrivé que les lapins traités sont morts plus vite que les 
témoins. 

Avec les cobayes, l'influence de l'inoculation préventive a été 
aussi impossible à constater qu'avec les lapins. 

Avec les souris, dans la grande majorité des cas, les témoins 
ont survécu de quelques heures aux animaux traités préventi- 
vement. Labactéridie inoculée était des plus virulentes, et tuait 
en 18 à 38 heures les animaux de contrôle. 

Dans une de ces dernières expériences, nous avons vu une 
souris succomber 3 jours après une injection d'albumose à la dose 

3 


34 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

de 1/400,000 du poids. L'aulopsie a montré qu'elle était morte du 
charbon; un cobaye inoculé avec la pulpe dé sa rate est mort 
en 204 heures. Le mode de préparation de Talbumose ne 
tue donc pas d'une façon sûre les spores contenues dans les 
cultures. 

Un essai d'ensemencement sur plaques, d'une albumose fraî- 
chement préparée, ne nous a pourtant rien donné, mais nous 
avons été conduit, pour éviter les spores, à essayer ce que donne- 
raient des cultures de charbon asporogène. Ce dernier ne digère 
pas la fibrine aussi vite que l'autre, et donne moins d'albumose. 
JVIais, avec les lapins, cobayes et souris, cette albumose nous a 
donné les mêmes résultats que l'albumose de charbon sporogène. 

Nous n'avons pas mieux réussi à préparer une albumose 
préservatrice en changeant le liquide de culture, et en employant 
la macération de viande de bœuf, filtrée à la bougie Chamber- 
land, ou des macérations de foie, glande thyroïde, reins, testi- 
cules. De ces cultures filtrées, on retire de faibles quantités 
d'albumose qui n'ont aucune action préventive. 

Le seul fait positif que nous avons observé est le suivant. 
Les cultures de charbon dans le sérum de bunif, filtré sur por- 
celaine,, ont une action préventive quand on en inocule de 
grandes quantités dans les veines, mais limmunité ainsi conférée 
est passagère et ne dure guère plus d'un ou deux mois. Il n'est 
donc pas douteux que la bactéridie charbonneuse n'élabore dans 
certains milieux une substance capable de conférer Timmunité 
contre le charbon. Mais les conditions de la production de 
cette substance ne nous paraissent pas encore suffisamment 
étudiées. C'est une question sur laquelle je me propose de 
revenir. 

Pour le moment je me borne à donner un court protocole 
des expériences que je viens de résumer. 


RECHERCHES SUIl L'IMMUNITÉ CONTRE LE CHARBON. 3» 


IXOaiL.VTI(l\S IIE L'ALIIIMOSE (IIA\M\) ET DU (ÎIIARIION 

Dans les résumés suivanis, los iiiiliales I. C. signifient inoculation 
sous-cutanée ; I. V., inoculation intra-veineuse. A côté de la quantité ino- 
culée exprimée en milligrammes, se trouve la fraction du poids de l'animal 
qu'elle représente. Les tempi-raturcs sont prises dans le rectum. 


EXPÉRIENCES SUR LES LAPINS 

(a). Albumose d'iDte culture linileate sporogène 


x<â^- 


''rvv r>ï>® A^;;x< 

JLU ( L « B R A R ^ 


<: 


26 janv. 
30 » 
4 fév. 


I. — Lapin; poids, 2,137 grammes. Température. 39', 2. 

.) T. = 39,8 I. G. 0,60 (li3.OO0.O00) albumose. 

39.3 I. C. 2,2 (1/1,000,000) 
51'. s. 39,8 I. V. 3,0 (1/700.000) 

4 » ll'i. s. 40,6 I. C. Sang de cobaye charbon., mort en 53h. 

9 » G'', m. Mort de Tauimal, iOii» après l'inoc. charbonneuse. 

Le témoin, inoculé au même moment, meurt en 53 heures. 

II. — Lapin; poids, 1,722 grammes. Température, 39'', 0. 

26 janv. » T. = 39,6 I. V. 0,33 (1/6,000,000) albumose. 

28 » ». 39,8 I. V. 0,66 (1/3,000,000) 

30 » .) 39,5 I. C. 1,7 (1/1,000.000) « 

4 fév. Sii. s. 39,3 I. G. Sang de cobaye charb., mort enSi'i. 

9 )' ll'i. s. Mort de l'animal, lli heures après l'inoculation. 

Le témoin, inoculé au même moment, meurt en .54 heures. 

III. — Lapin; poids, 2,175 grammes. Température, 39''. l. 

T. = 39,3 I. V. 0,7 (1/3,000,000) albumose. 
39, J I. V. 2,2 (1/1,000,000) 
39,4 I. V. 5,0 (1/400,000) 

39.4 I. G. 6,0 (1/350,000) 

39,7 I. G. Rate de cobaye charb., mort en 36ii. 
Mort de l'animal, 49 heures après l'inoculation. 

Le témoin, inoculé de môme au même moment, meurt en 61 heures. 

IV. — Lapin ; poids, 1,975 grammes. Température, 39'',2. 


28 janv. 


» 


30 » 


» 


10 fév. 


» 


28 » 


» 


2 mars 


4ii. s. 


4 » 


51'. s. 


10 fév. » 
25 » 

2 mars 4''. 

3 » 51'. 


T. = 39,5 I. V. 5,0 (1/390,000) albumose. 
39,3 1. V. 8,0 (1/2.50,000) » 

s. 39,9 I. G. Rate de cobaye charb., m. en 361'. 

s. Mort de l'animal, 25i' après l'inoculation. 


Le témoin, inoculé de même au même moment, meurt en 61 heures. 


36 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

V, — Lapin; poids, 2,010 grammes. Température, d9°2. 

22 mai » T. = 39,5 L C. 20,0 (l; 100,000) albmnose. 

29 ). » 39,3 I. G. 10,0 (1/200,000) 

2 juin iV\ m. 39,4 I. C. Cuit, en bouill.de charb. asporogène. 

6 » 9''. s. Mort de l'animal, 106 heures après l'inoculation. 

Le témoin, inoculé de même au même moment, meurt en 117 heures. 


(b). Albmnose de culture virulente asporogène. 

VI. — Lapin; poids, 2,350 grammes. Température, 39", 3. 

14 mars » T. = 39,1 1. V. 10,0 (1/2.S5,000) albumose. 

23 « 4'". s. 39,3 I. V. i'^'^- cuit, de charbon asporogène. 

25 )' 5''. nj. Mort de l'animal, 36 heurses après l'inoculation. 

Le témoin, inoculé de même au même moment, meurt en 36 heures. 

VII. — Lapin; poids, 1,980 grammes. Température, 39", 3. 

16 avril » T. = 39,2 I. V. 2,0 (1/1,000.000) albumose. 
23 » » 39,5 I. C. 3,0 (1/800,000) >. 

30 » 3''. s. 40,1 L V. 1'^'= culture de charbon asporogène. 

3 mai 4''. m. Mort de l'animal, 60 heures après l'inoculation. 

Le témoin, inoculé de même au même moment, meurt en 84 heures. 

VIII. — Lapin; poids 1,868 grammes. Température, 39", 2. 

T. = 38,5 I. G. 4,0 (1/470,000) albumose. 
38,8 I. G. 6,0 (1/310,000) 
40,6 Rate de cobaye charbonn., mort en 32ii. 
Mort de l'animal, 52 heures après l'inoculation. 
Le témoin, inoculé de même, au même moment, meurt en 43 heures. 

IX. — Lapin; poids 2,100 grammes. Température, 39", 4. 

T. = 40,0 I. V. 15,0 (1/140,000) albumose. 

39,8 I. G. 15,0 (1/1^0,000) 

39,6 I. G. 10,0 (1/200,000) 
2'^ s. 40,8 L G. 0='^,5 culture de charb. asporogène. 

8'i s. Mort de l'animal, 102 heures après l'inoculation 

Le témoin, inoculé de même au même moment, meurt en 110 heures. 
Sept autres expériences sur des lapins, que je ne relate pas pour abréger, 
ont donné les mêmes résultats négatifs. 


21 avril 


» 


24 » 


„ 


25 » 


4'' s. 


27 .. 


8i> .s. 


Il 


mai 


15 


» 


18 


» 


21 


» 


25 


„ 


RECHERCHES SUR I/IMMUNITÉ CONTRE LE C[IARBON. 37 

EXl'KUIKNCES SUR LES COBAYES 

(a). Albuinose d'une cnlliire virulente sporogène. 

I. — Cobaye; poids, 450 grammes. Température, 39°, 2. 
26 janv. » T. = 39,4 L C. 0.66 (1/680,000) albumose. 
30 » » 39,2 L C. Ll (1/410,000) 

4 fév. » 39,0 L C. L5 (1/300,000) r, 

5 » 5'' s. 40,1 L C. Sang de lapin charbonn., mort en d3''. 
7 » 10'^ m. Mort de l'animal, 41 beures après l'inoculation. 

Le témoin, inoculé de même, au même moment, meurt en 48 heures. 
II. — Cobaye; poids, 463 grammes. Température, 39°,0. 

14 fév. » T. = 39,2 1. C. 1,5 (1/300,000) albumose. 

23 » » 39,6 I. C. 8.0 (I '."8,000) 

2 mars 4ii s. 40.2 1. C. Sang de cobaye charb., mort en 36h. 

3 '> G'i s. Mort de l'animal, 26 heures après l'inoculation. 
Le témoin, inoculé de même, au même moment, meurt en 33 heures. 

m. — Cobaye; poids, 380 grammes. Température, 39°, 4. 

16 fév. » T. := 39,1 I. C. 0,23 (1/1,300.000) albumose. 

24 » ). 39,3 I. C. 0,6 (1/430.000) 

26 » 3ii s. 40,1 1. C. Culture du 2" vaccin charbonneux. 

28 » 11'' s. Mort de l'animal, 36 heures après l'inoculation. 

Le témoin, inoculé de même, au même moment, meurt en 34 heures, 
(b). Albumose d'une culture virulente asporogène. 
IV. — Cobaye; poids, 510 grammes. Température, 390,2. 

6 mars » T. = 39,3 I. C. 0,38 (1/1,300,000) albumose. 
Il » » 39,1 L C. 0,6 (1/830,000) 

14 » 411 s. 39,6 I. G. Culture du 2'' vaccin charbonneux. 

17 » 71^ m. Mort de l'animal, 63 heures après l'inoculation. 
Le témoin, inoculé de même, au même moment, meurt en 39 heures. 

V. — Cobaye ; poids, 480 grammes. Température, 39", 4. 

11 mars » T. = 39,6 I. C. 0,38 (1 '1,300,000) albumose. 
20 » » 39,2 I. C. 0,6 (1/800.000) » 

22 » Jlh m. 39,9 L C. Sang de cobaye, mort charb. en 67ii. 

24 » 11'^ s. Mort de laninial, 60 heures après l'inoculation. 

Le témoin, inoculé de même, au même moment, meurt en 68 heures. 

VI. — Cobaye; poids, 410 grammes. Température 39^,2. 

24 mars » T. = 39,4 I. G. 0,82 (1/500,000) albumose. 
31 » » 39,1 I. C. 2,0 (1 '200,000) 

7 avril » 39,3 I. G. 8,5 (1,500,000) 

9 » 311 s. 40,0 I. C. Rate de cobaye charbonn., mort en 701). 

12 » llii m. Mort de l'animal, 68 heures après l'inoculation. 
Le témoin, inoculé de même, au même moment, meurt en 62 heures. 


38 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

EXPÉHIENCES SUR LES SOURIS 
(a). Albumose d'une culture virulente sporogène. 

I. — Souris de 20 grammes. 
Le 26janv. « I. C. 0,L1 (1/100,000) albumose. 

30 » » L C. 0,6 (1/33,000) 

5 fév. 4'' s. I. G. Rate de cobaye, mort en 53 heures. 

6 » 311 s. Mort de ranimai, en 23 heures. 
Le témoin, inoculé de même, meurt en 20 heures. 

IL — Souris de 2i grammes. 
Le 27 janv. » I. C. 0.55 (l/ii.OOO) même albumose. 

30 »■ » L C. 0,6 (1/40,000) 

4 fév. » L C. 1.5 (1/16,000) 

5 » 6'». s. i. C. 0cc,25 culture de 2M'accin. 

7 > S'i m. Mort de l'animal, en 38 heures. 
Le témoin, inoculé de même, meurt en 20 heures. 

III. — Souris de 24 grammes. 
Le 27 janv. » 1. C. -1,1 (1/22,000) même albumose. 

30 » « I. G. 3,0 (1/8.000) 

4 fév. » L C. 3,0 (1/8,000) 

6 » 3'' s. I. C. Culture du 2^ vaccin charbonneux. 

7 » 1'' s. Mort de l'animal en 22 heures. 
Le témoin, inoculé de même, meurt en 26 heures. 

ly. — Souris de 22 grammes. 

Le 4 fév.- » I. G. 0.5 (1/44,000) nouvelle albumose. 

12 » 211 s. I. C. 3.0 (1/8,000) >. 

16 » 3ii s. Mort de l'animal, tué par l'albumose inoculée. 

(b). Albumose d'une cnlUire virulente asporogène. 

V. — Souris de 24 grammes. 
I. G. 1,1 (1/22,000) albumose. 
1. G. 3,0 (1,8,000) 

I. C. CuIUi-re du 2*^ vaccin charbonneux. 
Mort de l'animal, en 27 heures. 

Lé témoin, inoculé de même, meurt en 22 heures. 

VI. — Souris de 20 grammes. 
I. C. 0,2 (1/100,000) albumose. 
L C. 3,0 (1/6,600) 

I. G. Culture du l"'' vaccin charbonneux. 
Mort de l'animal, en 71 heures. 

Lé témoin, inoculé de même, meurt en 68 heures. 

Sept autres expériences sur des cobayes, et six sur des souris, que je ne 
cite pas pour abréger, ont donné les mêmes résultats négatifs. 


Le 28 janv. 


»' 


4 fév. 


» 


8 » 


411 s. 


9' .. 


711 s. 


Le 4 avril 


» 


11 » 


» 


13 .. 


2ii s. 


16 ). 


Ih s. 


NOTE SUR QUELQUES EXAMENS DE SANG 

DANS LE TYPHUS EXANTHEMATIQUE, 

Par mm. L. U. THOLXOT et E. CALMETTE. 


L'étude clinique du typhus exanlhémalique semble laisser 
acluellement peu do chose à désirer, mais il est loin d'en être 
de même de son étude anatomo-pathologique et de son étude 
microbique. Que le typhus exanthématique soit une maladie 
infectieuse, cela ne fait de doute pour personne; qu'il dépende 
d'un agent pathogène, nul ne le conteste a priori; mais quel est 
cet agent pathogène? Hlava, de Prague, nous paraît avoir à peu 
près seul tenté cette recherche dans une récente et très intéres- 
sante étude (1889), mais les conclusions de Hlava ne semblent pas 
de nature à entraîner la conviction. Huit fois sur dix, l'examen 
du sang- sur le vivant est resté nég-atif ; vingt fois seulement sur 
trente-trois, les recherches cadavériques ont montré dans le 
sdLiig un strepto-bacille h. ïélal de pureté. Les autres autopsies 
ou ont été négatives (3 fois), ou ont donné d'autres micro-org-a- 
nismes. 

Le strepto-bacille a été caractérisé par Hlava de la façon la 
plus complète ; mais quel que soit l'intérêt de ces recherches, 
elles n'ont pas été considérées généralement comme jugeant la 
question. 

Nous avons eu tout récemment l'occasion d'observer à l'Isle- 
Tudy, petite commune du Finistère, une sévère épidémie de 
typhus exanlhémalique, et nous avons cherché à mettre à profit 
cette occasion pour vérifier les résultats de Hlava, et éventuel- 
lement tenter quelques recherches sur la nature intime de la 
maladie. 


40 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

Nos recherches ont porté sur 7 cas. En voici le rapide 
résumé : 

L — Gabriel B..., est le 9 juillet au 6*= jour d'un typhus violent qui Ta 
emporté 6 jours plus tard. L'un de nous pratique, avec une asepsie rigou- 
reuse, les 9, 10 et 11 juillet, une ponction de la rate, très hypertrophiée. En 
outre, le 9 juillet, on prélève avec pureté quelques gouttes de sang du doigt, 
qu'on aspire dans une pipette. 

Ces divers échantillons de sang ne sont lobjet d'aucun examen iuimé- 
diat. On les étudie seulement le 15 juillet, avec et sans coloration par les 


Fig 1. 

Dessin schémalique du sang de Louis B 

A. B. C. D. E. Filaments libres. F. G. H. Filaments fixés aux globides. 

couleurs d'aniline; cet examen ne donne que des résultats négatifs. Il en 
est de même des cultures dans divers milieux et dans le vide, et des inocu- 
lations à des lapins, cobayes et pigeons. 

II. — Louis B..., 46 ans, meurt le 27 juillet, au I2« jour d'un typhus 
violent. L'autopsie est faite 2 heures et demie après la mort : du sang est 
recueilli purement dans le coeur et la rate, par aspiration dans des pipettes 
stérilisées dont les unes servent à ensemencer sans délai plusieurs tubes de 
sérum, de gélose et de gélatine. Les autres sont fermées à la lampe et con- 
servées pour les examens microscopiques et les inoculations. 


NOTE SUli OUELOUES EXAMENS DE SANG. 41 

L'examen du sang est fait 1"2 heures après le prélèvetnent. On y observe 
facilement une leucocytoso très marquée. De plus, dans le sérum, on trouve 
des filaments réfringents, longs de 10 à 'M) [i, serpentant rapidement entre 
les globules en s'enroulant et se déroulant sur eux-mêmes. Ces filaments 
sont souvent terminés par un renflement plus réfringent, tantôt ovoïde, 
tantôt rond, égalant l;3 à 1/4 du diamètre des hématies. D'ordinaire, sur 
la longueur du filament, s'échelonnent des renflements secondaires, réfrin- 
gents comme la lèle, mais de diamètre inférieur. Des filaments très ana- 
logues à ceux-ci seuiblent fixés à quelques globules sanguins et ont alors 
perdu tout mouvement de translation, mais continuent à se balancer et à 
se tordre, en restant fixés au globule. La figure l, faite malheureusement 
non sur nature, mais d'après un croquis assez grossier que nous avons fait 
à rile-Tudy, donne pourtant une idée générale des formes. On y voit des 
filaments évanescents, dont la continuité ne se révèle que par la disposition 
des tèles et des nœuds réfriniiî'enls. 


Fig ^2. 

Sang de Louis B..., d'après une préparation colorée au bleu de méthylène aqueux. 

Au bout d'une heure ou deux, la préparation ne montre plus guère de 
filaments mobiles. Tous les mouvements qui persistent sont des mouve- 
ments de torsion et se font sur place. Ces mouvements cessent bientôt 
eux-mêmes; puis, tout semble se désagréger : on ne trouve plus rien dans 
du sang du cœur et de la rate examiné 36 heures après la prise. 

Tout ce qui précède se rapporte au sang examiné sans coloration. Nos 
essais de coloration, d'ailleurs peu nombreux, ne nous ont donné rien de 
bien net. Une de nos préparations a pourtant mieux réussi. Elle est repro- 
duite ci-dessus, figure 2, et donne une idée de la proportion relative des 
filaments et des globules. La coloration avait été faite au bleu de méthyle, 
après traitement de la lamelle par l'éther et l'alcool. Les filaments se déta- 
chaient en bleu net sur le fond vert pâle des hématies. 


42 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUK. 

Les cultures et inoculations de ce sang, ces dernières faites par notre 
ami M. Nocard, sont restées stériles. 

III. - Du 28 juillet au 3 août, nous avons ponctionné la rate des sujets 
suivants : 

DiN..., Justus, ans et demi, ponction au 1 J^ jour du typhus. 
DiG..., Jean-Marie, 34 ans, — S* — 

Leg..., Julien, 15 ans, — 6^ — ■ 

Lep..., Marie, 17 ans, — 9^ — 

Tous les ensemencements faits avec le sang de rate de ces quatre typhi- 
ques ont échoué. 

L'examen du sang, fait immédiatenjent après la prise, nous a donné des 
résultats identiques pour tous. En outre d'une leacoci/tose très marquée, 
on y observe la présence constante de petits grains réfringents de 
4 à 2[A, pourvus d'ordinaire d'un court prolongement qui les fait ressem- 
bler à des cerfs-volants en miniature, et présente quelquefois lui-même un 
petit renflement à son extrémité. Ces petits corps se meuvent avec rapidité 
entre les globules sanguins, en pirouettant sur eux-mêmes. 

Après 12 à 24 heures de séjour dans les pipettes, le sang ne montre plus 
ces granules agiles, mais seulement les formes longues et mobiles signalées 
plus haut. 

Après 48 heures, on ne voit plus rien, ni granules, ni filaafents. 

IV. — Nous avons enfin examiné à plusieurs reprises le sang du doigt 
de Dand..., pendant son séjour à l'hôpital de Quimper. Les résultats ont 
toujours été les mêmes qu'avec le sang des quatre typhiques ci -dessus. 

Les conciusions de cette étude sont les suivantes : 

1° iSous n'avons jamais rencontré dans le sang de nos 
ty[>hiques l'organisme décrit par Hlava. 

2° Le sang' prélevé dans la rate de typhiques vivants ne nous 
a donné à la culture et à l'inoculation que des résultats négatifs; 
il en a été de même pour le sang prélevé dans le cœur et la rate 
d'un cadavre de typhique. 

3^ Le sang retiré de la rate de typhiques vivants, ou du cœur 
et de la rate d'un cadavre de typhique, nous a montré des élé- 
ments anormaux, petits granules mobiles, et filaments mobiles 
ou accolés aux hématies. 

Des formes analogues ont déjà été signalées dans diverses 
maladies, et aussi dans le typhus exanthématique. Bliesener 
(1873), Engel (1873), Ileydenreich et surtout Guttmann' ont 
trouvé dans la fièvre récurrente, des grains mobiles plus ou 
moins semblables à ceux décrits plus haut; Guttmann signale 

1. Archiv. f. palh. Anat. und. Phi/siol., 1880. 


NOTi: SUR QUELQUES ]<XAMENS DE SANG. 43 

encore leur présence dans la pneumonie, la fièvre typhoïde, la 
diphtérie, l'érysipèle, et aussi, d'après son assistant Salomon, 
dans le ly|duis exanthématique. 

Albreclil ' signale, après Gutlmann , de ces petits corps 
mobiles, dans le typhus exanthématique, la fièvre typhoïde, le 
paludisme, la méningite, la pneumonie, et même chez des indi- 
vidus sains. 

Ces divers savants ne sont guère d'accord sur la significa- 
tion de ces petits corps. Faut-il y voir des éléments parasitaires, 
ou des résidus de désagrégation des globules? 

Dans celte seconde manière de voir, il faudrait rapprocher 
les filaments que nous avons décrits de ces diverses modifications 
des globules rouges sous l'influence de divers agents, qui ont 
été signalés d'abord par M. Schultze^ (1865) et Preyer^ (1864), 
— qui a donné une intéressante planche de la déformation chez 
la g-renouille — puis, par Arndt {Arch. de Virchow\ et tout 
récemment encore par Pasternatzky (1891), qui mentionne 
d'ailleurs expressément n'avoir rien trouvé d'analogue dans le 
typhus exanthématique. 

En France, MM. Hayem et Talamon ont décrit à la Société 
médicale des hôpitaux, en 1891, des déformations globulaires 
dans l'anémie (M. Hayem) et sous l'influence de la chaleur 
(M. Talamon), qui sont à rapprocher des études des auteurs 
allemands signalés plus haut. MM. Chantemesse et Widal ont 
annoncé qu'ils avaient vu dans le sang de grippés des globules 
sang-uins déformés et à prolong-ements mobiles (Société médicale 
des hôpitaux, 1891). 

Il est possible que les formes que nous avons rencontrées 
soient des stades de destruction des globules, mais leur analo- 
gie avec les formes décrites n'est pas assez grande pour nous 
rallier à cette idée, et nous inclinons à y voir des éléments spéci- 
fiques. 

Nous voulons, d'ailleurs, nous contenter de poser la ques- 
tion, laissant à des études ultérieures le soin de la résoudre. 

i. Deulsch. Archio. fur Klin. Médecin, 18S1. 

2. Arcliiv. fiir Mikrosc. Anat., IStia. 

3, Archives de Virchow, p. 417, pi. XV. 


REVUES ET ANALYSES 


APPLICATION DES INJECTIONS DE TUBERCuLINE 

AU DIAGNOSTIC DE LA TUBERCULOSE BOVINE 

Dans sa Nouvelle communication sur le traitement de la tuberculose, 
M. R. Koch déclarait que les injections de tuberculine constitueraient un 
précieuxmoyen de diagnostic. « On pourra désormais, disait-il, recon- 
naître la tuberculose au début, à un moment où ni l'examen physique, 
ni la présence des bacilles ne peuvent donner de renseignements. » 

Cette assertion produisit chez les vétérinaires une très vive émotion ; 
en effet, de toutes les maladies qu'ils sont appelés à combattre, il n'en 
est pas dont le diagnostic précoce soit à la fois plus important et plus 
difficile que celui de la tuberculose bovine. 

La réaction fébrile, si accusée chez l'homme tuberculeux traité par 
la tuberculine, s'observerait-elleégalement chezle bovidé tuberculeux? 
Le bœuf sain résisterait-il à l'action du nouvel agent? Quelle dose 
faudrait-il injecter ? 

De toutes parts, on se mit à l'œuvre et, bientôt, les journaux vété- 
rinaires furent remplis de la relation d'expériences entreprises dans le 
but de résoudre les questions posées. 

Le premier travail qui ait été publié est de Guttmann, de Dorpat' ; 
il donne le résultat d'expériences qui ont porté sur trois vaches tuber- 
culeuses et sur deux taureaux sains, témoins. 

Des trois vaches, l'une avait reçu 1 décigramme, une autre 2 déci- 
grammes, la troisième 3 décigrammes de tuberculine pure, diluée 
dans 9 parties d'eau phéniquée à 5 0/00. Tandis que les témoins (qui 
avaient reçu chacun 3 décigr. de lymphe) n'éprouvaient aucune réac- 
tion, la température des trois vaches subit une élévation considérable, 
de lo,5 à 2^,7; chez toutes trois, la fièvre apparut entre la 11** et la 
12e heure ; son intensité et sa durée semblaient être en rapport avec la 
quantité de lymphe injectée : chez la vache qui n'en avait reçu que 
1 décigaamme, la fièvre n'atteignit que lo,5 et ne dura guère plus de 

1. BaUische Wochenschrift, nob^SO décembre 1890 (style russe), page 603. 


REVUES ET ANALYSES. 45 

'.\ heures; chez celle qui avait reçu 2 décigrammes, la température 
s'éleva do plus de 2" et resta près de 10 heures à un chiffre élevé ; 
chez celle qui avait reçu 3 décigrammes, on nota une élévation de près 
de S*^', et la fièvre dura plus de 12 heures. 

Une expérience analogue faite à Berlin, sous la direction de 
MM. Ilœckl et Schiitz', donna des résultats identiques; deux vaches 
tuberculeuses eurent une forte lièvre, notable dès la lO^ heure, qui 
dura plus de douze heures, alors qu'un tcinoin, reconnu sain à l'au- 
topsie, n'avait manifesté aucune réaction; chaque sujet avait reçu, en 
injection sous-cutanée, 5 centimètres cubes d'une solution au 10'- de 
tuberculine, soit 5 décigrammes de matière active. 

Des expériences, fort bien conduites, de Bang et Salomonsen, d'une 
part-, de Lydtin, d'autre part% portant sur un plus grand nombre de 
sujets, donnèrent également des résultats très favorables; mais tandis 
que Lydtin conseillait d'injecter 4 à 5 décigrammes de tubercu- 
line, Bang déclarait suffisante la dose de 3 décigrammes pour des sujets 
adultes, de taille moyenne. 

Ces premières expériences constituaient une base solide pour les 
recherches ultérieures; elles provoquèrent de si nombreux travaux 
qu'il serait impossible d'en donner même uniquement les conclusions; 
on en trouvera plus loin l'indication bibliographique ; nous devons nous 
borner à analyser les plus importants de ces travaux ; en rappro- 
chant les résultats qu'ils ont donnés de ceux que nous avons nous-mème 
obtenus, peut-être nous sera-t-il possible d'en déduire les règles à 
suivre dans l'emploi des injections de tuberculine, comme moyen de 
diagnostic de la tuberculose des bovidés. 

I. — Depuis sa communication d'avril 1891 (loco citato), Bang a con- 
tinué ses expériences sur la tuberculine; il a bien voulu me communi- 
quer les résultats qu'il a obtenus; en voici le résumé : 

Sur 53 bovidés mis en expérience, 41 ont été reconnus tuberculeux 
à l'autopsie ; 38 avaient présenté la réaction ordinaire ; sur 3, la réaction 
avait été nulle ou insuffisante ; l'un de ces trois sujets était tuberculeux 
jusqu'aux moelles; les deux autres avaient reçu une quantité de 
lymphe peut-être un peu faible. 

Des 12 sujets non tuberculeux, 2 seulement ont réagi faiblement : 
chez l'un (bouvillon d'un an qui avait reçu 20 centigr.), la température 
s'élevait de 8 dixièmes de degré à la 16^ heure; chez l'autre (taureau 
d'un an et demi, qui avait reçu 30 centigr.), la température, restée à 

1. Zcitschrift far Fleisch imd Milchhygiene, mars liS9l. 

2. Berliner Tkierarztliche Wochcnschrift, 6 et 9 avril 1891. 

3. Lydlin's Thicrarziliclie Millheilangen, mai 1891. 


46 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

peu près normale jusqu'à la 9e heure après l'injection, n'était plus prise 
ensuite jusqu'à la 20^ heure; elle était alors de 40°, 2; niais elle retom- 
bait à 390,3 dès la 22e heure. 

« Malheureusement, dit Bang, la température n'a pas été prise 
entre la 9^ et la 20" heure, c'est-à-dire pendant le temps le plus favo- 
rable à la réaction ; je ne puis donc pas savoir si la réaction a été supé- 
rieure à 40", 2, ou si cette température a été chose purement acciden- 
telle et passagère. » 

Bang a fait beaucoup d'expériences sur des veaux suspects de 
tuberculose ; il les a vus réagir aussi bien que les adultes aux injections 
de tuberculine; Leclainche, de Toulouse, a obtenu des résultats sem- 
blables (Communication inédite). Il est clair que la dose doit être plus 
faible chez le veau que chez l'adulte : aux adultes de taille moyenne, 
Bang injecte 30 centigrammes de tuberculine, en une fois; aux 
génisses ou bouvillons d'un an, il donne 20 centigrammes; pour les 
veaux, il ne dépasse pas les doses de 10 à 15 centigrammes. 

26 veaux suspects figurent parmi les 53 bovidés qu'il a soumis aux 
injections de tuberculine ; 23 de ces veaux ont réagi; l'autopsie a mon- 
tré que tous étaient tuberculeux; les 3 autres n'avaient aucune lésion 
bacillaire. 

Bang a encore essayé la tuberculine sur 6 porcs, 1 cheval et 
1 chien, suspects de tuberculose. — Tous ont réagi, à l'exception 
de 2 porcs qui ont été reconnus sains à l'autopsie. 

Fort de ces résultats, Bang maintient l'opinion qu'il a déjà for- 
mulée, à savoir que, dans la grande majorité des cas, l'injection de 
tuberculine constitue un moyen précieux de faire le diagnostic de la 
tuberculose bovine; ce moyen est souverain lorsqu'il s'agit de faire le 
diagnostic précoce; — en effet, c'est surtout lorsque la maladie était 
très peu développée que Bang a constaté les réactions les plus nettes; 
aussi croit-il nécessaire de signaler avec insistance aux vétérinaires 
praticiens et aux propriétaires, que l'intensité et la durée de la réac- 
tion ne sont nullement proportionnelles à la gravité ou à l'étendue 
des lésions. 

Aux yeux de Bang, c'est à l'élevage que les injections de tubercu- 
line rendront le plus de services; il voudrait qu'on les appliquât à tous 
les animaux destinés à la reproduction et qu'on n'acceptât pour la sail- 
lie que ceux qui auraient subi, sans réagir, l'épreuve de la tuberculine; 
les autres devraient être mis immédiatement à l'engrais; la boucherie 
pourrait en tirer parti sans que le propriétaire en éprouvât de grandes 
pertes, les lésions tuberculeuses n'ayant pas encore eu le temps de se 
généraliser. 

Lors de ses premières recherches, Bang avait constaté, à deux 
reprises, que l'injection de tuberculine avait considérablement aggravé 


REVUES ET ANALYSES. 47 

la lésion préexistante et provoqué le développement d'une tubercu- 
lose miliaire aiguë, à marche très rapide; M. Arloing a signalé un fait 
analogue; la commission chargée par l'LTniversité de Pensylvanie 
d"étudier les etîels de la tuberculine chez les animaux tuberculeux, a 
fait la môme observation; le même fait s'est aussi produit entre mes 
mains. Bang n'en a pas observé de nouvel exemple; il s'agit donc 
d'un accident relativement rare, dont la crainte ne doit pas entrer en 
ligne de compte lorsqu'il s'agit de recourir à l'emploi des injections 
de tuberculine. 

Bang dit, en terminant, que bon nombre de vétéi'inaires danois 
ont expérimenté pour leur compte la tuberculine et qu'ils ont obtenu 
des résultats satisfaisants. 

II. — A l'École vétérinaire de Dresde, des expériences ont été faites 
par Johne et Siedamgrotzki, sur l'ordre du ministère de l'Intérieur ' ; 
elles ont porté sur 40 bovidés qui ont tous été sacrifiés ultérieure- 
ment, en sorte que l'on a pu contr(Mer par l'autopsie les indications 
données par la courbe thermique. 

La dose injectée a été de ^ décigrammes pour 12 animaux; de 
3 décigrammes pour 9; de 4 décigrammes pour 8; de 5 décigrammes 
pour les 11 derniers sujets. 

Sur les 40 animaux mis en expérience, 23 étaient tuberculeux à 
des degrés divers; 21 ont eu une réaction générale se traduisant par 
une élévation notable de la température et par une augmentation 
moins constante du nombre des pulsations et des respirations; chez 
quelques sujets, on a noté un certain état de malaisé général, accusé 
pai- des frissons et par un peu de raideur dans les mouvements; 
jamais l'appétit n'a été supprimé ni la rumination suspendue. 

Deux sujets tuberculeux n'ont eu aucune réaction fébrile; pour 13, 
l'élévation de la température a dépassé l'^4; pour 6, elle est restée 
entre 8 dixièmes de degré et l'^2. 

C'est d'ordinaire entre la H^ et la 13^ heure que la fièvre a été le 
plus forte; l'acmé est parfois survenue dès la 9'' heure; parfois aussi 
elle ne s'est montrée qu'entre la 18^ et la 20'^ heure. 

L'intensité et la durée de la- fièvre ont paru être en rapport avec 
la quantité de tuberculine injectée. 

Chez une vache qui n'avait pas réagi à une l'** injection de 20 cen- 
tigrammes, la température s'est élevée de 2 degrés, huit jours plus 
tard, après une injection de 30 centigrammes. 

Des 17 vaches non tuberculeuses, 3 ont eu une réaction mesurée 

1. Bericlite liber das Velerinarivesen, im Kônigreich Sachsen, fur das lalir 1890, 
p. 161. 


48 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

par ^^,1, 4°, 2, et 2°, 2. L'une d'elles n'avait aucune lésion. Une autre 
avait des échinocoqueé du poumon et un abcès entre la panse et le 
diaphragme. La S*' avait des échinocoques du poumon, du foie et 
de la rate; de la distomatose avec cirrhose biliaire; du catarrhe avec 
suppuration de la mamelle; de l'hypertrophie avec inflammation 
aiguë des ganglions sous-lombaires; — l'examen microscopique n'y 
montra aucun bacille; mais il eût été intéressant d'inoculer la pulpe 
de ces ganglions enflammés. 

Une série d'expériences bien conduites montre bien l'accoutumance 
de l'organisme aux effets de la tuberculine : quand on répèle les injec- 
tions à bref délai, la réaction fait rapidement défaut, même à des 
doses considérables. 

Sur presque tous les sujets, tuberculeux ou non, on a noté au siège 
de l'injection un peu d'infiltration inflammatoire du tissu cellulaire. 

Juhne et Siedamgrotzki concluent que l'on doit considérer la 
tuberculine comme « un très important moyen d'assurer le diagnos- 
tic », dans les cas douteux, chez les bovidés tuberculeux; il faut se 
garder de le proclamer infaillible; mais il est surtout précieux, parce 
qu'il permet de reconnaître des lésions tuberculeuses qui échappe- 
raient aux autres moyens d'investigation. — Ils terminent en conseil- 
lant d'injecter d'emblée 4 ou 5 décigrammes de tuberculine et de 
prendre la température toutes les 2 ou 3 heures à compter de la 
9'' heure après l'injection. 

in. — M. Lydtin, le chef éminent du service vétérinaire du grand- 
duché de Bade, a fait également, par ordre de son gouvernement, un 
grand nombre d'expériences. Pour quelques-unes, on connaît déjà le 
résultat obtenu'; mais l'ensemble et le détail de ces importantes 
recherches ne seront publiés que dans quelques mois; je puis en donner 
dès aujourd'hui le résumé, grâce à l'extrême obligeance de l'auteur. 

Les expériences de Lydlin ont porté sur 110 bovidés qui ont été 
sacrifiés ensuite et autopsiés, en sorte qu'il a été facile de contrôler 
pour chacun les résultats de l'expérience. 70 de ces animaux n'ont 
manifesté aucune réaction; aucun d'eux n'a présenté à l'autopsie 
de lésion tuberculeuse; — la réagi faiblement; 39 ont réagi nette- 
ment; 37 seulement étaient tuberculeux. 

Ces expériences ont pour la plupart un très grand intérêt, parce 
qu'elles ont été faites dans les conditions mêmes de la pratique; par 
exemple, à 5 reprises, on a choisi, sur le marché d'une grande ville, 
un certain nombre d'animaux destinés à l'abattoir; après un examen 
minutieux fait par des vétérinaires expérimentés, examen n'ayant 

i. Lydlin's TkierarzlUche Millheilungcn. — Mai et août 1891. 


REVUES ET AxNALYSES. 49 

révélé aucun signe do tuberculose, chaque animal recevait en injec- 
tion sous-cutanée 4 à o décigrammes de tuberculine; après quoi, on 
prenait la température des sujets toutes les heures ou toutes les 
^ heures, pendant les :24 heures suivantes; on les livrait ensuite au 
bouclier sous réserve d'en faire un examen nécropsique minutieux. 
Sur près de 80 bétes ainsi traitées, toutes saines en apparence, 

18 présentèrent la réaction ordinaire, une autre réagit d'une façon 
douteuse: à l'autopsie, 17 furent trouvées tuberculeuses; 2 seulement 
étaient saines, dont celle qui avait réagi faiblement. Aucun des 
autres sujets n'avait la plus petite lésion tuberculeuse. 

Une autre expérience offre encore plus d'intérêt; elle a porté sur 

19 vaches laitières formant l'etfectif d'une vacherie modèle de Karls- 
ruhe, dont le lait était surtout utilisé pour les malades et pour les 
enfants; ces « belles et fortes » vaches, d'ailleurs soumises à la sur- 
veillance du bureau d'hygiène de la ville, étaient toutes en très bon 
état et en plein rapport; chacune d'elles reçut une injection de 5 dé- 
cigrammes de tuberculine; 9 de ces vaches manifestèrent la réaction 
caractéristique, et l'autopsie montra qu'elles étaient réellement tuber- 
culeuses! Bien plus, 4 mois plus tard, 6 des vaches qui n'avaient pas 
réagi à la l^^ injection reçurent une nouvelle injection de tuberculine 
avant d'être livrées au boucher; 3 d'entre elles réagirent, et l'autop- 
sie montra que ces 3 vaches avaient contracté la maladie depuis la 
l^e épreuve. 

Ainsi, dans une étable modèle, dont le lait était surtout destiné 
aux enfants ou aux malades, 1:2 vaches sur 19 étaient tuberculeuses! 
Pour se passer à l'étranger, ces faits n'en sont pas moins navrants: il 
ne faudrait pas chercher bien loin en France pour en trouver d'ana- 
logues. Pour ma part, je pourrais citer une étable de la Beauce où la 
tuberculose régnait depuis quelques années, et dont les vaches, certai- 
nement contaminées, ont été dispersées au hasard des enchères d'une 
vente publique. Qu'en est-il advenu? Je ne saurais le dire pour toutes: 
mais je sais que 4 de ces vaches, échouées dans la clientèle d'un de 
mes anciens élèves, y ont créé 4 nouveaux foyers de tuberculose et ont 
déjà contaminé bon nombre de leurs nouvelles compagnes. A 
Karlsruhe, du moins, si le mal existe, on s'efforce de le com- 
battre: éclairés par les tristes résultats de l'expérience de M. Lydtin, 
les I pères de la ville » décidèrent que dorénavant aucune vache nou- 
velle ne serait admise à l'étable sans avoir subi, sans réaction, l'injec- 
tion de tuberculine; ils décidèrent, en outre qu'après six mois écoulés 
l'épreuve seraitrenouveléesur toutes les vachesde l'étable. — Laprécau- 
tion n'était pas inutile, car, tout récemment, sur 5 vaches soumises 
à l'épreuve, — toutes bêtes superbes de 600 à 700 kilogrammes, — 
3 durent être refusées comme ayant présenté la réaction caractéristique. 


50 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

II serait superflu de dire que Lydtin est l'un des plus chauds 
partisans de l'emploi de cette arme nouvelle dans la lutte que les pou- 
voirs publics ont partout entreprise contre la tuberculose des animaux 
de l'espèce bovine. 

IV. — Des recherches analogues ont été entreprises à la « Reichs 
Gesundheitsamte » de Berlin, sous la direction de MM. Rœckl, con- 
seiller du parlement, et Schûtz, recteur de l'Ecole supérieure vétéri- 
naire. Ces expériences n'ont pas encore été publiées. Mais M. Schûtz 
a bien voulu me communiquer, en gros, les résultats qu'il a enregis- 
trés : 66 animaux de l'espèce bovine ont été soumis aux expériences; 
chacun a reçu, dans le tissu cellulaire sous-cutané, 5 décigrammes de 
tuberculine dilués dans 4 gr, 5 d'une solution phéniquée à o 0/00. 

51 sujets ont réagi; 43 seulement étaient tuberculeux; les 8 autres 
étaient sains. Sur les 15 animauxdontla température est restée normale, 
9 étaient sains, "2 avaient de l'aclinomycose, 4 étaient tuberculeux. 

Schûtz a observé, comme tous les expérimentateurs, que la tuber- 
culine est surtout excellente dans les cas douteux : c'est quand le 
mal est très limité, quand l'examen clinique reste infructueux, qu'elle 
donne les indications les plus nettes: mais, dit-il, il ne faudrait pas 
vouloir en faire un moyen absolu de diagnostic. 

Schûtz conseille de ne pratiquer les injections que sur les animaux 
dont la température est normale et d'injecter, en une seule fois, 
1/2 centimètre cube de tuberculine dilué dans 4, 5 centimètres cubes d'eau 
phéniquée à 5 0/00- Il ne considère comme ayant réagi que les sujets 
dont la température s'est élevée de 1/2 degré au minimum. — A mon 
avis, ce chiffre est beaucoup trop faible; peut-être explique-t-il com- 
ment 8 des animaux signalés comme ayant réagi, ont été trouvés 
sains à l'autopsie. Schûtz le reconnaît d'ailleurs implicitement lors- 
qu'il dit que « si la température s'élève à 40° et au delà, on peut être 
sûr que l'animal est tuberculeux ». 

V. — Pour ma part, j'ai étudié l'action de la tuberculine sur 
71 bovidés dont l'autopsie a été faite ensuite, peu de temps après 
l'expérience; 22 de ces sujets ont éprouvé, après l'injection, une éléva- 
tion de température variant de 1^,4 à 3 degrés; pour un 23^, l'éléva- 
tion n'a été que de 8 dixièmes de degré; celui-ci n'était pas tubercu- 
leux; il avait de la cirrhose biliaire consécutive à de la distomatose ; 
un autre, qui avait réagi fortement à chaque injection de tuberculine, 
avait de Fadénie généralisée sans aucune lésion bacillaire; tous les 
autres étaient tuberculeux, à des degrés divers; 10 d'entre eux 
étaient en bon état de santé apparente, et il eût été impossible de 
soupçonner l'existence de la lésion dont ils étaient atteints. 


REVUES ET ANALYSES. 31 

Des -48 animaux qui n'avaient pas réagi, 3 étaient tuberculeux; 
mais il n'était pas besoin de tuberculine pour le reconnaître; ils 
étaient phtisifjiit's au dernier degré et la lésion était généralisée à tous 
les organes; l'un d'eux (vache jerseyaise, de grande origine, donnant 
encore plus de 10 litres de lait), succomba 12 jours après l'injection : 
à l'autopsie, on trouva tous les viscères farcis d'une infinité de tuber- 
cules miliaires de nouvelle formation, et les lésions anciennes, nom- 
breuses et graves, étaient devenues le centre d'une hyperémic extrême- 
ment intense et très étendue en surface. Chose rare dans une tuber- 
culose aussi généralisée, les mamelles étaient saines, et 2 jeunes 
chats ont pu boire de grandes quantités de lait sans en être incom- 
modés; -2 cobayes en ont reçu 4 centimètres cubes dans le péritoine; 
ils sont encore bien portants. Chez cette vache, on ne peut nier que 
la réaction thermique ne se soit produite; on pourrait même dire 
qu'elle a duré jusqu'à la mort, car, de 40 degrés, chiffre autour 
duquel elle oscillait avant l'injection, la température s'est élevée et 
s'esi maintenue jusqu'à la fln entre 40'^6 et 40'\9: mais la différence 
n'est pas suffisante pour que la bête ait pu être comptée parmi celles 
qui ont réagi. 

Parmi les animaux non tuberculeux qui n'ont manifesté aucune 
réaction, il s'en trouvait qui étaient atteints d'emphysème pulmonaire, 
de bronchite vermineuse, d'échinocoques, d'actinomycose, de péri- 
pneumonie aiguë ou chronique, etc.. Plusieurs étaient en très bon état 
de graisse, d'autres au contraire étaient très maigres. 

En outre de ces expériences suivies d'autopsies, j'ai pu appliquer 
les injections de tuberculine dans une vacherie importante compre- 
nant 18 vacheslaitières, dontplusieursétaientenpleinelactation et dont 
quelques-unes étaient dans un état très avancé de gestation : — 2 de ces 
vaches avaient réagi à l'injection; l'une d'elles fut rendue au marchand 
comme il avait été convenu ; l'autre, que rien n'aurait pu faire suspecter, 
fut abattue : un foyer tuberculeux très limité existait dans l'un des 
lobes pulmonaires, et trois des ganglions du médiastin étaient farcis de 
tubercules : — l'injection ne causa aucun trouble de la gestation, aucune 
modification, même passagère, de la quantité ou de la qualité du lait. 

En communiquant ces faits à l'Académie de médecine, je disais 
que l'intérêt bien entendu des éleveurs et des producteurs de lait serait 
de soumettre à l'épreuve de la tuberculine les animaux de leur exploi- 
tation, pour éliminer ceux qui réagiraient après l'injection; et de 
n'introduire désormais dans leurs étables que des sujets ayant subi 
victorieusement l'épreuve de la tuberculine. 

La Revue que nous venons de faire des travaux qu'a suscités cette 
importante question n'est pas pour nous faire changer d'avis, bien au 
contraire. 


o2 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

A coup sûr, les indications données par la tuberculine ne sont pas 
infaillibles, et, moins que personne, je ne conseillerais de la substituer 
aux moyens anciens de diagnostic, et notamment à la recherche du 
bacille et à l'inoculation des produits suspects; mais il serait insensé 
d'invoquer les rares défaillances de la tuberculine pour en déconseiller 
l'emploi; il faut au contraire proclamer bien haut que c'est un moyen 
précieux d'une valeur incomparable, puisqu'il agit précisément dans 
les cas où l'on ne peut même pas songer à recourir aux autres, c'est-à- 
dire dans les cas où il n'existe ni jetage, ni expectoration, ni suppuration 
ou autre produit pouvant être inoculé ou soumis à l'examen bactério- 
logique. 

En somme, les très nombreuses recherches expérimentales aux- 
quelles a donné lieu l'emploi de la tuberculine pour le diagnostic de 
la tuberculose bovine, peuvent se résumer en dernière analyse dans 
les propositions suivantes : 

|o La tuberculine possède, à l'égard des bovidés tuberculeux, une 
action spécifique incontestable, se traduisant surtout par une notable 
élévation de la température. 

2'^ L'injection d'une forte dose (de 30 à 40 centigrammes, suivant 
la taille des sujets) provoque ordinairement, chez les tuberculeux, une 
élévation de température comprise entre 1 et 3 degrés. 

3° La même dose injectée à des bovidés non tuberculeux, ne pro- 
voque ordinairement aucune réaction fébrile appréciable. 

4° La réaction fébrile apparaît le plus souvent entre la 12« et la 
IS*^ heure après l'injection, quelquefois dès la 9'^ heure, très rarement 
après 18 heures; elle dure toujours plusieurs heures. 

o" La durée et l'intensité de la réaction ne sont nullement en rapport 
avec le nombre et la gravité des lésions; il semble même que la réac- 
tion soit le plus nette dans le cas où, la lésion étant très limitée, l'animal 
a conservé les apparences de la santé. 

6'^ Chez les sujets très tuberculeux, phtisiques au sens propre du 
mot, chez ceux surtout qui sont fiévreu.r, la réaction peut être peu 
accusée ou même abolument nulle. 

7" Il est prudent de prendre la température des animaux, matin et 
soir, pendant plusieurs jours avant l'injection; il peut s'en trouver en 
effet qui, sous l'influence d'un malaise passager, d'un état pathologique 
peu grave (troubles de la digestion ou de la gestation, chaleurs, etc.), 
présentent de grandes oscillations de la température; de là une cause 
d'erreur grave. Pour ces animaux, il vaut donc mieux ajourner l'opé- 
ration. 

8° Chez certains animaux tuberculeux, non fiévreux, la réaction 
consécutive à l'injection de tuberculine ne dépasse guère un degré; 


REVUES ET ANALYSES. 53 

néanmoins, comme l'expérience démontre que, chez des animaux par- 
faitement sains, la température peut subir des variations atteignant 
un degré et plus, on devra ne considérer comme ayant une valeur 
diagnostique réelle, que les réactions supérieures à 1", i ; l'élévation de 
température inférieure à 8 dixièmes de degré n'a aucune signification ; 
toute bête dont la température subit une élévation comprise entre 0*^,8 
et l'\-4 sera considérée comme suspecte, et devra être soumise, après 
un délai d'un mois environ, à une nouvelle injection d'une dose plus 
considérable de tuberculine. 

Ed. Xocard. 


INDEX BIBLIOGRAPHIQUE 

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DE L'INFLUENCE DES iMOUVEMENTS DU LlIjUlDE SUR LA MULTIPLICATION DES MICROBES 

REVUE CRITIQUE 

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lence des microbes. Archiv. f. Hyg., t. XIII, p. 247, 1891. 

Comme on peut le voir par l'énumération de travaux qui précède, 
la question de Finfluence que peut avoir, sur la multiplication des 
bactéries dans un liquide, l'agitation communiquée à ce liquide, a 
exercé la sagacité de nombreux savants depuis le jour où Ilorvath, 
reprenant à ce sujet quelques essais de Paul Bert, a annoncé que cette 
agitation contrariait ou empêchait le développement des microbes. 

Il faut dire tout de suite que ce travail a rencontré une incrédulité 
assez générale. En Allemagne, Nœgeli s'est fait l'interprète habile des 
objections multiples qu'il soulevait. En France, l'école de Pasteur au 
moins pouvait lui opposer de suite de nombreux faits en contradiction 
avec ses conclusions. Pour la levure, toute agitation qui a pour effet 
d'aérer le liquide et de le priver de son acide carbonique favorise le 
développement au lieu de l'arrêter, et tout le monde se rappelait avoir 
vu fonctionner au laboratoire un flacon tournant autour de son axe, 
dans lequel un liquide en couches minces, roulant sans cesse le long 
des parois, donnait en quelques heures une multiplication rapide de 
la semence de levure introduite. Quand M. Dumas était venu faire, 
en 1872. dans ce même laboratoire, des études sur les fermentations, 
il avait de même essayé l'influence sur l'activité du phénomène de 
l'agitation du liquide, et même de ce mouvement moléculaire qu'on 
lui communique en le soumettant à des vibrations. 

M. Hoppe-Seyler, en soumettant, en 1881, à une circulation con- 
tinue, dans un vase tournant, une culture de bactéries, a vu que cette 
agitation n'empêchait pas un riche développement des microbes. Il 
eùl été, en effet, singulier que les êtres aérobies ne se trouvassent pas 


56 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR, 

bien de celte agitation permanente. Il est vrai qu'il n'y avait pas là de 
chocs, mais on ne voit pas bien ce que signitie le mot choc pour des 
êtres aussi petits. On se rend bien compte de la poussée produite par 
une vague contre le musoir d'une jetée, mais pour la vague, le sens 
du mot choc esl déjà moins précis: il laisse une image dans l'esprit 
pour les gouttelettes d'eau projetées dans l'air ou réduites en pous- 
sières, mais y a-l-il choc pour les microbes qui habitent cette eau, 
voilà ce à quoi il est impossible de répondre d'une manière sûre. 

Il eût sans doute fallu se rendre, si l'expérience avait parlé, mais 
l'expérience parlait de façons fort diverses, suivant ceux qui l'inter- 
rogeaient, et on avait le droit qu'on a toujours quand des observateurs 
également habiles et également consciencieux arrivent à des résultats 
contradictoires, d'attribuer ce fait à ce qu'ils n'opéraient ni sur les 
mêmes microbes ni dans les mêmes conditions. 

A priori, la nature du microbe doit jouer un rôle. Nous venons de 
voir des levures et des êtres aérobies s'accommoder fort bien d'une 
agitation qui renouvelle leur provision d'oxygène. M. Pasteur avait 
montré, d'un autre côté, dans ses belles études sur le vibrion septique, 
que les spores de ce vibrion craignaient avant tout l'oxygène. Inca- 
pables de se développer dans un liquide aéré, elles peuplaient facile- 
ment ce même liquide maintenu en repos, et dont elles absorbaient 
peu à peu l'oxygène. On avait donc dans la levure et le vibrion sep- 
tique deux espèces sur lesquelles l'agitation des liquides devait agir 
de façons très diverses, et, cela étant, on pouvait légitimement se 
demander si les observateurs avaient tenu compte de cette cause, non 
d'erreur, mais de contradiction. On avait encore, il me semble, le 
droit d'être plus sévère et de se demander comment des faits si patents, 
existant déjà depuis plusieurs années dans la science, n'avaient pas 
éclairé les expérimentateurs sur le caractère illusoire que devaient 
conserver leurs essais tant qu'ils n'en tenaient pas compte. 

La nature du milieu ne doit pas non plus être indifférente. Du 
moment que l'agitation ne tue pas rapidement les bactéries sur 
lesquelles elle agit, et là-dessus tout le monde était d'accord, il y a en 
jeu deux forces comparables : l'agitation qui gène et le milieu liquide 
qui favorise la multiplication de la bactérie. Il peut par suite très 
bien se faire qu'en opérant sur la même espèce, dans des milieux 
différents, par exemple dans l'eau et dans du bouillon, on trouve les 
résultats les plus divers. 

Toutes ces réserves, qu'on pourrait multiplier, enlèvent un peu de 
leur importance aux travaux qui ne les ont pas prévues et aux contra- 
dictions qu'on peut y relever. Wernich trouve par exemple que l'agi- 
tation du liquide, faite mécaniquement ou en y faisant barboter un 
gaz inerte, gêne la culture. Cela est sûr pour les conditions dans 


REVUES ET ANALYSES. 57 

lesquelles il s'est mis. Tumas trouve qu'il est bon d'agiter le liquide, 
mais qu'il ne faut pas l'agiter trop. Aucun d'eux n'est pourtant en 
contradiction avec lloser qui trouve au contraire qu'un courant d'air 
rapide favorise la multiplication des bactéries. 

On pourrait de même ojiposer les uns aux autres les résultats de 
Cramer, qui trouve que le repos favorise la multiplication des germes, 
et ceux de Leone qui trouve que le repos et le mouvement sont indif- 
férents. Gartner est le seul qui semble avoir eu l'idée de décomposer 
le problème pour le mieux résoudre. Au lieu de prendre pour matière 
des expériences les microbes si variés de l'eau, il la stérilisait et 
l'ensemençait avec des microbes bien connus. La plupart de ceux qui 
vivent dans l'eau étant aérobies, il ne faut pas s'étonner s'il a observé 
que dans l'eau agitée, même à des températures de 6 à dO", il y a 
encore multiplication des germes. Mais comme il opérait dans un 
milieu médiocre, où les plus petites variations ont de l'influence, il 
ne faut pas s'étonner s'il a trouvé que c'était tantôt le liquide agité, 
tantôt le liquide en repos qui se peuplait le plus vite. Il a aussi relevé 
des différences dans l'effet de la forme du vase, de son mode de 
fermeture, du mode d'agitation, mais des différences variables et 
sans intérêt. Enfin il a vu aussi que tous les microbes ne se compor- 
taient pas de la même façon, ce à quoi il fallait s'attendre. 11 en a tiré 
la conclusion qu'il était à peu près indifférent, pour les analyses 
bactériologiques de l'eau, de l'étudier sur place ou de l'emporter au 
laboratoire, pourvu que l'examen en soit rapidement fait. 

Le dernier savant qui ait publié une étude sur ce sujet, M. Schmidt, 
se distingue de ses devanciers en ce que, au lieu de soumettre à des 
mouvements et à des chocs le liquide dans lequel se faisait la culture, 
il s'est contenté d'agiter pendant une demi-heure ou une heure, à la 
main ou au moyen d'un métronome, le liquide dans lequel il venait 
de faire l'ensemencement. Après quoi, ce liquide était soumis aux 
méthodes ordinaires de culture. M. Schmidt n'a obtenu dans cette 
voie que des résultats ou peu marqués, ou incertains, ou contradic- 
toires, et ne s'est guère préoccupé de chercher la raison de ces con- 
tradictions. 

INons conclurons de tout ceci, au point de vue qui nous préoccupe, 
que la question de l'influence du mouvement sur la multiplication 
des germes de l'eau est une de celles qu'il est besoin de reprendre 
avec la rigueur que comportent nos connaissances actuelles à ce sujet. 

Dx. 


58 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

STATE BOÂRD OF HEALTH OF MASSACHUSETTS. 

Examen des eaux d'alimentation et des eaux du pays. Boston, 1890. 

Les bureaux sanitaires des États-Unis ont l'iialjitude de publier le 
résumé de leurs travaux dans des brocbures qui sont largement répan- 
dues dans le pays, mais qui arrivent peu en Europe, et c'est dommage, 
car elles sont en général riches en documents intéressants *. Le bureau 
du Massachusetts vient, par exemple, de faire imprimer, pour l'année 
1890, deux forts volumes bourrés de tableaux, de chiffres, de faits 
intéressants. Et ce ne sont pas des documents statistiques, comme 
ceux avec lesquels nous voyons jongler si agréablement nos adminis- 
trations d'Europe, et qui rendent sacrés les livres oiî on les encadre. 
Ce sont des résultats d'analyses, des expériences faites dans diverses 
directions, et toutes assez intéressantes pour faire de ces deux volumes 
une mine féconde de renseignements pour tous ceux qui auront à 
s'occuper de l'aménagement des eaux potables ou de l'utilisation des 
eaux d'égout. 

Il serait impossible de toucher, même en allongeant beaucoup 
cette revue, à tous les points étudiés dans ces deux volumes. Beaucoup 
n'ont d'ailleurs d'intérêt que pour le xAIassachusetts. Tels sont, par 
exemple, les analyses des eaux de 13.j services puijiics de la région, 
analyses faites au point de vue de l'ingénieur, du chimiste et du bio- 
logiste, et aussi celles des eaux de 18 rivières ou fleuves, soumis à 
une étude méthodique. Un grand nombre de ces services puisent 
leurs eaux dans des galeries creusées dans les rives des fleuves, et les 
tableaux des analyses pourraient fournir des données précieuses pour 
discuter la question de savoir si les eaux des galeries latérales 
viennent du fleuve ou des nappes d'eau souterraines. Il suffirait de 
rechercher les ressemblances ou les différences de composition entre 
l'eau du fleuve et celle de la galerie le même jour. MM. Stearns et 
Drown ont étudié à ce point de vue les eaux de la galerie filtrante de 
Brookline, sur les bords du Gharles-River. La moyenne des détermina- 
tions mensuelles pendant deux ans est représentée par les nombres 
suivants, qui sont des cent millièmes. 

Ariininniaque Azote Clilore 

libre allHiminoïde Niti-atcs Xitriles 

0,0013 OMM 0,0094 0,0001 0,37 

0,0003 0,00it 0,0:>!)9 0,0000 0,53 

1. Les publications du Proyi»iaai Board of Heallli de l'Ontario, que j'ai sous les 
yeux, témoignent aussi de l'attention qu'on accorde à ces questions au Canada, 
mais les questions qui y sont traitées sont surtout des questions locales. 


Résidu sec 


Rivière 


5,07 


Galerie 


6.79 


REVUES ET ANALYSES. 5!) 

Il est regrettable que dans toutes ces analyses, on n'ait jamais 
noté la température. C'est pourtant un élément important au point de 
vue de l'hygiène, et qui permet d'étudier les questions d'origine et de 
comparaison des eaux. Mais, en nous bornant aux éléments qui pré- 
cèdent, on voit que les eaux de la rivière et de la galerie n'ont entre 
elles aucune ressemblance; celles de la galerie témoignent, par leur 
richesse en nitrates et en chlore, leur pauvreté en ammoniaque liin^e 
et en matière albuminoïde, que ce sont des eaux ayant subi une fdtra- 
tion poreuse et s'étant purifiées dans les couches aérées du sol. Les 
eaux de la rivière portent la trace de la souillure qu'elles ont subie le 
long des rives. 

Il faut noter que les nombres cités sont des moyennes. On trouve- 
rait des écarts encore plus grands si on entrait dans le détail des 
analyses. Nous ne pouvons que signaler cette mine de renseignements. 
La discussion et l'interprétation des nombres fournis par l'analyse 
chimique pour les divers éléments étudiés sont faites par le professeur 
Drown avec beaucoup de méthode et de sens pratique, et il y a quelque 
intérêt à faire sonner bien haut aux oreilles de nos conseils d'hygiène 
deux de ses principales conclusions : l'une, qu'une seule détermination 
dans une analyse chimique d'une eau ne peut rien nous dire sur sa 
constitution réelle; la seconde, qu'une analyse complète ne nous 
donne que la constitution de l'eau au moment où l'échantillon a été 
pris. 11 n'y a, il est vrai, rien de nouveau dans ces conclusions, qui 
semblent même être des na'ivetés. Rien n'est pourtant commun comme 
de voir porter un jugement sur une eau sur le vu d'un bulletin 
d'analyse. 

Les travaux du bureau du Massachusetts donnent une idée de la 
variété d'études à faire sur une eau avant d'être assuré de sa qualité, 
études géologique, chimique, microscopique, nombre et nature des 
microbes contenus, présence ou absence des algues, conferves, 
diatomées, des amibes, des spongiaires, distribution suivant les 
saisons de la matière vivante et de la matière morte, questions de 
température, tous ces éléments doivent entrer en ligne de compte et 
ne sont pas l'œuvre d'un jour. 

Au sujet de la grande question de l'épuration des eaux d'égout, on 
trouve dans les deux volumes que j'analyse en courant des documents 
nombreux et précis. Ce sont les résultats d'expériences en grand, 
faites par M, Hiram Mills, à la station expérimentale de Lawrence, sur 
de grandes cuves de bois de cinq mètres de diamètre et de deux mètres 
de profondeur, étanches et pourvues d'une canalisation permettant 
d'y répandre de l'eau d'égout et de l'en retirer. Ces cuves étaient remplies 
des matériaux au travers desquels on voulait étudier la filtration, 
sable de diverses grosseurs, terres végétales, tourbe, marne ou mélanges 


60 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 

de ces divers éléments. On amenait à la surface de ces sols artificiels 
de l'eau d'égout, préalablement analysée, ne contenant pas en 
moyenne plus de deux millièmes de matière organique, et on cher- 
chait ce que devenait cette matière après filtration intermittente ou 
continue de l'eau qui la contenait. Il suffit d'avoir indiqué ces moyens 
d'action et énoncé ce programme pour comprendre ce qu'a pu tirer du 
tout un esprit avisé et méthodique comme celui de M. Iliram Mills. Il 
est impossible de résumer la quantité considérable de faits intéres- 
sants qu'il a rencontrés dans cette étude. Il renonce lui-même a 
rassembler tous ces faits dans le résumé général qu'il donne (t. II, p. 577) 
de ces expériences. Je renonce de mon côté à le suivre dans ce résumé, 
qu'il aurait peut-être fait plus court s'il avait eu connaissance des 
notions que nous avons maintenant, grâce aux tout récents travaux 
de jM. AVinogradsky, sur le phénomène de la nitrification. 

On devine en effet que c'est la nitrification qui est le fait intéressant 
de toutes ces purifications de l'eau d'égout dans le sol, nitrification 
qui exige le concours de deux espèces d'êtres, le ferment nitreux, qui 
transforme l'ammoniaque en acide nitreux, et le ferment nitrique qui, 
incapable d'agir sur l'ammoniaque, transforme l'acide nitreux en acide 
nitrique. Ces deux êtres microscopiques ont pour caractère commun 
d'avoir besoin tous deux d'oxygène pour leur fonctionnement physio- 
logique. D'où la conclusion que, pour les faire prospérer, il faudra multi- 
plier autant que possible les surfaces de contact de l'eau à nitrifier 
avec l'air. On s'explique ainsi que la nitrification soit impossible dans 
la filtration continue des eaux d'égout, et n'accompagne que la filtra- 
tion intermittente. On comprend aussi ((u'elle soit réduite au minimum 
ou même nulle dans des terres trop fines, ou trop compactes, et qu'elle 
ne marche bien que dans un sable à gros éléments, où les grains se 
recouvrent, au moment de l'arrosage, d'une couche fine de liquide que 
baigne l'air qui circule dans les intervalles qu'ils laissent libres. Un 
pareil milieu peut être transformé en un véritable milieu de culture, et 
devenir un moyen d'oxydation puissant. Il suffit de tàter, au moyen 
del'analyse chimique, la puissance nitrifiante des microbes qui y pren- 
nent naissance, d'y proportionner l'arrivée de l'eau d'égout, en tenant 
compte de ce qu'elle contient d'éléments utilisables, de la température. 
On voit ainsi les ferments nitrifiants devenir de plus en plus les maîtres 
du terrain, grâce à ce traitement qui les favorise, et M. Iliram Mills 
est arrivé à avoir des filtres qui brûlaient la matière organique de 
l'eau d'égout versée à la dose de 120,000 gallons par acre et par jour, 
ce qui correspond à peu près à 4,350 mètres cubes à l'hectare, soit à 
135 litres par mètre carré ou à une couche d'eau de 135 millimètres. 
L'eau qui sortait du filtre ne contenait, à l'état organique, que un ou 
deux centièmes de la matière organique de l'eau d'égout; au point 


REVUES ET ANALYSES. 61 

de vue do l'anah-se chimique, c'était une eau 1res pure et à laquelle on 
n'aurail pu contesler la iiualilé d'eau potable. 

Elle avait aussi cette qualité au point de vue du nombre des bac- 
téries qu'elle contenait. Un des plus curieux résultats du travail de 
M. Iliram Mills est en ell'et d'avoir montré que le nombre des bactéries 
dans l'eau qui a traversé le filtre, diminue d'autant plus que la nitrifi- 
cation est plus énergique, et peut tomber à quelques unités par centi- 
mètre cube. Gela se comprend sans peine. Les ferments nitreux et 
nitrique s'emparent du terrain, en chassent par des phénomènes de 
concurrence vitale, ou détruisent par les produits auxquels ils donnent 
naissance, les autres bactéries, qu'ils remplacent sans doute dans le 
liquide effluent. Mais comme ils ne sont pas cultivables sur les milieux 
ordinaires, on ne les voit pas, et on ne constate que la disparition des 
bactéries banales. 

C'est certainement en partie à cette substitution de la bactérie 
nitrifiante aux bactéries ordinaires, qu'il faut attribuer le fait si sou- 
vent observé de la diminution du nombre des bactéries cultivables à 
mesure qu'on pénètre de plus en plus profondément dans le sol. Mais, 
si on voulait voir partout l'action de cette cause, on trouverait dans le 
travail de M. Mills des arguments contraires à cette idée, tirés de ce 
qui se passe dans la filtration continue de l'eau d'égout alors qu'il n'y 
a pas de nitrification. 

Le mécanisme de ce qui se passe alors me semble un peu plus 
simple que celui qu'esquisse M. Mills. De l'eau d'égout, chargée de 
matière organique en suspension et en solution, en abandonne une 
partie dans les pores ou le long des parois sableuses qu'elle parcourt, 
et il se forme ainsi un dépôt, dont s'emparent les ferments des matières 
hydrocarbonées et ceux des matières albuminoïdes. L'action des pre- 
miers est connue, et va de dédoublements en dédoublements, jusqu'à 
l'état d'eau et d'acide carbonique. Celle des seconds est plus intéres- 
sante. Un premier groupe préside à la destruction de la matière 
albuminoïde. Chacun des membres de ce groupe donne, comme je l'ai 
montré, un peu d'ammoniaque, comme les ferments du sucre donnent 
de l'acide carbonique, mais aucun ne pousse à bout la destruction de 
la matière dont il se nourrit. Il la prend à un certain niveau, la fait . 
descendre de quelques degrés et l'abandonne alors à une autre espèce 
qui en pousse la dégradation plus loin, et ainsi de suite, jusqu'à ce que 
tout soit devenu de l'acide carbonique, de l'eau et de l'ammoniaque. 
Ces microbes, agents de destruction de la matière organique azotée, 
sont ceux que nous pouvons et que nous savons cultiver dans nos 
milieux de culture; mais, bien que l'ammoniaque soit utilisable par les 
plantes, elle est encore plus facilement assimilable quand elle est 
transformée en nitrates, et c'est alors qu'interviennent les ferments 


62 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

nitreux ou nitrique, qui, eux, ne supportent pas le contact de la matière 
azotée ou même hydrocarbonée, car M. 3Iills a constaté que l'addition 
de sucre gênait plus la nitrification qu'elle ne l'aidait. 

Ces ferments nitreux etnitrique, eten général les ferments oxydants, 
sont rares ou absents lorsque l'eau d'égout traverse le filtre d'une 
façon continue; mais, bien qu'alors la masse du filtre soit occupée par 
des bactéries cultivables, et que, par conséquent, la richesse en 
bactéries de l'eau effluente paraisse plus grande que lorsqu'il y a 
nitrification, elle ne peut pas atteindre, ou n'atteindra que dans des 
cas particuliers, la richesse de l'eau que l'on soumet à la filtration. 
d'abord à cause de l'arrêt mécanique des bactéries par les parois 
poreuses du filtre, et par la couche glaireuse d'organismes qui le 
recouvre au bout de quelques jours, et qui agit comme filtre, ainsi que 
cela résulte des études faites à Berlin par M. Piefke. Vient ensuite 
l'influence de la transformation subie, au contact des couches supé- 
rieures du filtre et des bactéries y contenues, par la matière organique 
de l'eau. Elle en ressort chargée de produits d'excrétions et de sécré- 
tions bactériennes, et momentanément plus impropre à alimenter une 
vie nouvelle. La richesse en bactéries du sol filtrant doit donc aller en 
décroissant avec la profondeur, et ce n'est que lorsque l'eau change 
de milieu, qu'elle est exposée à l'air ou mise au contact de surfaces 
nouvelles, qu'elle peut laisser proliférer à nouveau les germes qu'elle 
a emportés. 

On trouve dans les tableaux et le résumé de M. Mills un exemple 
bien frappant de cette différence entre les effets de la filtration intermit- 
tente et continue. Un petit filtre, le no 12, soumis à la filtration inter- 
mittente de trois gallons (13 litres) d'eau par jour, brûlait 99,2 de 
la quantité totale d'ammoniaque de l'eau d'égout qu'on y versait. 
Maintenu plein d'eau et avec le même débit par jour, la nitrification 
cessa en moins d'un mois; la quantité totale d'ammoniaque libre et 
albuminoïde alla en augmentant pendant trois mois, de façon à 
dépasser celle de l'eau d'égout. En revanche, la quantité de matière 
albuminoïde était moindre dans l'eau effluente que dans l'eau versée 
à la surface. Ce double effet montre que la matière albuminoïde 
se détruisait, en prenant la forme de produits plus ou moins dégradés, 
dont l'azote se transforme plus facilement en azote albuminoïde que 
celui de l'albumine initiale. En même temps, une certaine quantité de 
matière organique était retenue, par affinité capillaire, dans la masse 
du liltre, car en le laissant se vider, et en y reprenant la filtration 
intermittente, la nitrification reprit avec force et donna en azote 
nitrique cinq pour cent de plus qu'il n'y en avait dans le liquide qu'on 
versait sur le filtre. Au bout de trois mois, le filtre était nettoyé par 
les ferments nitriques. Le total des ammoniaques à la sortie n'était 


REVUES ET ANALYSES. 63 

que 0,7 de ce qu'il était à l'entrée, et montait seulement à 
0,0151 parties sur 100,000, c'est-à-dire à un niveau inférieur à la 
moyenne de toutes les eaux de boisson de l'Etat de Massachusetts. 

Il serait trop long d'entrer dans le détail des diverses observations 
faites sur l'influence qu'exercent sur la rapidité de la nitrification, la 
température, la nature physique et chimique de la terre des filtres, les 
diverses substances mélangées au liquide à nitrifier. Il faut renvoyer 
pour tout cela à la publication américaine. On voit qu'elle nous fait 
entrer plus avant dans la connaissance du problème à la fois hygié- 
nique et social de la nitrification, et qu'elle prépare le jour, plus voisin 
de nous qu'on ne pense, oi^i on sera assez maître des procédés de 
culture des ferments nitreux et nitrique pour pouvoir transformer les 
dépotoirs en fabriques de nitrates, et n'envoyer dans les cours d'eau 
que des eaux d'égout presque transformées en eaux potables. Avec une 
combustion de 230 grammes de matière organique par mètre carré et 
par jour, chiffre inférieur à nombre de ceux de M. Iliram 3Iills, il ne 
faudrait que 200 hectares de surface filtrante pour nitrifier les 
500,000 kilogrammes de matière organique morte, odorante et 
nuisible, que Paris vomit chaque jour. Dx. 


M. Nencke et N. Sierer. Sur la nature des gaz produits dans les fer- 
mentations d'albumine. Sitzunysber. d. k. Akad. d. Wisseitsch. 
in Wien., t. 98, mai 1889. 

Les produits de diverses fermentations putrides répandent quelque- 
fois une odeur qui n'est pas l'odeur franche de l'hydrogène sulfuré, et 
rappelle un peu celle dumercaptan éthylique. Les gaz dégagés de ces 
fermentations donnent, en passant au travers d'une solution de bichlo- 
rure de mercure, un précipité qui a la même odeur. Or le mercaptan- 
éthyle n'est pas gazeux, et on croyait aussi, sur la foi de Dumas et 
Peligot, qu'il en était de même du mercaptan-méthyle. Mais lorsque 
P. Klason a eu montré que ce dernier corps était gazeux à la tempé- 
rature ordinaire, il a été permis d'y rechercher la cause de l'odeur 
de certaines putréfactions, et M. Nencki et N, Sieber ont en effet 
réussi à le découvrir dans les produits de l'action du B. liquefa- 
ciens magnus et d'autres microbes sur l'albumine, et surtout dans 
celle qu'exerce sur la viande un bacille rencontré par Eisentohr dans 
des cas d'emphysème de la muqueuse de l'estomac ou de Fintestin. Ce 
méthylmercaptan précipite les solutions de bichlorure de mercure ou 
d'acétate de plomb, en donnant des prismes microscopiques à 4 pans 
du corps (C IP S)^ ITg, ou des tablettes et des prismes du corps 
(G H^ S)'2 Pb. Dx. 


64 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


INSTITUT PASTEUR 

STATISTIQUE ' DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE — DÉCEMBRE 1891, 


Morsures aux mains 


Morsures à la tête ( simples 

et à la figure \ multiples . . . . 
Cautérisations efficaces 

— inefficaces 

Pas de cautérisation 

simples 

multiples . . . . 
Cautérisations efficaces 

— inefficaces 

Pas de cautérisation 

Morsures aux mem- | simples 

bres et au tronc i multiples . . . . 
Cautérisations efficaces 

— inefficaces 

Pas de cautérisation 

Habits déchirés . . 

Morsures à nu 

Morsures multiples en divers points du 

corps 

Cautérisations efficaces 

— inefficaces 

Pus de cautérisation 

Habits déchirés 

Morsures à nu 


3/. 


I " 


Si- 


Totaux. 


Français et Algériens . 
Etrangers 


19( 
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3 


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65 

7 


72 


24, 

1 


14 


13 


35 


Total général 129 


i. La colonne A comprend les personnes mordues par des animaux dont la 
rage est reconnue expérimentalement; la colonne B celles mordues par des ani- 
maux reconnus enragés à l'examen vétérinaire; la colonne C les personnes mordues 
par des animaux suspects de rage. 

Les animaux mordeurs ont été : chiens, 121 fois; chats, 
7 fois; muhjt, 1 fois. 


Le Gérant : G. Masson. 


Sceaux. — Imprimevie Ctiaiaire et C'' 


Annales de l'Institut Pasteur 


np. A Lafontaine A fils Pans 


YTW 


V. fiou^sel del et )ith 


G"«« ANNEE. FÉVHIEIl 1892. N» 2. 

ANNALES 

DE 

L'INSTITUT PASTEUR 


RECHERCHES 

SUR LA 

FIXATION DE L'AZOTE LIBIIE PAl! LES PLANTES 

Par mm. Th. SCHLOESING fils et Em. LAURENT». 


Les principaux travaux dont a été l'objet la question de la 
fixation de l'azote libre par les plantes, sont présents à la mémoire 
de tous ceux qui s'occupent de science agricole. Aussi nous 
paraît-il superflu de les rappeler; d'ailleurs, il en existe déjà des 
revues complètes (B. Frank, Annales de la Science agronomique 
française et étrangère, 1888, et Hellriegel et Wilfarth, même 
recueil, 1890). 

En nous dispensant de parler de ces travaux, nous ne sau- 
rions vouloir les laisser dans l'ombre ; la notoriété de leurs 
auteurs, Boussingault, G. Ville, Lawes, Gilbert et Pug-h, Hell- x 
riegel et Wilfarth% etc., les défend contre une pareille intention. 

1. Comptes rendus, t. CXI et CXIIL 

2. Une place tout à fait à part est due aux plus importants de ces travaux, à 
ceux de ILM. Hellriegel et Wilfarth. Dans leur expérience, que nous considérons 
comme fondamentale, où un pois cultivé en vase à peu près clos, a fourni un gain 
d'azote indubitable, ils ont bien réellement démontré la fixation de l'azote libre 
par cette légumineuse. Nous tenons en haute estime leurs nombreuses et belles 
expériences exécutées à l'air libre. Elles ont été fécondes en résultats importants 
et ont conduit à cette brillante découverte du rôle des microbes, producteurs de 
nodosités, dans la fixation de l'azote. Mais, il faut le reconnaître, s'il en est résulté 


66 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

On ne trouvera pas dans ce qui suit l'énoncé de propositions 
bien nouvelles. Tout ou presque tout a été dit déjà sur la ques- 
tion qui nous intéresse. Le pour et le contre ont été soutenus. 
La nouveauté, en pareil cas, consiste surtout à produire de 
bonnes démonstrations. C'est à quoi ont tendu nos etforts. 

Nos recherches ont été entreprises sur le conseil de M. Du- 
claux, qui n'a cessé, nous lui en sommes bien reconnaissants, 
de leur accorder le plus bienveillant intérêt. 


METHODES 
ADOPTÉES DANS NOS RECHERCHES 

Dans les diverses recherches auxquelles il vient d'être fait 
allusion, on a toujours usé de la même méthode, inaugurée par 
Boussingault, pour déterminer si la fixation de l'azote avait lieu. 
Cette méthode repose sur la comparaison des quantités d'azote 
renfermées par les graines, les récoltes et les sols pris au début 
et à la fin des expériences. Elle est, à coup sûr, susceptible d'une 
grande précision lorsqu'elle est bien pratiquée, mais elle laisse 
toujours quelque place au doute. En elfet, elle permet bien de 
constater positivement, avec certaines plantes, un gain d'azote, 
c'est-à-dire un excès de l'azote existant à la fin d'une expérience 
dans le sol et la récolte sur l'azote contenu au début dans le sol 
et les graines; mais quant à l'origine même de l'azote gagné, elle 
est impuissante à la montrer réellement, et quand, à la suite des 
résultats qu'elle avait fournis, on a admis pour origine de cet 
azote l'azote libre de l'atmosphère, c'est qu'on n'apercevait pas 
d'autre origine possible. 11 y a là un procédé de démonstration 

d'une manière positive que les Légumineuses prélèvent de l'azote sur l'atmosphère, 
elles n'ont nullement démontré que l'origine de l'azote prélevé lût l'azote libre 
plutôt que les composés azotés de cette atmosphère. Le raisonnement qui s'appuie 
sur la rareté de ces composés pour montrer leur insuffisance comme source 
d'azote, est, pour des expériences faites en présence d'une quantité d'air illimitée, 
sans aucune force. D'ailleurs, tous les composés azotés de l'atmosphère ne sont 
peut-être pas connus. Qui pourrait affirmer qu'elle ne contient pas, par exemple, 
quelques dix-millièmes de protoxyde d'azote, qui prendrait naissance sous l'in- 
fluence des décharges électriques? Bien habile serait l'analyste à qui une telle dose 
d'un tel corps n'aurait pas échappé. Les Légumineuses eussent été douées de la 
faculté spéciale d'absorber l'azote de ce composé et non l'azote libre, que toutes 
les expériences de MM. Hellriegel et Wilfarth, sauf celle que nous avons mise à 
part, ne l'eussent point révélé. 


LWZOTE LIBRE ET LES PLANTES. 67 

d'un ordre un peu inférieur, qu'on n'accepte, en généra], que 
comme pis-aller, et auquel il esi désirable de ne pas s'arrêter 
dans une question capitale. 

Pour savoir réellement si l'azote libre était absorbé par les 
plantes, pour prouver sans réplique cette absorption, au cas où 
elle aurait lieu, il nous a paru qne le meilleur moyen était de 
s"appu}'er sur la mesure de l'azote gazeux mis en rapport avec 
les plantes au cours de leur développement, de déterminer le 
volume de cet azote avant et après culture, et de comparer les 
deux déterminations; si l'on observait ainsi une disparition 
d'azote, on pourrait aflirmer qu'une partie du gaz a été fixée. 
Mais la fixation serait-elle due alors aux plantes ou aux sols qui 
les auraient portées? Des expériences témoins permettraient 
d'en décider. A côté des sols avec plantes, on aurait, dans des 
conditions identiques, les mêmes sols sans culture; et l'on ver- 
rait, toujours par la mesure de l'azote libre mis en contact avec 
eux, si ces sols nus auraient fixé du gaz azote. Dans le cas delà 
négative, on serait en droit d'attribuer aux plantes la fixation. 

Telle est la métbode que nous avons suivie. On peut l'appe- 
ler directe, parce qu'elle donne directement la réponse à la ques- 
tion qui nous occupe : l'azote libre est-il absorbé par les plantes? 

Mais elle ne nous a pas suffi. Nous avons employé en même 
temps, en la rendant aussi complète que possible, la méthode 
ordinairement en usage, dont il a été parlé plus haut et qu'on 
peut appeler indirecte. Celle-ci consiste exactement àdoser l'azote : 
1° avant culture, dans les sols et les g-raines, et 2° après culture, 
dans les sols et les plantes; quand il y a fixation d'azote, le 
deuxième dosage donne plus que le premier. Cette méthode 
permet alors de retrouver dans les plantes à l'état combiné 
l'azote dont on a constaté la disparition à l'état gazeux par la 
méthode directe. En général, on ne l'y retrouve ]);is intégrale- 
ment; c'est dans le système formé par les plantes et le sol qui les 
porte, qu'il se retrouve; et cela, à cause des échang-es d'azote qui 
s'eft'ectuenl entre ces plantes et ce sol, parce que, d'une part, les 
plantes prennent de l'azote au sol et que, d'autre part, leurs 
racines y laissent toujours des débris, ne fût-ce que des poils radi- 
caux, quelque soin qu'on prenne pour les en séparer intactes. 
C'est pourquoi on doit rechercher l'azote fixé par les plantes dans 
l'ensemble des plantes et du sol ; on n'a pas à craindre de com- 


68 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

prendre dans cel azote celui qu'aurait pu fixer le sol, si une expé- 
rience témoin prouve qu'il n'en fixe pas. 

Les deux méthodes doivent s'accorder dans leurs résultats : 
s'il y a fixation, la disparition d'azote gazeux qu'indique la 
méthode directe doit égaler le gain d'azote trouvé par la méthode 
indirecte; s'il n'y a pas fixation, la méthode directe doit fournir 
autant d'azote gazeux avant qu'après culture, et la méthode indi- 
recte un gain d'azote nul. Toute expérience oii les deux méthodes 
ne s'accorderaient dans les limites des erreurs admises, doit être 
rejetée. On voit qu'il y a là un contrôle qui donne des garanties 
d'exactitude peu communes. 

De telles garanties nous ont semblé indispensables. Dans une 
question aussi controversée que celle de la fixation de l'azote 
gazeux par les plantes, il importe aujourd'hui de ne plus pro- 
duire que des expériences capables d'inspirer confiance ; autre- 
ment, on risque d'entretenir une confusion qui n'a que trop duré. 
Ayant donc le désir d'arriver à des résultats dont l'exactitude 
parût tout à fait certaine, nous n'avons pas hésité à mettre en 
pratique simultanément les deux méthodes, malgré les compli- 
cations et le surcroît de travail qui en devaient résulter. 

Quelques explications sont encore nécessaires pour bien faire 
comprendre notre manière de procéder, dont nous n'avons indi- 
qué jusqu'ici que le principe. 

Voyons d'abord ce qui concerne la méthode directe. 

L'azote gazeux employé aux expériences devant être mesuré 
au début et à la fin, celles-ci auront lieu en vases clos. Au début, 
on fera le vide aussi parfaitement que possible dans les appareils 
et l'on introduira l'azote et les autres gaz convenables ; à la fin, 
on fera le vide de nouveau pour extraire la totalité du gaz azote. 

Du fait que les cultures se feront en vases clos résultent des 
difficultés spéciales. Les végétaux consomment de l'acide carbo- 
nique et émettent de l'oxygène, et il faut qu'ils aient à leur dis- 
position une atmosphère oii ces deux gaz restent compris entre 
certaines proportions. Si l'on n'était pas limité pour le volume 
des appareils, on pourrait faire les cultures dans des récipients 
de très grandes dimensions; on y introduirait au début, avec de 
l'azote et de l'oxygène, une provision convenable d'acide carbo- 
nique, et l'on ne se préoccuperait pas des variations subies, au 
cours de la végétation, par la composition de l'atmosphère con- 


L'AZOTE LIBRE ET LES PLANTES. 69 

fiiiôe ; l'acide carbonique ne manquerait jamais et l'oxygène ne 
serait jamais en trop grande abondance. Mais le volume des 
appareils ne peut dépasser certaines limites, si l'on veut mesu- 
rer très exactement l'azote ; plus il sera réduit, plus les mesures 
auront de précision. Cependant on ne saurait non plus le trop 
réduire; autrement, les plantes n'auraient plus l'espace néces- 
saire à leur développement. Tenant compte des diverses condi- 
tions à observer, nous avons adopté généralement, pour les réci- 
pients où se feraient les cultures, des dimensions telles qu'ils 
continssent de 5 à G litres de gaz. Avec un tel volume, il était à 
prévoir que la composition de l'atmosphère incluse subirait par- 
fois des variations assez rapides; on devait pouvoir la surveiller 
de près et la corriger suivant les besoins. 

A cet effet, on s'était réservé les moyens de l'analyser ; on 
verra en quoi consistent cesmoyens. Quand l'analyse montrerait 
que l'acide carbonique va faire défaut, on en ajouterait; quand 
elle indiquerait un excès d'oxygène, on absorberait une 
proportion convenable de ce gaz. 

Après avoir songé à divers moyens de réaliser cette absorption, 
nous avons choisi celui qui consiste à faire passer une partie des 
gaz confinés sur de la tournure de cuivre convenablement 
chauffée. 11 y a d'autres corps que le cuivre dont on peut se 
servir pour absorber l'oxygène. Mais les circonstances de leur 
oxydation en présence des gaz de l'atmosphère sont moins par- 
faitement connues, et l'on aurait pu craindre que cette oxydation 
ne fût accom])agnée d'une petite production de composés azotés, 
ce qu'il nous fallait éviter à tout prix. Le cuivre est complète- 
ment à l'abri d'un pareil reproche. 

Une des principales difficultés des présentes recherches est 
assurément la mesure de l'azote libre. Un volume relativement 
grand de ce gaz est mis en œuvre, et la variation qu'il subit 
entre le commencement et la fin de chaque expérience, n'est pas,, 
on peut le prévoir, considérable. On doit donc le mesurer, si 
l'on veut nettement saisir la variation, avec une extrême 
précision. Tous nos efforts ont été dirigés de ce côté. Nous 
pensons, grâce à un ensemble de dispositifs et de procédés qui 
seront décrits, avoir atteint le but d'une façon satisfaisante. 

Il était naturel de se demander s'il ne conviendrait pas 
d'introduire dans les appareils l'azote gazeux et, du même coup, 


70 ANNALES DE L'INSïlTUÏ PASTEUR. 

l'oxygène qui dès le début est nécessaire, en ayant simplement 
recours à del'airpur. Du volume, rigoureusement déterminé, de 
l'air employé, on déduirait, d'après sa composition, le volume 
de l'azote. On éviterait ainsi de préparer et de l'azote et de 
l'oxygène. Nous avons cru devoir rejeter cette simplification. 
En effet, il règne encore sur la composition de l'air une incer- 
titude, légère sans doute, mais qui pourtant atteint peut-être 
quelques dix-millièmes de la proportion d'azote. De l'emploi 
d'un volume de S à 6 litres d'air peut résulter une erreur de 1, 
2 ou 3 'c d'azote ; une erreur de cet ordre n'est pas ici négli- 
geable. 

On aurait pu aussi être tenté, à la fin de chaque expérience, 
de mesurer et d'analyser avec soin le mélange des gaz extraits 
et de calculer, d'après les résultats trouvés, le volume de l'azote 
gazeux final. Pour éliminer les erreurs d'analyse, nous avons 
encore préféré séparer l'azote, par des réactifs convenables, des 
gaz qui l'accompagnaient et le mesurer à l'état de pureté. 

Ainsi, l'azote gazeux destiné aux expériences a été mesuré 
à l'état libre et pur au début ; il a été mesuré de nouveau à l'état 
libre et pur ' à la fin, et ces mesures ont été faites dans le 
même volumèlre. Nous nous sommes mis ainsi, pensons-nous, 
dans les meilleures conditions pour apprécier avec rigueur la 
différence qui pourrait survenir entre le volume initial et le 
volume final de l'azote. 

Les gaz enfermés dans les appareils subissent à divers 
moments le contact du mercure. Ils peuvent apporter aux 
plantes et au sol des vapeurs de ce métal. Il y a là un danger, 
certain pour les plantes supérieures et possible pour les orga- 
nismes inférieurs qui auraient à se développer dans le sol. (Jn 
l'évite en faisant en sorte que les gaz, avant de pénétrer dans le 
récipient contenant le sol et les plantes, passent dans un long- 
tube rempli de fragments de soufre. Moyennant cette précaution, 
nos plantes n'ont point paru souffrir de la présence de la vapeur 
mercurielle : on n'y a jamais observé des taches noires caracté- 
ristiques de l'action de cette vapeur. Quant aux organismes 
inférieurs, on doit remarquer qu'en voulant, par l'emploi du 
soufre, les défendre contre la va[)eur mercurielle, on les expose 

1. Sauf dans les deux premières expériences, ainsi qu'on verra. 


L'AZOTE LIBRE l-T LES PLANTES. 71 

peut-être à un autre danger provenant du soufre lui-même. Le 
soufre est, en effet, nuisible à certaines végétations cryptoga- 
miques. Est-il, à craindre que dans nos expériences il se soit 
opposé à uu développement d'organismes qu'il aurait été utile 
de ne pas entraver? Pour agir sur l'oïdium, par exemple, le 
soufre, employé à la température ordinaire', doit être à 1 état 
de poudre offrant une très grande surface et entrer en contact 
assez intime avec le champignon. Ce n'est pas dans ces condi- 
tions que nous en avons fait usage. Les plantes et le sol en 
étaient tout à fait séparés. Qu'on se figure que sous une cloche 
on ait, à la température ordinaire, d'une part, un morceau de 
soufre et, à côté, toutes sortes de cultures de microbes. Il n'est 
guère à penser que dans cette disposition, qui est une image 
de la nôtre, il se trouverait des cultures dont le voisinage du 
soufre arrêterait le développement. Nous sommes donc portés à 
croire que le soufre n'a pas exercé d'influence fâcheuse sur 
la vie des organismes inférieurs dans nos expériences, d'autant 
plus qu'il n'en a point exercé sur les microbes habitant les 
nodosités des Légumineuses ; cependant, nous devions attirer 
l'attention sur la possibilité d'une telle influence. 

Pour compléter notre exposé, il nous resterait à parler de la 
manière dont nous avons mis en pratique la méthode indirecte. 
Mais, comme sur ce point il y a eu quelques différences entre 
les expériences des deux années, il nous paraît préférable de n'y 
point insister dans ces généralités et de reporter plus loin les 
indications qui s'y rapportent. INous dirons seulement ici que, 
dans toutes les expériences, les sols ont été pourvus, dès le 
début, d'une provision de solution minérale nutritive telle que, 
sans recevoir d'eau dans la suite, ils présentassent un taux 
d'humidité convenable pendant toute la durée de la végétation, 
et pussent largement subvenir aux besoins des plantes tant en 
eau qu'en principes minéraux, tout en offrant aux racines des 
solutions suffisamment étendues. La totalité de la dissolution 
employée était retenue en suspension par les sols, qui auraient 
pu, on s'en était assuré dans des essais préalables, en retenir 
encore davantage sans en laisser égoutter la moindre quantité; 

i. On préserverait, paraît-il, la vigne contre l'oïdium dans certaines serres 
d'Angleterre, en projetant de la fleur de soufre sur les tuyaux des calorifères 
(Berlhelot, Annales de chimie et de physique, ô'-' série, t. VII, p. o71). 


72 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

de plus, en introduisant les sols par minimes fractions dans les 
allonges, on avait favorisé leur division en petits agglomérats; 
ils étaient par suite, dans toute leur masse, bien perméables aux 
ffaz. 


DESCRIPTION DES APPAREILS 

Appareil dans lequel se fait la culture . — L'appareil employé pour 
chaque expérience se compose d'une partie qui est située au 
dehors du laboratoire, devant une fenêtre exposée au midi, et 
qui consiste en une sorte d'allonge cylindrique en verre A 
(PL lY) où l'on fera pousser une ou plusieurs plantes, et d'une 
partie placée à l'intérieur et comprenant divers dispositifs; les 
deux parties sont reliées par des tubes traversant la fenêtre. 

L'allonge', de 6 à 7 litres de capacité, se termine à son 
extrémité inférieure par une partie hémisphérique complètement 
fermée et porte, à l'autre extrémité, une douille B. Elle repose 
aumilieud'unbassinen zinc, qu'on aura, au début età la fin d'une 
expérience, à remplir d'eau, mais qui ordinairement contient de 
la terre jusqu'au niveau du sol de culture. Cette terre est destinée 
à protéger les racines qui se développeront dans le sol, contre 
un trop fort échaufïement dû aux rayons du soleil; elle main- 
tient en même temps dans l'obscurité le bas de l'allonge. Pour 
éviter que le bassin lui-même ne s'échauffe à l'excès, on l'a 
peint extérieurement en blanc. 

La douille B de l'allonge porte un bon bouchon de caoutchouc, 
dont la partie extérieure à l'allonge est noyée dans du mercure 
que contient un manchon de verre ; ce bouchon est traversé par 
deux tubes G et D. Le tube C, d'undiamètreintérieur de 7 à 8mil- 
limètres, relie l'allonge à l'extrémité supérieure d'une trompe à 
mercure TT' ^. Sur une portion de sa longueur, il est entouré 
d'un manchon de verre, de manière à constituer un réfrigérant 
ascendant où l'on fera circuler, en temps voulu, de l'eau froide. 
Il est incliné, pour que l'eau résultant de la condensation qui 

1. 11 y en a deux grandeurs : les unes ont 12 '" de diamètre et de 55 à 60^ de haut, 
lesautres 11»; de diamètre et de 70 à 7o'^de haut; ces dernières sont réservées pour 
Jes plantes se développant eu hauteur. 

2. Deux trompes symétriques, appartenant à deux appareils voisins, sont montées 
sur un même support ; la figure n'en représente qu'une. 


L'AZOTE LIBUE ET LES PLANTES. 73 

s'y produira, revioiiiie dans l'allonge. 11 est bon d'empêcher que 
cette eau, en tombant sur le sol, ne le fouille et n'en bouleverse 
la surface. A cet effet, on la conduit dans le sol au moyen d'un 
tube à entonnoir E. 

Le tube D descend dans l'allonge jusque près du sol ; il con- 
tient dans sa partie horizontale de petits fragments de soufre, 
dont l'utilité a été indiquée. Il communique avec un tube de 
Bohème F, plein de cuivre réduit et placé au-dessus d'une rampe 
à gaz. Ce tube F s'abaisse légèrement en f, de manière à former 
une petite poche destinée à retenir des gouttes d'eau qui pour- 
raient s'être formées par condensation de vapeur et qui, venant 
cà couler vers le milieu du tube quand il est chauffé, en occa- 
sionneraient la rupture. Au tube F est reliée la tubulure latérale 
G d'un tube II, long- d'un mètre, ayant un diamètre d'environ 
20 millimètres, plongeant dans le mercure d'une petite cuve en 
verre K, de forme spéciale, et coiffant l'orifice inférieur de la 
trompe TT'. 

On voit par ce qui précède qu'il suffit de faire fonctionner la 
trompe TT' pour que du gaz, pris à la partie supérieure de A, 
soit appelé en T, refoulé par le mercure en H, puis poussé à 
travers F et D jusqu'à la partie inférieure de A. Si alors on 
chauffe F au roug'e sombre, on absorbe l'oxygène contenu dans 
le g-az. 

Le mercure qui circule dans la trompe, vient d'un flacon L, 
situé en dehors de l'appareil; l'écoulement en est réglé par une 
pince M. 11 arrive d'abord en T', larg-e tube où il abandonne l'air 
qu'il a pu entraîner, puis traverse T sous forme de gouttelettes 
séparées par des bulles gazeuses, se déverse de la cuve K dans 
l'entonnoir I, puis dans le flacon J. Le même flacon L alimente 
les trompes de plusieurs appareils. Les divers filets de mercure 
qui en sortent, se réunissent, après avoir passé par les trompes, 
en J. De cette manière, on peut faire marcher plusieurs trompes 
à la fois, en n'ayant qu'à remonter de temps à autre le mercure 
de J dans L; mais surtout on a l'avantag-e d'éloigner des parties 
délicates des appareils le maniement de récipients pesants et 
d'éviter ainsi des chances d'accident. 

Les tubes C, T, G, F et D sont reliés entre eux par des 
joints c, g et d, consistant en morceaux de bons tuyaux de 
caoutchouc épais, complètement immergés dans du mercure. 


74 ANNAF.es de L'INSTITUT PASTEUR. 

Une figure spéciale de la planche ci-jointe indique la disposition 
adoptée pour ces joints. La pression des gaz à l'intérieur des 
appareils est toujours inférieure à la pression extérieure; à 
aucun instant des expériences, elle ne lui est supérieure ni même 
égale. Moyennant celte précaution, il est impossible que les 
joints laissent se produire des fuites de gaz. Ces joints nous ont 
rendu les plus grands services. 

A la partie supérieure des tubes T et H sont soudés des 
tubes capillaires t et h; ils portent des caoutchoucs, entièrement 
noyés dans du mercure et fermés par des obturateurs de verre. 
C'est par là qu'on extrait et qu'on introduit les gaz. Il faut, en 
vue de ces extradions ou introductions, qui constituent une des 
manipulations délicates des expériences, relier temporairement 
t ou h il certains dispositifs, et la liaison doit pouvoir s'établir 
sans qu'on laisse pénétrer dans les appareils la moindre trace 
d'air extérieur. A cet effet, on procède de la façon suivante : on 
fait glisser le manchon de haut en bas, avec le mercure qu'il 
contient, le long du tube capillaire. La partie inférieure du 
caoutchouc reste toujours noyée dans le mercure. Dès que la 
partie supérieure est découverte, on dépose, sur le petit rebord 
formé par le caoutchouc autour de l'obturateur, une goutte de 
glycérine, qui demeure à cette place en raison de sa viscosité et 
qui s'oppose à toute entrée d'air entre le caoutchouc et l'obtura- 
teur de verre. Puis on serre le caoutchouc, avec une bonne 
pince à vis, immédiatement au-dessous de l'obturateur. On 
enlève cet obturateur et Ton engage dans la partie supérieure 
du caoutchouc, remplie au préalable d'eau bouillie, le tube de 
verre capillaire tel que /, devant établir la communication à 
obtenir, et plein lui-même d'eau bouillie ou de mercure. Enfin, 
on ôte la pince et l'on remonte le manchon, de façon que le 
caoutchouc repasse tout entier dans le mercure. Pour supprimer 
la communication, on serre de nouveau le caoutchouc avec. une 
pince, on enlève /, on remplit le caoutchouc d'eau bouillie et on 
y introduit un obturateur à la place du tube /: on dépose une 
goutte de glycérine sur le caoutchouc, puis on retire la pince et 
remonte le manchon. Au cours de ces manipulations, il est facile, 
avec un peu d'habitude, de ne pas laisser pénétrer dans les 
appareils une trace d'air extérieur ni perdre la moindre bulle 
des gaz transvasés. Il est pour cela nécessaire que le tube / soit 


L'AZOTE LIBRE ET LES PLANTES. 75 

capillaire ou du moins d'un 1res petit diamètre, et il est fort 
utile que les tubes et les caoutchoucs h et t le soient égale- 
ment. 

Pnnipc à mercure pour faire le vide. — Dans nos premières 
expériences (1890), nous avons employé à cette opération une 
trompe à mercure. L'obtention du vide, poussé jusqu'au point 
qu'il fallait atteindre , exigeait alors deux ou trois journées. 
Ayant cherché ensuite un appareil permettant d'opérer plus vite, 
nous sommes, par une coïncidence assez singulière, arrivés à 
construire une pompe à mercure que nous croyions nouvelle et 
qui s'est trouvée à peu près identique à l'un des modèles de 
MM. Alvergniat frères. C'est une pompe sans robinet; la capa- 
cité de son corps de pompe est d'environ 1 litre; la figure ci- 
jointe, qui la représente en PP, enfait suffisamment comprendre 
le fonctionnement '. L'emploi de cette pompe, au moyen de la- 
quelle nous faisons le vide dans un appareil de 6 litres en 
3 heures environ, a considérablement simplitîé nos expériences 
et accéléré les manipulations du début et de la fin. 

Dispositifs pour V introduction des gaz. — 1° Azote. On prépare 
l'azote à introduire dans les appareils en faisant passer de l'air 
dans un tube de Bohème qui contient une longue colonne de 
cuivre réduit et une colonne plus petite d'oxyde de cuivre, et qui 
est chauffé au rouge. L'air est puisé à l'extérieur au moyen 
d'une trompe à mercure. Le cuivre et l'oxyde sont parfaitement 
purs. L'oxyde sert à faire disparaître les traces d'hydrogène et 
des gaz carbures qui pourraient provenir de la décomposition de 
la vapeur d'eau par des impuretés du cuivre et des poussières 
organiques aspirées avec l'air ou laissées dans le tube de Bohème. 
Au sortir de ce tube, l'azote passe sur des fragments de verre 
imbibés d'une dissolution concentrée de potasse, est pris par la 
trompe et poussé dans un volumètre, dont on parlera bientôt, et 
011 il est mesuré. De là on le fait passer dans l'appareil où a lieu 
la culture. A cet effet, on raccorde la partie supérieure du volu- 
mètre à /i, au moyen d'un tube tel que /, rempli au préalable de 
mercure. Les joints de caoutchouc qui relient les divers tubes 
dont il vient d'être question sont noyés dans le mercure. 

i. Le long tube recourbé qui surmonte la pompe lui est relié au moyen d'un 
joint à mercure tel que celui que nous avon? décrit. Rien n'est plus simple dès 
lors que de le séparer de l'appareil pour les transports. 


76 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

2° 0.r}jyène. L'oxygène introduit au début des expériences 
est obtenu de la décomposition par la chaleur du chlorate de 
potasse pur. Le sel est contenu dans un petit ballon de 30 à 
40 •■••, à col étiré et courbé en forme de tube à dégagement 
(procédé Bunsen). Le ballon ayant été parfaitement purgé par le 
départ d'un grand volume d'oxygène, on engage le tube à déga- 
gement au bas du tube H sans cesser de chauffer le ballon. On 
introduit ainsi de l'oxygène jusqu'à ce que le niveau du mer- 
cure en H ait baissé de la hauteur convenable. 

3° Acide carbonique. On remplit un petit ballon ou un tube à 
essai légèrement étiré à son extrémité ouverte, avec une cen- 
taine de grammes de bicarbonate de potasse dont on a vérifié la 
pureté, spécialement en ce qui concerne l'absence de composés 
ammoniacaux et nitrés. On soude au ballon ou au tube à essai 
un long tube étroit qu'on recourbe en forme de tube à dégage- 
ment; la partie verticale de ce dernier tube a 80 ou 85 centi- 
mètres. On a ainsi le dispositif très simple qui servira à la pré- 
paration de l'acide carbonique absolument pur dont on aura 
fréquemment besoin. Il suffira, pour dégager cet acide presque 
immédiatement, de chauffer le carbonate avec la flamme d'un 
bec à gaz. Le dispositif est placé à demeure à côté du tube H. Il 
est, une fois pour toutes, purgé d'air, et son orilice inférieur 
reste désormais plongé dans le mercure de la cuve K, sans en 
plus sortir. Quand le bicarbonate se refroidit, après chaque pré- 
paration d'acide carbonique, le mercure s'élève dans le tube à 
dégagement par suite d'une réabsorption de gaz. De là la lon- 
gueur assignée au tube. 

Dispositif pour V extraction finale de t azote. — Ce dispositif est 
représenté sur la partie droite de la planche. Il comprend : la 
pompe à mercure PP qu'on doit, lors de l'extraction, relier au 
tube t\ une large cloche N coiffant l'orifice par lequel les gaz sont 
rejetés hors de la pompe et surmontée d'un tube n dont l'extré- 
mité supérieure s'élève à 80 ou 85 centimètres au-dessus du 
mercure oii baigne la cloche N; un tube Q, deux fois recourbé 
à angle droit et contenant de l'amiante imbibée d'un peu d'eau 
acidulée par de l'acide sulfurique pur; un tube de Bohême S, 
dans lequel se trouvent une longue colonne de cuivre réduit et 
une plus petite d'oxyde de cuivre, et qui est placé au-dessus d'une 
rampe à gaz; un absorbeur U, renfermant une dissolution con- 


L'AZOTE LIBRE ET LES PLANTES. 77 

centrée de potasse ' ; enfin une trompe à mercure ZZ et un volu- 
mètre UR, disposé de manière à recevoir les gaz que débitera 
la trompe. Les caoutchoucs qui raccordent les diverses parties 
de l'appareil sont, comme toujours, immergés dans du mercure 
ou, ainsi qu'il est permis pour une installation de courte durée, 
simplement dans de l'eau. Le tuyau de plomb :: est fixé à la 
trompe avec du mastic Golaz; ce joint tient parfaitement le vide. 
Les tubes n. et Q sont reliés par un caoutchouc p dont, à cer- 
tains moments, on aura à mettre le milieu à l'air libre en abais- 
sant le manchon 7Ji.- on peut alors fermer le caoutchouc en le 
serrant avec une pince, mais ses extrémités ne cessent pas 
d'être immergées. 

Les gaz extraits par la pompe arrivent en N, puis passent à 
travers les tubes Q, S, U, et sont introduits par la pompe dans 
le volumètre RR. L'amiante du tube Q est destinée à retenir les 
traces d'ammoniaque que renferment les gaz. Le tube de 
Bohême S, chauffé au rouge, arrête l'oxygène sur le cuivre; les 
gaz carbures et l'hydrogène, s'il s'en présente, sont brûlés par 
l'oxyde. L'absorbeurU retient intégralement l'acide carbonique; 
il comprend deux tubes parallèles u et u'; le tube u a 3 ou 4 mil- 
limètres de diamètre intérieur; les bulles gazeuses, séparées 
par de petites colonnes de dissolution de potasse, cheminent 
dans H, abandonnent le liquide dans la boule b et passent dans 
la trompe; le réactif revient par u' de b vers b' pour s'engager 
de nouveau dans u avec du gaz. Le- gaz sortant de U est de 
l'azote pur. Le volumètre RR est celui de M. Schlœsing père. 
L'azote y est mesuré sous un volume constant, volume qui est 
ici d'environ 1,300'""; les longueurs des colonnes mercurielles 
(compris celle du baromètre), d'où l'on déduit la pression du 
gaz, sont lues à moins d'un dixième de millimètre près ; la tem- 
pérature du gaz est appréciée à moins d'un 50® de degré; nous 
estimons que sur chaque volume d'environ 1,300 '■'^, il n'est 
commis qu'une erreur inférieure à un demi-centimètre cube, 
soit à ^,. 

Analyses rapides des gaz de rallonge^ exécutées au cours des 

^. Dans les recherches de 1890, cet alisorbeur n'a pas été employé. Le gaz 
mesuré dans le volumètre à la fin d'une expérience était un mélange d'azote et 
d'acide carbonif|ue; on en déterminait la composition avec le plus grand soin et 
l'on calculait, d'après cette composition, le volume de l'azote extrait. 


78 ANNALES DE L'INSÏJTUT PASTEUR. 

expériences. — On a une sorte de pipette V (fig. 1), formée d'un 
tube capillaire plusieurs fois recourbé, rt, a, a", et relié par un fin 
tuyau de caoutchouc avec un petit réservoir r qui contient quel- 
ques centimètres cubes de mercure. Avec cette pipette, on peut 
prélever facilement un échantillon du gaz à analyser. A cet elTet. 
ayant fait fonctionner la trompe TT', de manière à renouveler 
le gaz contenu dans le tube H, on plonge dans la cuve K la par- 
tie aa' de la pipette V, qui est supposée au préalable complète- 
ment remplie de mercure; on engage la branche a à l'intérieur 
de H et l'on élève verticalement la pipette jusqu'à ce que l'extré- 
mité supérieure de a apparaisse dans II au-dessus du niveau du 


Fig. 1. 

mercure. Maintenant la pipette dans cette position et abaissant y, 
on appelle en a, a, a" du gaz de H; on en prend ainsi environ 
1". On aspire à la suite du gaz un peu de mercure et l'on retire 
V de la cuve K. 

L'échantillon prélevé est un mélange d'azote, d'oxygène et 
d'acide carbonique; on y dose ces deux derniers gaz au moyen 
de l'appareil X. Celui-ci consiste essentiellement en un 
tube capillaire comprenant une partie horizontale .s et une 
])artie verticale -s' pourvue dans le haut d'une petite boule. La 
partie s est soudée à l'extrémité supérieure d'une petite cloche v 
de 3 ou 4cL- de capacité et porte un repère fixe <?. La partie s est 


L'AZOTE LIBIŒ KT LES PLANTES. 79 

graduée ; elle présente 35 ou 40 divisions numérotées de bas en 
haut et correspondant chacune à un centième du volume com- 
pris entre la division zéro et le trait «r; elle communique avec 
un petit réservoir à mercure // par un tuyau de caoutchouc qu'on 
peut fermer, quand il y a lieu, avec une pince t:. La cloche ^\ 
ouverte à la partie inférieure, plonge dans le mercure d'une 
petite cuve profonde W. 

L'appareil X étant plein de mercure, on fait passer en v le 
g-az compris dans la pipette V, en engageant a dans p et 
élevant r ; puis ou retire la pipette Y. Abaissant //, on amène le 
gaz en s', jusqu'à ce que le mercure, appelé de r à la suite du 
gaz, arrive exactement au trait a. On lit alors à quel point 
affleure le mercure au bas de s' \ supposons ce point à 3, 4. Au 
moyen d'une petite pipette courbe, on fait passer dans v une ou 
deuxgouttesd'uiiedissolutionconcentrée de potasse et l'on chasse 
tout le gaz dans r en élevant ?/. L'acide carbonique est rapide- 
ment absorbé. On abaisse lentement 7/ jusqu'à ce que, le g-az 
étant revenu dans s', la potasse soit montée dans s et arrive 
en <y. On lit alors le niveau du mercure dans .s', soit o,7. La 
petite colonne de potasse n'occupe qu'une portion de la branches; 
une partie de celte branche et la cloche v sont remplies de 
mercure. La branche .< étant horizontale, la hauteur du mercure 
au-dessus du niveau de la cuve W est la même lors de la 
première et de la seconde lectures. Le gaz est à la même pres- 
sion à ces deux moments. Comme d'ailleurs on peut admettre 
qne sa température est aussi la même, la différence 5,7 — 3,4 
ou 2.3, représente l'acide carbonique absoibé et le taux 
pour 100 de ce gaz dans le mélange analysé est 2,3 X ,^^"3^ 
ou 2,4. 

Pour doser l'oxygène, on fait passer en v deux ou trois 
gouttes d'une dissolution concentrée d'acide pyrogallique; on y 
envoie tapotasse et le gaz en élevant y. L'absorption de l'oxy- 
gène terminée, on ramène le gaz en s' jusqu'à ce que le pyro- 
gallate de potasse arrive en g. Le pyrogallate n'occupe encore 
qu'une portion de la partie horizontale 6'; le mercure remplit, 
sans solution de continuité, la cloche v et une partie de s, en 
sorte que la pression du gaz est la même que lors des deux 
premières lectures. On lit la hauteur du mercure dans la 
hanche s'; soit 24,8 le niveau lu. Le taux pour 100 d'oxy- 


80 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

gène dans le mélange analysé est (24,8 — 5,7) iJ^^^,, ou 19,8. 

Il est inutile d'ajouter qu'on fait en sorte que la paroi inté- 
rieure de .s' soit toujours humide, afin que, lors des lectures, les 
gaz soient saturés de vapeur d'eau ; dans le même but, on 
évite dé faire passer en ,s' la moindre trace de dissolution de 
potasse; si, par accident, il en passe, on ne manque pas de 
laver soigneusement l'appareil. 

L'analyse achevée, on fait passer l'azote restant en v; on le 
reprend dans la j)ipette V, au moyen de laquelle on le réintro- 
duit dans H. Les transvasements effectués avec la pipette se 
font sans qu'on laisse s'échapper la moindre trace du gaz, ni 
s'introduire la plus petite bulle d'air extérieur. 

On comprend l'avantage qu'il y a à opérer les dosages sur 
de très petits volumes gazeux. Si l'on venait à perdre un échan- 
tillon destiné ou ayant servi à une analyse, l'expérience à 
laquelle cet échantillon correspond ne serait en rien compromise ; 
car on connaîtrait, à une petite fraction de centimètre cube 
près, ce qu'on aurait perdu, et il serait facile d'en tenir compte. 
Déplus, les quantités d'azote dissoutes dans les réactifs employés 
et emportés avec eux, sont, même après 20 ou 30 analyses, 
absolument négligeables. 


EXÉCUTION D'UNE EXPÉRIENCE 

Dans les descriptions qui vont suivre, nous donnerons sur 
divers points des indications tout à fait détaillées. Jl nous a paru 
utile de le faire. Les expériences telles que celles qui nous 
occupent tiennent en grande partie leur valeur du soin avec 
lequel elles ont été exécutées. Pour eu juger, le lecteur a besoin 
de pouvoir se rendre compte exactement des diverses manipula- 
tions qu'elles ont comportées. 

Préparation des sols. — Des expériences ont été exécutées en 
1890 et 1891. Entre les deux campagnes, il y a eu, sous le 
rapport du choix et de la préparation des sols, une ditïérence 
importante. 


L'AZOTE LIBIIE ET LES PLANTES. 81 

En 1890, nous n'avons envisagé que la fixation de l'azote 
gazeux par un représentant de la famille des Légumineuses, le 
pois. Nous savions, par les travaux antérieurs, que, pour une 
Légumineuse, la fixation devait se faire sous l'action de certains 
microbes (Hellriegel et Wilfarth, Bréal). Nous avons pu 
employer aux expériences un sol, inerte en lui-même et stéri- 
lisé, auquel ont été ajoutés les microbes voulus. Le sol n'a 
servi que de support aux plantes et à leur dissolution minérale 
nutritive. On l'a préparé, comme il va être dit, daus le but de 
le dépouiller le mieux possible d'azote. 

Du sable quartzeux de Fontainebleau est tamisé sur un 
crible métallique, pour être débarrassé des grains les plus fins 
formant poussière. On le fait digérer avec de l'acide chlorhy- 
drique, puis on le lave parfaitement à l'eau distillée, on le 
dessèche et le calcine au rouge, afin de détruire la petite quan- 
tité de matière organique qu'il contient. Le traitement à facide 
chlorhydrique et à l'eau, en éliminant le calcaire, évite la 
présence de la chaux caustique après calcination. A la suite de 
ces manipulations, il reste dans le sable environ 2 millionnièmes 
d'azote. On y incorpore 2 grammes de phosphate tricalcique et 
2 grammes de carbonate de chaux. 

Un certain poids du sable ainsi obtenu est additionné de 
solution minérale nutritive exempte d'azote, et introduit dans 
l'allonge A, sans aucune perte. Celle-ci est fermée avec des 
tampons de coton, placée dans un autoclave et chauffée à 100° 
pendant'une heure un quart'. 

On prépare, d'autre part, les graines qui doivent être semées. 
On a fait un lot d'une dizaine de pois aussi identiques que 
possible. On en met de côté trois qui seront employés au 
dosage de l'azote, et l'on en prend trois autres pour les semer. 
Les pois à semer sont plongés, pendant dix minutes, dans une 
solution de bichlorure de mercure à 1 1,000, puis lavés à 
l'eau distillée stérilisée. L'allonge étant complètement refroidie, 
on les introduit dans trois petits trous qu'on a faits à la surface 
du sable avec un long agitateur, et on les enfouit à une profon- 

1. Dans les expériences de 1890, l'allonge n'avait pas tout à fait la forme qui a 
été indiquée. Elle portait deux tubulures latérales par lesquelles elle se reliait 
aux tubes C et D. Ce sont ces tubulures et Touverture supérieure qu'on garnissait 
de tampons de coton avant le chauffage à l'autoclave. L'ouverture supérieure était 
étirée et fermée à la lampe après l'ensemencement. • 

6 


82 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

deurde 1 centimètre environ. Puis on verse au-dessus de chacun 
d'eux, au moyen d'une pipette effilée, quelques centimètres 
cubes d'eau distillée, stérilisée, dans laquelle on a broyé 4 ou 
5 nodosités fraîches de pois et de fèves de pleine terre et qu'on a 
laissé reposer; les nodosités ont été, au préalable, plongées 
quelques instants dans une solution de bichlorure à 1/1,000 et 
abondamment lavées à l'eau stérilisée. On met ainsi à la portée 
des pois semés les microbes habitant les nodosités de pois et de 
fèves. La quantité d'azote introduite avec ces êtres n'est pas 
appréciable; on n'aura pas à la prendre en considération dans 
la suite. Nous avons observé les précautions usuelles pour 
maintenir la stérilité acquise dans l'autoclave, ou du moins 
pour ne donner accès dans le sol qu'aux microbes voulus. Néan- 
moins, ces précautions n'ont peut-être pas eu leur effet jusqu'au 
bout, parce que les gaz qu'on a eu à faire pénétrer dans l'allonge 
postérieurement à la stérilisation, ont été simplement filtrés 
sur un tampon de coton garnissant une des tubulures, et que 
ce tampon a pu être insuffisant pour arrêter tous les germes 
transportés par les gaz. Aussi n'oserions-nous affirmer qu'aucun 
microbe étranger à ceux qu'on a volontairement semés, ne s'est 
glissé dans l'allonge. Mais, en procédant par stérilisation et ense- 
mencement comme il vient d'être dit, nous voulions surtout éviter 
les moisissures qui prennent si facilement naissance dans une 
atmosphère très humide, et qui auraient pu nuire au développe- 
ment des pois, tout en mettant ceux-ci dans des conditions 
telles qu'ils portassent des nodosités sur leurs racines. Ce but a 
été entièrement alteint. 

En 1891, nos études ont été étendues à des plantes autres 
que les Légumineuses, Ignorant sous quelles influences ces 
plantes absorberaientl'azote, si toutefois elles en avaient la faculté, 
nous ne pouvions, comme avec les Légumineuses, mettre en 
œuvre des sols stérilisés et pourvus ensuite de certains microbes. 
Il nous importait d'employer, au contraire, des terres naturelles, 
et de ne rien leur retrancher de ce qui, dans des conditions 
ordinaires, pouvait -concourir au phénomène de la fixation. 
Nous avons même voulu y introduire, ainsi qu'on verra, les 
divers organismes qui se rencontrent communément dans de 
bonnes terres. 

Yoici donc les manipulations dont la terre a été l'objet : 


lyAZOTE LIBRE ET LICS PLANTES. 83 

Celte terre a été prise à Montretout, près Paris, sur le flanc 
d'une large tranchée, à 3 mètres au-dessous du sol naturel. Nous 
l'avons recherchée principalement parce qu'elle contenait peu 
d'azote; les petites variations survenues dans la teneur en azote 
au cours des expériences, variations que nous devions déterc 
miner, auraient été moins exactement saisissables dans une 
terre riche'. Déplus, la terre dont il s'agit se composait en 
grande partie d'un sable assez régulier et était à peu près com- 
plètement exem])te de cailloux; elle présentait ainsi l'avantage 
de pouvoir prendre, moyennant certaines précautions, une 
homogénéité satisfaisante. 

Après avoir été desséchée à l'air libre, de manière à ne 
garder que 1 ou 1,5 pour lOOd'humidité, elle a élé, par tamisage 
sur un crible à mailles d'environ 2 millimètres, à la fois rendue 
bien homogène et débarrassée des rares petits cailloux qu'elle 
COI) tenait; puis on l'a emmagasinée dans un grand flacon de 
50 litres qu'on a tenu ensuite bien bouché. 

Pour prélever la quantité de terre nécessaire à une expérience, 
on agite le flacon et on le couche sur une table; on y prend 
ensuite la terre avec une sorte de gouttière en clinquant qu'on 
enfonce dans la masse et qu'on vide dans une g'rande capsule de 
porcelaine. Ces précautions ne sont pas superflues. Si l'on se 
contente de faire couler la terre directement du flacon dans la, 
capsule, on obtient une trop forte proportion des grains les plus 
g-ros; la composition de ces grains peut n'être pas exactement 
la même que celle de la moyenne de la terre; dès lors on n'est 
plus tout à fait certain de l'identité de la prise faite avec 
l'ensemble du contenu du flacon. On pèse dans la capsule 2,000 
ou 2,500 grammes de la terre ainsi prélevée. 

On ajoute à la terre 2^'", 5 de carbonate de chaux pur et 
5 grammes d'un mélange de plusieurs terres riches (terre de 
jardin, terres ayant porté des graminées, du trèfle, des lupins, 
des fèves). Ce mélange est constitué avec des terres qui ont 
conservé leur humidité naturelle et où les organismes vivants 
n'ont pu soufl"rir de la dessiccation. On môle intimement la terre 


i. On aurait pu craindre aussi que, venant dans une terrj capable de fournir 
tout l'azote dont elles auraient besoin, les plantes n'en prissent pas à l'atmosphère, 
alors même qu'elles en auraient eu la faculté. 


84 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

et les ingrédients ajoutés ; puis on y verse un volume exactement 
déterminé d'une solution minérale nutritive. Ici la solution 
contient le plus souvent une petite quantité d'azote à l'état d'azo- 
tate de potasse. La terre employée renferme déjà par elle-même 
une faible dose d'azote nitrique; on lui en ajoute encore un peu 
avec la solution pour favoriser le premier développement des 
plantes. On remue avec une spatule le mélange de terre et de 
solution et on l'introduit sans aucune perte dans l'allonge. 

Il va de soi que cette allonge n'est pas ensuite stérilisée. Les 
graines, choisies avec les précautions déjà indiquées, sont 
enfouies un peu au-dessous de la surface de la terre et arrosées 
avec 5^1^^^ d'un liquide qu'on obtient en délayant o grammes du 
mélang-e de terres ci-dessus avec 20'^'= d'eau distillée et laissant 
reposer une minute. L'allong^e est ensuite mise à la place qu'elle 
doit occuper dans l'appareil et fermée avec le bouchon B. 

Introduction de l'azote et des autres gaz. — Il s'agit d'abord de 
faire le vide dans l'appareil. Nous allons insister sur la manière 
dont il a été procédé à celte opération tant au début qu'à la lin 
de chaque expérience, opération dont on comprend, pour la 
méthode directe, toute l'importance. 

La pompe PP ' ayant été reliée à / par un tube tel que /, on 
la manoeuvre jusqu'à ce qu'un coup de pompe ne fournisse plus 
qu'une petite fraction de centimètre cube de gaz ^. On pourrait 
croire que les gaz dissous dans l'eau du sol de A vont se déga- 
ger lentement et retarder l'obtention du vide. Il n'en est pas 
ainsi, parce que cette eau, répandue sur les particules du sol, 
oiïre une énorme surface et ne se présente nulle part sous une 
épaisseur notable. 

Il ne faut pas espérer obtenir le vide au degré désirable par 
la seule manœuvre de la pompe. En effet, les parois intérieures 
de l'appareil et de la pompe, assez humides en tout point pour 
que les gaz soient saturés de vapeur d'eau, sont en général à 


1. La pompe PP est représentée sur la planclie ci -jointe en communication 
avec une suite de dispositifs, N, Q, S, etc., dont il faut imaginer ici qu'elle est 
isolée. 

2. On peut remarquer en passant qu'arrivé à ce point, ce n'est déjà plus, en 
général, de l'air pur qu'on extrait; le gaz obtenu renferme une proportion 
notable d'acide carbonique provenant de la dissociation du bicarbonate de chaux 
que contient la terre. 


L'AZOTE LIBRE ET LES PLANTES. 83 

des températures sensiblement difïérentes. Si la pompe est plus 
chaude, si par exemple elle est à 20*^ tandis qu'en A la tempéra- 
ture est de 15", il peut rester en A, quand la pompe ne 
donne presque plus rien, du gaz à une pression égale à la 
différence existant entre la tension de la vapeur saturée à 20" et 
sa tension à 15", soit à une pression de 0^*^'", 0062. Or 6 litres 
de gaz à cette pression représentent 37'^'= à la pression normale ; 
c'est un volume qui, dans le cas présent, est considérable. Dans 
la pompe construite par MM. Alvergniat frères, il est remédié à 
rinconvénient que nous signalons par l'interposition, entre 
l'appareil oii l'on fait le vide et le corps de pompe, d'un récipient 
contenant de l'acide sulfurique concentré. Il était bien préfé- 
rable pour nous de ne pas user de ce moyen et de procéder de la 
façon suivante pour pousser l'extraction de l'air aussi loin qu'il 
fallait. 

Lorsque la pompe ne fournit presque plus de gaz, on intro- 
duit dans l'appareil de l'acide carbonique pur. Il suffit, dans ce 
but, de chauffer le bicarbonate de potasse dont il a été question 
plus haut. L'acide carbonique pénètre par la partie inférieure 
de H et se répand dans tout l'appareil. On en dégage jusqu'à 
ce que le niveau du mercure dans le tube H, qui sert ici de 
manomètre, se soit abaissé d'une quinzaine de centimètres; on 
a donné alors environ un litre de gaz à la pression normale. On 
fait le vide de nouveau comme précédemment. Les dernières 
portions d'acide carbonique extraites sont recueillies dans une 
cloche; elles s'absorbent presque entièrement dans la potasse. 
Si après ce premier lavage à l'acide carbonique, le vide a été 
poussé à la même limite que la première fois et qu'il y ait 
toujours en A et dans le corps de pompe les températures 
admises plus haut, l'air restant, ramené à la pression normale, 
a sensiblement un volume de 37''', diminué dans le rapport de 
37'"« à 1 litre, soit un volume de 1'^'^ à l''',5. C'est encore trop. 
En outre, le sol de l'allonge A pourrait contenir un mélang'e 
gazeux moins pauvre en air que ne l'indique notre calcul, lequel 
suppose que l'acide carbonique introduit a constitué un mélange 
homogène avec l'air restant dans l'appareil. Tl y a à cela 
plusieurs raisons : d'abord l'acide carbonique a pu, au sein du 
sol, ne pas se mêler intimement avec cet air et le refouler, pour 
ainsi dire, dans le fond de l'allonge ; en second lieu, le sol peut 


86 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

être plus froid que ]a partie supérieure de A et garder plus d'air 
parce que la tension de la vapeur d'eau y est plus faible. Il 
importe de favoriser la sortie des gaz hors du sol. On y parvient 
tout simplement en produisant dans ce sol un dégagement de 
vapeur. 11 suffit, à cet effet, de remplir d'eau à 30 ou 32° le 
bassin où repose l'allonge. Au bout de peu de temps, la chaleur 
s'est transmise au sol et une abondante production de vapeur, 
facilitée par le vide, se manifeste. De l'eau glacée circule dans le 
réfrigérant G, elle condense la vapeur ; l'eau condensée retourne 
au sol. On manœuvre la pompe; elle fournit un peu de gaz, 
tandis qu'avant le chauffage elle n'en donnait plus. Ce gaz 
consiste essentiellement en acide carbonique, mais contient 
néanmoins une petite proportion d'air. Quand la pompe n^ex- 
Irait plus de gaz en quantité appréciable, le vide cherché peut 
être considéré comme atteint; la vapeur d'eau, en elfet, n'a 
pas purgé le sol seulement, mais l'allonge tout entière. Cepen- 
dant, par excès de prudence, et aussi pour purger plus parfai- 
tement encore les lubes H, F et D où la vapeur n'a pas passé, 
on procède à un second lavage à l'acide carbonique, tout en 
maintenant le sol à 30 ou 32°. Cette dernière température n'est 
pas dépassée, car il faut être certain de ne pas nuire aux orga- 
nismes vivants contenus dans le sol. On extrait ensuite complè- 
tement l'acide carbonique et Ton constate, sur une vingtaine de 
centimètres cubes, qu'il s'absorbe sans résidu dans la potasse, 
ou plutôt qu'il n'y laisse plus que ces petites bulles de 2 ou 
3 millimètres cubes qu'on n'évite jamais (elles peuvent provenir 
de la dissolution de potasse elle-même) et qui sont d'ailleurs 
absolument négligeables. 

Après la série des manipulations qui viennent d'être 
mdiquées, on est sur de ne pas laisser dans l'appareil une quan- 
tité d'azote gazeux supérieure à une petite fraction de centimètre 
cube '. On sépare / de ? et Ton substitue à / un obturateur de 
verre en observant toutes les précautions voulues pour empêcher 
l'introduction de la moindre trace d'air extérieur; on noie le 

i. Au cours de ces opérations, chaque fois que la pression restante devient 
très faible, il n'est pas utile, il est même mauvais de précipiter les coups de 
pompe sans laisser un certain intervalle de temps entre deux coups successifs. Il 
fauL, en ellet, un temps sensible pour que l'équilibre de pression s'établisse, 
après chaque coup de pompe, entre le corps de pompe et l'allonge. En pompant 
sans arrêt, on ne maintient que pendant très peu de temps la communication entre 


L'AZOTE LIBRE ET LES PLANTES. 87 

caoutchouc que porte t dans le mercure, et l'on éloigne la 
pompe. 

Il s'agit maintenant d'introduire dans l'appareil les gaz qu'il 
doit recevoir. On donne d'abord l'oxygène, afin d'en laisser 
privés le moins de temps possible le sol et les graines; puis 
viennent l'azote et l'acide carbonique. Nous avons vu comment 
on prépare les trois gaz et comment on procède à leur introduc- 
tion. Les quantités à en mettre en œuvre sont à peu près celles 
qui correspondent aux chitlres suivants : 

Taux pour IDO dans Dépression produite 

le mélange. dans le tube H. 

Oxygène 18 tlS5 

Azote 78 50 

Acide carbonique 4 2 5 

100 64 c 

A ces 64 centimètres de pression exercée par les trois gaz, 
ajoutons environ 1^3 pour la tension de la vapeur d'eau; il 
reste 76'- - 63^5 ou 10'-5, comme excès de la pression extérieure 
moyenne sur la pression totale à l'intérieur de l'appareil. Cet 
excès est suffisant pour que, malgré l'augmentation de tempéra- 
ture que pourra éprouver l'allonge A et malgré une forte baisse 
du baromètre, on soit assuré que la pression intérieure sera 
toujours plus faible que la pression extérieure, condition qui ne 
doit jamais cesser d'être satisfaite, si l'on veut n'avoir à redouter 
aucune fuite du dedans au dehors de la part des joints; elle l'a 
toujours été dans nos expériences. 

Les (]uantités doxygène et d'acide carbonique introduites 
sont évaluées, d'après les dépressions produites en H, d'une 
manière un peu approximative. Mais quant à l'azote, on en 
détermine le volume avec toute la précision possible dans le 
volumètre RR, qui est relié pour la circonstance avec // comme 
la pompe PP l'a été avec t. Après le passage de l'azote dans 
l'appareil, le volumètre est écarté. 

Comlu'ile lV une expérience. — Le bassin où repose l'allonge A, 
est rempli, jusqu'au niveau du sol dans l'allonge, de terre ordi- 

les deux capacités et l'on extrait ijien moins de gaz, en un temps donné, qu'en 
s'arrêtant après cliaque coup. 

L'acide carbonique employé aux lavages, comme tous les gaz qui seront plus 
tard introduits, a été eu contact avec le mercure, aussi passe-l-il sur le soufre du 
tube D avant d'entrer dans i'alionse A. 


88 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

naire qu'on entretient en état d'humidité. Une allonge identique 
à A, placée tout à côté, contenant le même sol et reposant 
également dans un bassin rempli de terre, renferme un thermo- 
mètre suspendu en son milieu. Quand, sous l'action du soleil, 
ce thermomètre arrive à marquer environ 35°, on abaisse un 
rideau léger devant les allonges. 

La germination des graines semées, puis le développement 
des parties vertes des plantes se produisejit. Il faut dès lors 
songer à entretenir dans l'appareil une atmosphère de composi- 
tion convenable pour la vég-étation. De temps à autre, on 
analyse le mélange gazeux existant dans l'allonge. A cet effet, 
on fait fonctionner la trompe TT' pendant quelques minutes, 
afin de renouveler les gaz en H et d'y amener ceux de A; on 
exécute la prise d'échantillon et l'analyse comme il a été dit. 
Lorsque, d'après cette analyse, le taux de l'oxygène atteint 
26 ou 27 0/0, on le ramène vers 16 ou 17 en absorbant une 
partie du gaz. On se rappelle qu'il suffit, dans ce but, de chauffer 
le tube F au rouge sombre et d'y faire circuler les gaz au moyen 
de la trompe TT'; le mercure monte alors peu à peu en H ; on 
estime d'après cette ascension la proportion d'oxygène absorbé. 
Quand l'analyse montre que l'acide carbonique s'abaisse près 
de 0,5 0/0, on en donne à peu près 5 ou 6 0/0 en chauffant le 
petit appareil à bicarbonate de potasse. Telles sont les limites 
entre lesquelles on maintient les taux d'oxygène et d'acide car- 
bonique. Dans les moments de grande activité de la végétation, 
il disparaît à peu près 2 0/0 d'acide carbonique par 24 heures. 
On a alors à surveiller de près la composition de l'atmosphère 
interne de l'allonge. 

Extraction finale des gaz et séparation de V azote gazeux. — La 
pompe PP est approchée de l'appareil ; la partie supérieure du 
caoutchouc porté par t est mise à l'air libre avec les précautions 
connues et fermée par une bonne pince. La petite colonne de 
mercure suspendue dans t ne bougeant pas, on est sur qu'il ne 
rentre pas une trace d'air dans l'appareil. L'obturateur surmon- 
tant t est enlevé-et remplacé par le tube / qui établit la liaison 
avec la pompe. On fait rapidement et complètement le vide dans 
les conduits situés entre t et le corps de pompe ; on enlève la 
pince du caoutchouc t et on immerge ce caoutchouc dans le 
mercure en remontant le manchon t qui avait été abaissé. 


L'AZOTE LIBRE ET LES PLANTES. 89 

L'orifice à dégagement de la pompe est alors coiffé avec la 
cloche N, supposée reliée, comme on l'a vu, aux dispositifs Q, 
S, U, etc., figurés sur la partie droite de la planche. Avec la 
trompe ZZ, on fait le vide dans le système N, Q, S, U. L'extré- 
mité b de l'absorbeur U est abaissé (la malléabilité du tuyau de 
plomb ^' le permet) à un niveau inférieur à celui de b', de 
manière que la dissolution de potasse de U, accumulée principa- 
lement dans la boule b, laisse libre l'orifice b' de u ; le tube ii 
est ainsi entièrement débarrassé de réactif et livre passage aux gaz 
sans leur opposer la plus petite résistance. Quand la trompe ne 
donne plus de gaz, on purge le système N, Q, S, U en y envoyant 
de l'acide carbonique pur, obtenu comme plus hau^, par la 
partie inférieure de N; mais auparavant on ferme le caoutchouc 
p avec une pince, pour éviter que le gaz soulevant le mercure 
contenu en N ne le projette en Q et S. Quand, une certaine 
quantité d'acide carbonique ayant été dégagée, le niveau du 
mercure s'abaisse vers le milieu de N, on arrête le dégagement, 
on ouvre p et l'on fait le vide avec la trompe ZZ. Presque tout 
l'acide carbonique est arrêté par la potasse de la boule b. Néan- 
moins, en produisant avec la trompe un passage rapide du gaz, 
on arrive à en recueillir assez pour pouvoir juger de son degré 
de pureté en l'absorbant dans de la potasse. Lorsque la trompe 
fait entendre le bruit sec des gouttes de mercure se choquant 
dans le vide, le système N, Q, S, U, Z est parfaitement purgé. 

Dès lors, on peut se disposer à faire passer le mélange gazeux 
fourni par la pompe dans les appareils chargés d'isoler l'azote. 
On porte le tube S à la température du rouge ; on incline U de 
façon que b se trouve plus haut que b' ; on coiffe l'orifice de la 
trompe ZZ avec le tube latéral du volumètre RR, ce dernier 
étant supposé prêt à recevoir l'azote ; on pince p. Gela fait, on 
manœuvre la pompe PP, qui envoie du gaz en N ' ; on ouvre très 
doucement la pince p. Dans cette dernière opération, on suit 
des yeux les bulles gazeuses qui s'engagent en // dans le tube ii^ 
séparées les unes des autres par de petites colonnes de potasse, 
et Ton fait en sorte qu'elles parcourent ce tube avec lenteur et 
régularité. On continue à faire passer du gaz avec la pompe dans 
la cloche N, où l'on s'efforce de maintenir le niveau du mercure 

1 Lci cloche N est très large; elle ne laisse échapper au dehors aucune trace 
du gaz fourni, même brusquement, par la pompe. 


90 ANNALES DE L'JNSTITUT PASTEUR. 

à une hauteur à peu près constante. On arrive ainsi à un régime 
uniforme très favorable à l'absorption intégrale de l'acide 
carbonique en U. 

A la fin de l'extraction, la pompe PP ne fournissant plus 
autant de gaz qu'en débite la trompe ZZ, on arrête cette trompe, 
et l'on achève complètement le vide avec la pompe dans l'appa- 
reil ACTF , en opérant comme on l'a vu (lavage à l'acide 
carbonique et à la vapeur d'eau), et laissant s'emmag'asiner en N 
le gaz extrait; puis on fait le vide dans le. système 0, S, U, Z 
avec la trompe (purge, comme plus haut, avec l'acide carbonique). 

On supprime le système Q, S, U, Z, mais on maintient la 
pompe PP nn relation avec t pendant 15 ou 20 heures afin de 
permettre de se dégager aux gaz qui pourraient rester occlus dans 
le tissu des plantes existant en A. Au bout de ce temps, on fait 
de nouveau le vide parfait au moyen de la pompe (avec purge à 
l'acide carbonique et chauffage du sol). Le gaz extrait, qui 
consiste surtout en acide carbonique provenant de ladi.^sociation 
des bicarbonates, est recueilli dans une cloche; on le traite par 
la potasse et le pyrogallate de potasse, et l'on ajoute le volume 
de l'azote restant à celui de i'azole mesuré dans le volumètre. 
Nous n'avons jamais obtenu ainsi que de très minimes quantités 
d'azote (de à i"") ; il est vrai que nous n'avons pas cultivé de 
plantes à grosses tiges (sauf le topinambour), d'où le dégage- 
ment des gaz occlus eût peut-être été plus considérable et eût 
demandé plus de temps. 

Mais nous avons plusieurs fois recueilli des volumes de 
plusieurs centimètres cubes d'oxygène, qui évidemment était 
dû à l'action chlorophyllienne. Il est assez curieux de voir 
cette action se continuer presque dans le vide. 

La pureté de l'azote mesuré au volumètre est finalement 
vérifiée par l'analyse eudiométrique. 

Dosage de Vazole dans les graines, la récolte et le sol. — On se 
rappelle qu'un lot de graines, aussi identiques que possible aux 
graines semées, a été réservé pour l'analyse. L'azote est dosé 
dans ce lot par le procédé Kjeldahl. On rapporte au poids de 
graines réellement semé l'azote trouvé pour le poids de graines 
analysé. Ces graines, avant d'être pesées, ont les unes et les 
autres été conservées un certain temps dans un flacon bien 
bouché, où leurs taux d'humidité se sont égalisés complètement, 


L'AZOÏE LIBRE ET LES PLANTES. 91 

à supposer qu'ils présentassent auparavant de petites différences. 

Dans le sol employé (sable quarlzeux calciné ou terre de 
Montretoul), on détermine l'azote total existant au début de 
l'expérience. Cette détermination est l'objet des plus grands 
soins; elle est faite au moyen du procédé Dumas, notablement 
modifié par M. Schloesing- père (Comptes rendus, t. CVII,p. 296). 
Les dosages ont porté chacun sur un poids de 200 à 2y0 grammes 
de matière. Chaque échantillon destiné à l'analyse a été au préa- 
lable additionné de 1 gramme ou 1 gr. 5 de sucre pur. On a 
reconnu la nécessité de pareille addition; nos sols étaient trop 
pauvres en matière organique pour que, sans cette précaution, 
le passage de l'azote organique à l'état d'azote libre se fît bien. 
Quand l'azote est, comme ici, dosé à l'état gazeux, on sait qu'il 
est très fréquemment accompagné de bioxyde d'azote; il peut 
contenir aussi des traces de gaz carbures. C'est pourquoi nous 
avons analysé à l'eudiomètre le gaz obtenu dans chaque dosage, 
en vue d'y déterminer très exactement la proportion totale 
d'azote ; cette proportion a toujours été très grande; elle a 
oscillé entre 99,67 et 100 pour JOO, sauf dans un dosage où elle 
a été de 97,95. Avant d'être soumis à l'analyse, le gaz était 
mesuré avec précision; cette mesure a été faite dans une 
cloche dont la graduation, étudiée de très près, pouvait être 
exactement corrigée. 

A la fin d'une expérience, quand l'extraction des gaz vient 
d'être complètement achevée, on coupe l'allonge A un peu 
au-dessus du niveau du sol intérieur et l'on enlève la partie supé- 
rieure. Il s'agit de séparer le mieux possible du sol les plantes 
et leurs racines. On a opéré cette séparation d'une façon un peu 
variable suivant les cas. Voici le procédé auquel nous avons eu 
le plus souvent recours. Sur une grande feuille de papier, des- 
tinée à recueillir les menus débris se séparant des plantes ou les 
petites projections du sol, on place une capsule de porcelaine 
011 l'on fait tomber doucement, en une seule masse, tout le sol 
de l'allonge A. Les parties aériennes des plantes sont tenues en 
dehors de la capsule. On sépare de son mieux à la main les 
racines attachées aux plantes et le sol. Il reste encore dans le. 
sol une grande quantité de débris de racines. On en ôte avec une 
pince fine tout ce qu'il est possible de saisir. Ce triage est 
assez long; on l'exécute, comme d'ailleurs toutes les manipu- 


92 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

lations auxquelles le sol est soumis, dans une salle isolée du 
laboratoire, loin de tout dégagement d'ammoniaque. Les racines 
attenant aux plantes sont trempées dans quelques centimètres 
cubes d'eau pure, qui les débarrassent des parties terreuses 
demeurées avec elles, et cette eau, ainsi que la portion insoluble 
qui l'accompagne, est mêlée au sol. On fait de même avec les 
débris séparés à la pince : après quoi on les joint aux plantes. 

Le sol est ensuite desséché. Dans ce but on l'enferme tout 
entier dans un flacon long et étroit, qu'on chauffe au bain-marie 
à 70'', et 011 l'on fait le vide avec une pompe. L'eau du sol distille ; 
on condense la vapeur dans un tube entouré de glace et l'on 
recueille le produit de la condensation pour y doser l'ammo- 
niaque. Le sol desséché est enfermé dans un flacon et rendu 
bien homogène par agitation; on détermine très exactement la 
quantité minime d'humidité qu'il conserve encore, quantité 
variant d'ordinaire de 0,2 à 0,4 pour 100. 

On dose l'azote total sur le sol ainsi préparé comme on l'a 
fait sur le sol initial. La même cloche qu'au début sert à la 
mesure du gaz obtenu dans le dosag^e. 

Quant aux plantes, qui se trouvent réunies avec les débris 
de racines séparés du sol, leur azote est déterminé, ainsi que 
pour les graines, par le procédé Kjeldahl. 


COMPTE RENDU DES EXPERIENCES 


EXPÉRIENCES DE 1890 
Cu.ltvi.x^© cl© Liégiirixixxeixses. 


Conditions communes aux expériences I, II, III. 
Sol. — 2,300 grammes de sable quartzeux calciné, contenant 
4">sr,3 d'azote (1"^'',86 par kilogr.) ; 4*''^6 de phosphate tricalcique ; 
i^^ô de, carbonate de chaux pur; 0',314 d'une solution minérale 
nutritive contenant par litre : 

Sulfate de potasse. . . igi',(3 l Sulfate ferreux .... Ogi',2 
Sulfate de magnésie. . 0g'',8 Chlorure de sodium. . Og^ji 
Sulfate de chaux. . . . 0g'',4 I 


L AZOTE LIBRE ET LES PLANTES. 93 

Humidité du sol : 12 d'eau p. 100 de sable humid*^, soit 13, S 
d'eau p. 100 de sable sec. 

L'eau distillée employée pour la solution minérale a été 
reconnue exempte d'acides azotique et azoteux. 

Graines. — 3 pois nains de la variété Gonthier. 

EXPÉRIENCE r. 

Le sol a été stérilisé, ainsi que la surface extérieure des 
graines; puis les microbes producteurs des nodosités ont été 
introduits. 

Les graines ont été semées le 6 août. Les plantes ont poussé, 
à o ou 6 reprises différentes, des rameaux qui chaque fois ont 
été d'abord d'un vert foncé, sont devenus d'un vert plus pâle, 
puis ont partiellement jauni. Elles ont fleuri, mais n'ont point 
fructifié. Chaque pois a eu 5 rameaux; le plus haut s'est élevé 
à 20*^,5 au-dessus du sol. La récolte a eu lieu le 2 novembre. Les 
racines, très ramifiées, longues de 19'^,^, portaient des groupes 
de nodosités assez volumineux, placés à 2 ou 3'"- du collet. 

Volume d'acide carbonique consommé par les plantes : 
l',4 environ. 

MÉTHODE DIRECTE. 

Les volumes gazeux seront toujours donnés après réduction 

à 0° et 760™*". 

Azote gazeux introduit : 2681'^''^',2. 

Le mélange d'azote et d'acide carbonique extrait comprend : 


Volume du 
mélange 


Taux 
car 


"/o d'acide 
bonique. 


Azote dans le 
mélange. 


1° 


1074cs02 


Résultats 
trouvés. 

\ 13,948 ) 
( 14,008 \ 


Moyenne. 

13,98 


924cc,oi 


20 


916^^05 


3,622 
( 3,611 i 


3,62 


882':c,89 


3° 


901 ce, 43 
à part dans 


\ 7,406 } 
; 7,386 i 

une cloche. , 


7,40 


834cc,74 


i recuelli 


264 ['=0,(34 
lO'^e.50 


Total de l'azote extrait. . . . 26o2'=c,i4 
Azote fixé : 2681'-c,2 — 26o2'=^l = 21)^0,1 = 36'>'Si-,5. 

1. Voir plus loin, à propos de l'expérience I de 1891, le détail des détermina- 
tions numériques que comporte une expérience. 


94 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


METHODE INDIRECTE. 

Graines. — Poids des graines semées O'^^^SOIG; azote dans 
ces graines, à raison de 3,30 (moyenne de 2 expériences 
ayant donné 3,459 et 3,547) : 28"^3. 

Récolte. — Poids des plantes entières sèches (défalcation 
faite d'nn peu de sable adhérant aux racines) : 2"', 55. Azote de 
la récolle : 58"'^'-, 1 (soit 2,27 0/0). 

Sol. — On a lavé avec de l'eau une partie du sol séparé des 
plantes; celte eau ne contient que des traces inappréciables 
d'acides azotique et azoteux. Azote dans le sol à la fin de l'expé- 
rience : IS""^"",!. 

On a donc : 

Azote du sol avant l'expérience .... 4ingi-,3 ) ^^ 

f Oi'ilgi' o 

Azote des graines 28mgi-,3 \ " ' 

Azote du sol après l'expérienc-e .... '15'"g'Vl ) ^q,,,^,. ^ 
Azote des plantes entières 58'"S'vl \ " '" 

Gain d'azote • 4Û'^ni-,G 

Le sol, quelque soin qu'on ait pris pour n'y point laisser de 
racines, en contient nécessairement de petits débris. Il retient 
aussi la substance des poils qui se sont successivement détachés 
des racines, à mesure qu'elles se développaient, et vieillissaient. 
Ces débris et ces poils constituent une quantité très sensible de 
matière organique abandonnée par les plantes et renfermant 
de l'azote. Il convient de remarquer que, d'une manière géné- 
rale, le sol peut finalement contenir soit plus soit moins d'azote 
qu'au début. Les plantes, d'une pari, y laissent des résidus qui 
l'enrichissent; mais, d'autre part, elles lui empruntent de l'azote 
pour leur développement. La résultante de ces deux actions 
contraires peut produire, suivant les cas, un enrichissement ou 
un appauvrissement du sol en azote. Il n'y a rien à conclure, 
notons-le en passant, quant à l'absorption de l'azote gazeux par 
le sol, de la seule comparaison des quantités de ce corps que le 
sol renferme au début et à la fin d'une expérience. Ici, le sol 
étant initialement à peu près dépourvu d'azote ammoniacal ou 


L'AZOïE LlBllE ET LES PLANTES. 95 

nitrique, facilement assimilable par les plantes, ne pouvait pas 
s'appauvrir; il a gagné en azote. 

La quantité d'azote gazeux fixée u'après la méthode directe 
(36°^^', 5) s'accorde bien avec le gaind'azolo fourni par la méthode 
indirecte (40'"^'"56). La différence est, néanmoins, plutôt supé- 
rieure aux erreurs qui ont dû être commises dans les diverses 
déterminations. Gela s'explique. Quand l'extraction finale des 
gaz a été terminée, on a laissé rentrer l'air dans l'allonge (on 
voulait ainsi éviter la réduction des nitrates en l'absence d'oxy- 
gène au cas où le sol aurait contenu de ces sels). Ce n'est guère 
que deux jours après qu'on a séparé les plantes du sol et qu'on 
les a sacrifiées pour l'analyse. Durant ces deux jours, les plantes, 
qu'un vide prolongé n'avait pas fait mourir, ont continué à fixer 
de l'azote gazeux dans une mesure appréciable. De là l'excès du 
gain d'azote de la méthode indirecte sur l'azote fixé d'après la 
méthode directe. Cette explication, qui est certainement juste, 
ne nous est venue à l'esprit qu'après les expériences de 1891, 
où l'excès d'azote en question, bien plus marqué qu'ici, nous l'a, 
pour ainsi dire, imposée. Il eût été facile, si nous en avions eu 
l'idée plus tôt, d'échapper à la petite imperfection que nous 
signalons, en sacrifiant les pois immédiatement après l'extraction 
des gaz. 

EXPÉRIENCE II 

Sol préparé comme pour l'expérience I. Les graines ont 
été semées le 7 août; l'une des trois n'a pas germé. Les plantes 
ont donné lieu, au cours de leur développement, à des obser- 
vations analogues à celles qu'on a notées pour l'expérience I. Il 
y a eu 6 tiges sur chacun des deux pieds venus. Récolte faite 
le 2 novembre. Hauteur des pois au-dessus du sol, 19^^; lon- 
gueur des racines, 23'". Nodosités réparties sur une g^rande 
longueur des racines; elles sont assez grosses; quelques-unes 
ont de 5 à 6 millimètres de diamètre moyen. 

Volume d'acide carbonique consommé par les plantes : 
1^'*,3 environ. 

MÉTHODE DIRECTE. 

Azote gazeux introduit 2,483';'-",3 


96 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Gaz extraits. 


1° 


3° 


Mélange d'azote et 
d'acide carbonique. 


1060ec,38 
i047cc,60 


Taux 0/0 d'acide 
carbonique. 


Résultats 
trouvés. 

l 7,837 
i 7,842 
) 7,860 
( 7,857 
\ 9,671 
I 9,654 


Aloyenne. 

7,84 
7,86 
9,66 


Azote recueilli à part dans une cloche . . 
Total de l'azote extrait. 


Azote dans 
mélange. 


977=^24 
96occ,26 
477«,05 

2,4i9c^.55 
38'-c,00 


2,457<'s55 
Azote fixé : 2,483<'û,3 — 2,457^^5 = 25cc,8 = 32'ng,4. 


MÉTHODE INDIRECTE. 

Graines. — Poids de graines semées : 0^'%8047. 

Azote dans ces graines, à raison de 3,o0 d'azote : 28"^', ,2. 

Récolte. — Poids des plantes entières sèches : 2^"', 10. 

Azote dans la récolte : 49'"^^l, soit 2,35 0/0. 

Sol. — Azote dans le sol à la fin de l'expérience : n"'^'",^. 

On a donc : 

Azote du sol avant l'expérience ..... 4"'S'',3 ) oû)m„r >" 

Azote des graines 28ms'',2 \ - ^ >-^ 

Azote du sol après l'expérience 17™S",5 ) „„ „ 

Azote des plantes entières 49'"S'",1 \ ' 

Gain d'azote .... 34™S'-,1 

L'accord entre les deux méthodes (32'"^^4 d'azote gazeux 
fixé d'après la méthode directe et 34"'^'',1 de gain d'azote d'après 
la méthode indirecte) est très satisfaisant. A j)ropos de la diffé- 
rence de ces deux nomhres, on peut se reporter à l'observation 
faite sur les deux nombres correspondants dans l'expérience 
précédente. 

Les deux expériences qui viennent d'être rapportées ont les 
mêmes conséquences : la méthode indirecte démontre qu'il y a 
eu gain d'azote au cours de la végétation, et la méthode directe, 
que ce gain a été réellement dû à la fixation d'azote gazeux. 


L'AZOTK LIBRE ET LES PLANTES. 97 

Elles iioul pas été accompagnées d'iiiiy de ces expériences 
témoins dont nous avons parlé en commençant, et dans lesquelles 
le sol, placé d'ailleurs en des conditions identiques à celles des 
expériences I et II, n'aurait pas reçu de graines et serait resté 
sans culture. Manquant du terme de comparaison qu'aurait 
fourni une telle expérience, nous n'avons pas le droit (la pro- 
chaine campagne nous le donnera) de nous prononcer sur la 
question de savoir si le sol a eu une part dans la fixation de 
l'azote libre. L'augmentation de sa teneur en azote, nous le 
répétons, ne prouve rien à cet égard. Ce qui est certain, c'est 
que le système formé par l'ensemble des pois et du sol a gag'né 
en azote grâce à une fixation d'azote libre : c'est encore que les 
pois ont contenu beaucoup plus d'azote que leurs graines, et que 
cet azote gagné a eu pour origine l'azote libre de l'atmosphère. Tel 
est le fait capital qui intéresse l'agriculture. Nous ne prétendons 
certes pas l'annoncer comme une nouveauté; mais nous croyons 
l'établir avec bien plus de rigueur qu'on ne l'a fait jusqu'ici. 

EXPÉRIENCE in. 

A côté des deux allonges des expériences I et II, on en a 
disposé une troisième, qui a été préparée identiquement comme 
elles et a reçu 3 graines de pois. Seulement, on n'a pas intro- 
duit dans cette allonge les microbes de nodosités. De plus, ses 
tubulures sont toujours demeurées librement ouvertes; l'atmo- 
sphère pouvait donc s'y renouveler spontanément; mais, pour 
être certain qu'une quantité suffisante d'acide carbonique y 
pénétrât, on y insufflait chaque jour avec la bouche deux ou 
trois fois la contenance des poumons. 

Les pois sont venus en même temps que ceux des deux 
autres expériences. Ils se sont développés notablement plus en 
longueur (hauteur au-dessus du sol 31%longueur des racines 26*"), 
mais ils étaient grêles et ne se sont pas ramifiés. Chaque pied a 
donné une gousse contenant une graine incomplète; les l'acines 
ne portaient pas la moindre nodosité. 

Yoici les résultats numériques de cette expérience, dans 
laquelle la seule méthode indirecte a pu être appliquée. 

Poids des graines semées : O^'^SOG. 

Azote dans ces graines, à raison de 3,50 0/0 ; 28"^',2. 

7 


98 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUil. 

Poids de la récolte sèche 1^'%83, contenant en azote 24"^'', 8, 
soit 1,35 0/0. 

Azote dans le sol à la fin : 8'"«'',3. 

On a donc : 

Azote du sol avant l'expérience 4™S'',3 ) „., 

> 32mg'' 5 
Azote des graines 28'iig'',2 \ 

Azote du sol après l'expérience 8'"g'",3 ) oom-^. 

Azote des plantes entières 24""s'',8 ) ^ ' 

Gain d'azote .... 0""g',6 

Le gain d'azote est inférieur aux erreurs possibles et doit 
par suite être négligé. 

Ici donc, point d'ensemencement avec les microbes des 
nodosités, point de production de nodosités sur les racines, point 
de gain d'azote appréciable. 

L'expérience n'a pas la force démonstrative que lui aurait 
donnée le contrôle de la méthode directe. Néanmoins elle mérite 
une certaine attention, étant donné surtout que les dosages y 
ont été l'objet de soins particuliers. Rapprochée des deux précé- 
dentes, elle les complète en tendant à prouver que la fixation de 
l'azote libre y a été réellement due à l'action des microbes semés. 


EXPERIENCES DE 1891. 
Cultur'e de plantes cle clivei^ses familles. 

1" SÉRIE d'expériences (mai-août). 
Conditions communes aux expériences de I à VIL 

2,500 gr. de terre de Moiitretout à 1,470 d'humidité p. 100 de 
terre sèche, soit terre sèche employée : 2,463^"",7. Celte terre 
renferme 8"'^''',722 d'azote total p. 100 de terre sèche; soit dans les 
2,463g'',7 de terre sèche, 214mf'"',88 d'azote total; dans cet azote 
sont compris 16'"P'",5 d'azote nitrique renfermés' par les 25463"'", 7 
de terre au moment de mise en expérience ; 

2>^'',^ de carbonate de chaux pur; 

5 gr. d'un mélange de diverses terres (terre de jardin, terres 
ayant porté des graminées, du trèfle, des lupins); 

450*^'^ d'une dissolution minérale contenant par litre : 

Phosphate monocalcique. 0gr,500 , soit dans 4o0l'o 0gi',22o 

Sulfate de potasse Ig^OOO , — 0S'-,450 

Sulfate de magnésie . . . Ogi'.oOO , — Og^S^o 

Sulfate de chaux Og'-.oOO , — Ogi-,2-2o 

Sulfate ferreux Ugr.SOO , — Ogi-,225 

Azotate de potasse .... OgViOOo, — 0,nr,09n2=: 0g^012o d'azote. 


L'A/OTIC LIBRE ET LES PLANTES. 99 

S'^''^' d'une liqueur obtenue en délayant 3 gr. du mélange de 
terres ci-dessus dans 20'''^ d'eau distillée, agitant et laissant 
reposer une minute ; on prend 5-'' de la liqueur claire; 

15'"'' d'eau de lavage. 

Total de l'azote nitrique dans le sol au début : 0*-''',03i (com- 
pris O'^'.OOo correspondant aux 5 gr. de mélange de terre et aux 
o^'»^ de délayure ci-dessus). 

Total de l'eau contenue dans la terre : 506 gr., soit 17,0 
d'eau p. 100 de terre humide ou 20,5 p. 100 de terre sèche. 

Détail des déterminations numériques que comporte une expérience . 

Il serait trop long de donner, pour toutes les expériences faites, 
le détail des divers dosages, pesées et mesures; mais il nous paraît 
utile de le faire au moins pour l'une d'elles, la première par exemple, 
afin de mettre le lecteur à même de se rendre bien compte de nos 
opérations et de discuter nos méthodes. 

EXPÉRIENCE I. 

MÉTHODE DIRECTE. 

Le vide obtenu dans l'appareil, on y fait passer l'oxygène, puis 
l'azote. 

Pression de l'oxygène introduit : 12'",3 de mercure (ce qui fera 
19,5 0/0 d'oxygène dans le mélange gazeux complet). 

Azote introduit, mesuré au volumètre en trois fois. 

H hauteur harométrique; 

ô température de la colonne mercurielle du baromètre; 

Ho hauteur barométrique réduite à 0"; 

h différence des niveaux du mercure dans les deux branches du 
volumètre, ou excès de la pression extérieure sur la pres- 
sion du gaz dans le volumètre; 

6' température du mercure de ces deux branches; 

^0 valeur de la différence h réduite à 0''; 

6" température du gaz mesuré; 

F tension maxima de la vapeur d'eau à la température 6"; 

V volume G" et 760'"™ du gaz mesuré; 

D dépression observée dans le tube II après chaque introduction 
d'azote (on s'en sert pour calculer le volume approché 
qu'occupent les gaz dans l'appareil et pour se rendre 
compte des quantités d'azote qu'il convient de mesurer dans 
le volumètre pour que ce gaz se trouve finalement intro- 
duit en proportion convenable); 

Capacité du volumètre : 1,3101^^62. 


100 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


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Pi- a. 


L'AZOTE LIBRE ET LES PLANTES. 


401 


Il y avait dansTabsorbeur U 75ciîde dissolution de potasse concen- 
trée, renfermant 30^-''" d'hydrate de potasse, c'est-à-dire un poids 
d'alcali 10 ou 13 fois plus grand que celui qui correspond à l'acide 
carbonique à absorber (sans formation de bicarbonate). Néanmoins 
on vérifie que l'azote extrait est exempt d'acide carbonique ; dans ce 
but, on soumet à l'analyse, les mesures étant faites à l'eudiomètre, un 
mélange par parties égales des trois portions de gaz extraites ; on 
trouve, h étant la différence des niveaux du mercure dans les deux 
branches de l'eudiomètre ou l'excès de la pression extérieure sur la 
pression intérieure du gaz dans l'eudiomètre, et t étant la température 
du gaz : 


Gaz initial introduit 

l'eudiomètre 

Après potasse 


dans 

.■■.■■; 


DAROMÈTKE 


t 


h 


764™'",5 à 22°, i 
764^ '\o à 22',! 


22°,6 
22",6 


13»"', 
13°"", 


1 à 22°, 1 

l à 22°, 1 


Pas de variation de pression po ir le gaz à la suite du contact avec 
la potasse; donc pas d'acide carbonique. 

On a, dans la suite, vérifié aussi l'absence de l'oxygène. On n'a 
jamais trouvé dans l'azote extrait une quantité mesurable d'acide 
carbonique ni d'oxygène. 

On a donc : 

Azote gazeux disparu pendant l'expérience : 

2935^^1 — 2927«'^8 = 7%3 = 9'ny,2. 

Chacune des G mesures d'azote ci-dessus comportant une erreur infé- 
rieure à ± 0cc,5, nous pensons que l'erreur maxima de la méthode 
directe est, pour une expérience-bien faite, de =b3>:«. 

MÉTHODE INDIRECTE. 

1° Azote au début de V expérience. 

Sol. - 2M3?'',1 do terre sèche, à 8'"g'-,722 pour lOOs' . . Sli^'g^SS 

450=^ de solution minérale 12iiigr,.30 

Os^lSlo d'azotate de potasse ' 25"'S'-,20 

Ssf de mélange de terre, et S'-'^ de delà jure . '13'"S'',60 

268'"S'Vi8 
Semence. — Un tubercule de topinambour a été divisé en deux 


1. Exceptionaellement et pour cette seule expérience I, la solution minérale 
ordinaire a été addilionnéc de 03'', 1815 d"a/.otate de potasse. 


102 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

parties, sensiblement égaies, l'une, de A'-'',31A, destinée au dosage de 
l'azote (procédé Kjeldahl), l'autre, de 4«'",195, devant servir de 
semence. 

Ammoniaque trouvée au dosage (correction faite pour l'alcali 
existant dans les réactifs employés) 4 a^^'^Si, soit 10™"''. 57 d'azote, soit 
10™?, 13 d'azote dans la portion semée. 

Total de l'azote au début dans le sol et la semence : 

268m«i-,18 + 10'"a'',13 = 278m?'-,3. 

2° Azote à la fin de l'expérience. 

Récolte. — Il est venu en même temps que le topinambour une 
Capselle Bourse-à-pasteur; elle ne représente qu'un poids très faible 
par rapport à celui du topinambour; elle est jointe à ce dernier pour 
l'analyse. 

Azote dans les deux plantes, dosé comme ci-dessus (Kjeldahlj, 
46'»K'-,31 . 

Résidu sableux demeuré insoluble après l'attaque des plantes à 
l'acide sull'urique et provenant de terre restée adhérente aux racines : 
11 gr. 

Amiante. — Ammoniaque dans l'amiante du tube Q : 0"'"'',688, soit 
0"'P'',57 d'azote. 

Eau distillée provenant de la dessiccation du sol. — Ammoniaque 
dans cette eau : 0"'sr,l44, soit 0'"Kr,i2 d'azote. 

Sol après dessiccation. — Poids du sol dont il y a à déterminer 
l'azote : 2463»'', 7 — 1 1 s-" (résidu sableux resté avec les plantes) = 2-452g'",7. 

!«'■ dosage d'azote dans le sol desséché. 

Terre employée : 225-^501 à 0fî^21)2 d'humidité p. 100 de terre 
sèche, soit terre sèche employée : 224s'',844. 

Azote gazeux trouvé : (à 0° et 760"'mj 1700^85(5, 

Coefficient de correction pour la lecture de la cloche : 0,98923. 

Volume corrigé : 17", 856 x 0,98923 = 17«,GG4. 

Détermination, par l'analyse eudiométrique ', du degré de pureté 
de l'azote : 

1. On rechercjie dans le gaz étudié la proportion de bioxyde d'azote et celle des 
gaz carbures. L'analyse se fait par la méthode suivante : On mesure séparément 
dans l'eudiomètre un volume V du gaz étudié et un volume V d'air pur. On fait 
passer les deux gaz dans une clocbe-iaboraloire enduite de potasse. Après un 
quart d'heure, on mesure les deux gaz réunis et l'on compare leur volume actuel 
V" à la somme V -+ V. On prend pour le volume du bioxyde d'azote disparu g 
(V -f- V' — V") et pour celui de l'azote correspondant - (V -f- V' — V"j. On ajoute du 


L'AZOTK LIBRE I-T LES PLANTLS. 


103 


Il hauteur du baromètre; 

t température des gaz, constante pour toutes les mesures; 

F tension maxima de la vapeur d'eau à la température t; 

h dillerence des niveaux du mercure dans les deux branches do 

reudiomètre (le mercure est à la même température dans 

l'eudiomètre et le baromètre]. 


Gaz à analyser 
Air '. ... 

Gaz et air npres 

potasse 

Après étincelle . 
Après potasse . . 


H 

mm 


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F 

mm 


h 


H-F-h 


H-F-h 

p. 100 


mm 


mm 


765,8 


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16.0.3 


478, s 


"271,23 


100,00/ 


765,7 


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16,03 


541,25 


208,40 


76,83i 


763,9 


18'J,7 


16,03 


270.0 


479,83 


176,90 


763.9 


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16,03 


270,0 


479.83 


176,90 


76;;, 9 


18", 7 


16,03 


270,0 


479,85 


176,90 


176,83 


176,00 


différence 0,07 


La différence 0,07 est absolument négligeable. Ainsi, point de 
bioxyde d'azote. De même, point de gaz carbures (nous négligeons le 
volume de l'eau formée par la combustion du gaz de la pile, volume 
qui ici ne modifierait la pression que de 0,0o). On ne pousse pas plus 
loin l'analyse. Le gaz analysé est considéré comme consistant en azote 
pur. 

On a donc : 


Azote dans ^Mzr^SiS de terre sèche. 
D'où azote p. tOO de terre sèche .^ . . 


l'-'^^^Sm = 9 ngi-,875. 


2e dosage d'azote dans le sol desséché. 

Terre employée : 223^^280 à 0,292 d'humidité p. 100 de terre sèche, 
soit terre sèche employée : 222-'", 630. 

gaz de la pile, on fait jaillir l'étincelle et l'on observe la contraction produite 
(en tenant compte, s'il y a lieu, du volume de l'eau formée, d'après la mesure 
approximative du volume de gaz de la pile introduit); puis on absorbe par la 
potasse l'acide carbonique qui a pu prendre naissance et l'on mesure l'absorption, 
i^'expérience a prouvé que, dans les cas que nous avons eu à examiner, le volume 
des gaz carbures était très sensiblement égal à celui de l'acide carbonique formé; 
on prend donc pour volume de ces gaz la différence des deux dernières lectures. 
La proportion de gaz carbures a toujours été tellement faible que si l'égalité que 
nous admettons n'est pas absolue, il n'en résulte aucune erreur appréciable. Enfin 
on fait disparaître l'oxygène restant par des additions d'hydrogène et des combus- 
tions; du volume final occupé par l'azote et l'hydrogène restants, on déduit une 
vérification du volume de l'azote contenu dans le mélange analysé. Nous parlons 
ici, pour plus de simplicité, de volumes gazeux; mais il est clair que dans 
l'eudiomètre on ne mesure et compare que des pressions (les pressions désignées 
ci-après par H — F — h). 


104 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Azote gazeux trouvé (à 0" et 760"™) : iT-^SSô^ 
Coefficient de correction pour la lecture de la cloche : 0,98848. 
Volume corrigé \l'%2Gi x 0,98848 = 17^^065. 
Détermination du degré de pureté de l'azote : 


Gaz à analyser . 
Air 


H 


t 

170,1 
170,1 

170,1 

170.1 
170,1 


F 


h 


H-F-h 


H-F-h 

p. 100 


186,16 , 

(lifTérence 0,36 
185,80 ) 


mm 

759,6 
759,6 

759,4 

759.35 

759,35 


mm 
14,51 
14,51 

14,51 
14,51 
14,51 


mm 
484,2 
520,3 

260,15 

260,1 

260,1 


mm 

260,89 
22i,79 

484,74 
484,74 
484,74 


100,00 
86,16 

185,80 
185,80 
185,80 


Gaz et air après 

potasse 

Après étincelle . 
Après potasse . . 


De 100 volumes du gaz à analyser, il y a à retrancher 0,36 X § ou 
0,12 (différence entre le volume du bioxyde d'azote 0,36 X 5 et le 
volume de l'azote correspondant 0,36 x 3). Point de gaz carbures. 
Le gaz à analyser contient 99,88 0/0 d'azote. 

On a donc : 

Azote dans 222g'-,63 de terre sèche : l7^-c,06o x 0,9988 = 17«c,045 
A ajouter une petite bulle d'azote mesurée à part. . . . 0^'",07l 

Azote total dans 222s'-,63 de terre sèche. . . . t7'=Sll6 

Soit p. 100 de terre sèche. . . . 7-^%688 = 9m?'-,C64. 


Moyenne des deux dosages : 


Azote dans 100 de terre sèche 


9mgr.875 + 9mpi-,6G4 


9mg>',77. 


Par suite, azote dansles2452o'',7de terre sèche ci-dessus : 239™s'',63. 


RESUME DE LA METHODE INDIRECTE. 


Azote an début. 

Sol 268nis'-,t8 

Semence lOmgi.lS 


278'"g'-,3I 
Azote en plus à la fin : 8""g'',3. 


Azote à la fin. 

Récolte 46mgr,31 

Amiante 0"'g'-,57 

Eau distillée du sol. 0"ig'',12 
Sol desséché. . . . 239mgi',63 


286"'g'-,63 


L'AZOTE LUÎRE ET LES PLANTES. 103 

L'écart existant ici entre les deux dosages d'azote dans le sol final 
(9'"si,87o et 9™-'",GG i) est le plus grand qu'on ait rencontré. Il donne une 
idée de l'approximalion avec laquelle se détermine l'azote du sol à la 
fin de l'expérience, détermination qui est, de beaucoup, la principale 
source d'erreur. Nous estimons à =h 4'"-'' l'erreur maxima que comporte 
la méthode indirecte pour une expérience bien faite. 

COMPARAISON DES RÉSULTATS DES DEUX MÉTHODES. 


Méthode directe. 
Azote gazeux disparu. 9'"Si',2 


Méthode indirecte. 
Gain d'azote 8ngr^3 


La concordance est très satisfaisante. 


RÉSULTATS DES ANALYSES DE GAZ EXÉCUTÉES AU COURS DE l'eXPÉRIENCE ; 
QUANTITÉS d' ACIDE CARBONIQUE INTRODUIT ET d'oXYGÈNE ABSORBÉ. 

(Ces quantités sont données en centimètres de mercure observés sur 
le tube H. — L'analyse a toujours précédé l'introduction ou l'absorption 
de gaz faite le même jour.) 


19 mai 

3) mai 

2 juin 

6 juin.. . . . 

7 juin 

10 juin.. ... 

12 juin 

13 juin 

1.3 juin 

17 juin 

18 juin 

20 juin 

22 juin 

23 juin 

2G juin 

27 juin 


ANAL 

Acide carbonique. 


i 


YSES 

Oxygène. 

/o 


Acide carbonique 
introduit. 


(Kygène 
absorbé. 


3,7 
0,1 

0,9 

1,8 
1.3 
6,9 
2,6 
6,0 
.3,6 
3,3 
4,8 


22,9 

27.0 

23,2 

22.3 
27.3 
i6,9 
22,1 
24.0 
24,0 

18,3 


3,3 
3^3 

2^0 
3c,3 

o«.5 

3s0 
6^2 

oc,2 


7.,2 

6c,3 

8^5 

3c,3 


34^2 


Total de l'acide carbonique introduit : 34«,2; total de l'acide carbo- 
nique décomposé : environ 32'', soit 2 litres 0. 

Il ne faut pas établir de comparaison rigoureuse entre les quantités 


106 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUll. 

d'acide carbonique décomposé par la plante et les quantités d'oxygùne 
apparu; les mesures ci-dessus n'étaient pas assez exactement faites 
pour permettre une telle comparaison; elles nous suffisaient ainsi 
amplement. 

Nous résumerons maintenant les expériences de la 1''^ série 
de 1891. Nous donnerons, avant les chiffres, quelques renseigne- 
ments sur les cultures. 

I. Topinambour. — Un demi-tubercule, pesant i"^,i9^, mis 
enterre le 2 mai. Récolte le 30 juin. L'expérience a été plus 
courte que toutes les autres. Elle a été interrompue prématu- 
rément, parce que le topinambour ayant grandi rapidement et 
atteint depuis plusieurs jours le sommet de son allonge, com- 
mençait à souffrir du manque d'espace. Son extrémité supérieure 
s'était développée abondamment dans la partie étroite de l'al- 
longe ; la tige y était contournée sur elle-même. La consommation 
d'acide carbonique, qui permet de suivre le développement des 
plantes, avait été très active vers le 15 juin ; mais dès le 20 juin, 
elle s'était beaucoup ralentie. Total de l'acide carbonique 
décomposé : environ 2''^0. Poids de la plante fraîche, après 
lavage des racines : à peu près 17 grammes. Hauteur 50*^, une 
seule tige. La plante n'a pas été jusqu'à floraison. 

IL Avoine des Salines. — 5 graines, pesant O^'^ISO, semées 
le 7 mai; 3 lèvent. Les plantes manquent aussi d'espace en 
hauteur. Elles se développent beaucoup dans la partie étroite de 
l'allonge, sous le bouchon. Elles jaunissent finalement en grande 
partie. Récolte le 4 août. Total de l'acide carbonique décomposé : 
environ 6 litres. Hauteur des tiges 49^ Un des pieds porte 
5 tiges, un autre 4, un autre 3. Aux nœuds, nombreuses racines 
adventives. Une grappe avec 3 épillets normaux et 2 avortés 
sur une tige restée verte. Racines très ramifiées, longues 
de 30^ Poids des plantes fraîches, 23 grammes. 

ni. Pois (FiUbasJa't). — 3 graines, pesant 1 -■',257, semées le 
7 mai. Toutes trois lèvent. Récolte le 7 août. Total de l'acide 
carbonique décomposé : environ 4 litres. Hauteur des 
plantes 49- ; un des pieds porte 1 tige, un autre 3 en bon état, un 
autre très peu développé a 3 tiges malingres. 10 fleurs de dimen- 
sions normales et complètes, toutes sur le second pied; nom- 


L'AZOTH LIIUIE ET LES PLANTES. 


107 


brouses nodosités sur les racines. Un pied do Poa annua esl venu 
avec les pois; il a 8 tiges et porte des grappes d'épillets; il 
mesure 62'^ de long-. Il est joint aux pois pour l'analyse. Poids 
des pois frais : 17 grammes; poids du pied de poa : 4 grammes. 
A la fin de juin, les pois sont d'un beau vert. Le 4 juillet, 
on constate qu'ils sont plus pâles ; les feuilles du bas jaunissent. 
Le 13 juillet, il y a des feuilles sèches dans le bas ; d'autres par- 
lies, 3 rameaux nouveaux, sont bien vertes; les boutons floraux 
apparaissent. 

IV. Tabac (graine d'Isère, originaire du Paraguay). — Deux 
graines semées le 9 mai (on les enferme chacune dans une 
petite boulette de terre qu'on enfouit à 3 ou 4 millimètres de 
profondeur dans le sol). Une seule lève. Récolte le 7 août. Total 
de l'acide carbonique décomposé : environ 4 litres. Trois liges, 
deux de 10c et une de 9*^. Les plus grandes feuilles ont 10^5 
de longeur et 5*^ de largeur. Racines assez ramifiées. 

V. Témoin. — Mis en expérience le 9 mai. Fin de l'expérience 
le 8 août. L'allonge renfermant le sol fait partie d'an appareil 
complet, tel que celui qui a été décrit et qui est employé pour les 
expériences avec culture. 

YI. Témoin. — Du 14 mai au 3 juillet. —Le sol, identique sous 
tous les rapports à celui des expériences précédentes, est enfermé 
dans un flacon. 

YII. Témoin. — Du IS mai au 7 août, même disposition que 
pour YI. A ces deux derniers témoins, on applique seulement la 
méthode directe. 

Yoici maintenant les résultats numériques de ces expériences. 


METHODE DIRKCTE. 


Azote gazeux jin;iiaL.. 

En plus j=i"'^î'^'b"t- 

(à la fin. . 


I 
Topinambour 


II 

AVOI.NE 


III 

1> I s 


IV 

TABAC 


V 

TÉMOIN 


VI 

TÉMOIN 


VII 

TÉMOIN 


29?.5'^^M 
2927-^^8 


2660^-'--,3 
2629«S7 


29o5t:c,7 
2881''c,7 


3241>.-'!,8 

3222CC 7 


3203cm 
3i92c^-,l 


901cc,9 
903'-c,4 


8o2»;c,9 
Sol'^c.G 


7«c,3 
= 9™;-', 2 


30c'^,6 

= 38"'S,.5 


= 93"i;-'.3 


= 24>iig,0 
» 


1 ice, 1 
= 13n'g,9 

» 


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1G8 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


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L'AZOTE LIBRE ET LES PLANTES. 109 

La concordance des deux méthodes, dans ces diverses expé- 
riences, est assez remarquable. Il n'y a, en apparence, exception 
que pour l'expérience III (pois); nous avons déjà expliqué, à pro- 
pos des expériences I et II de 1890, l'excès du gain d'azote fourni 
parla 2*'mélhode sur l'azotegazeux disparu d'après la première. 
(Page 95.) 

Dans toutes ces expériences, sauf pour VI et YII, il y a eu, 
d'après la méthode directe, disparition d'une certaine quantité 
d'azote gazeux, plus ou moins grande suivant les cas, mais tou- 
jours bien supérieure aux erreurs de mesure; et la méthode 
indirecte a confirmé ce résultat. Mais une circonstance particu- 
lière s'était produite, sur laquelle il faut s'arrêter avant de tirer 
aucune conclusion. La surface de tous les sols s'était recouverte, 
peu à peu et à des degrés très divers, de plantes vertes infé- 
rieures. Ces plantes, examinées au microscope, formaient un 
mélange complexe; on y a reconnu des mousses (Bryum, Lepto- 
bnjiun) et des algues (Conferva, OsciUcuia, Nitzschia). Dans les 
expériences témoins VI et VII, elles étaient très peu développées. 

L'expérience V avait été instituée pour servir de témoin; le 
sol devait y rester exempt de toute végétation apparente. Il n'en 
a pas été ainsi. Le développement des plantes vertes inférieures 
y a été très notable, et une fixation indubitable d'azote gazeux a 
eu lieu. Mais dans les deux suivantes, VI et VII, ce développe- 
ment s'est trouvé très faible, et il n'y a pas eu d'azote fixé. 
Ainsi le sol seul n'a pas fixé d'azote gazeux. La comparaison de 
la première de ces expériences (V) avec les deux autres (VI et 
VII) suffît à montrer l'absorption de l'azote gazeux par les plantes 
inférieures dont il s'agit. 

Des autres expériences (de I à IV), on ne peut, en bonne 
log'ique, tirer qu'une conséquence, savoir qu'il y a eu fixation 
d'azote libre soit par les plantes supérieures, topinambour, 
avoine, pois, tabac, soit par les plantes vertes inférieures, soit 
par les unes et les autres. 

Il est intéressant d'entrer dans le détail de l'expérience \. 
Au lieu de mêler finalement, comme pour les autres expé- 
riences, le sol de la surface avec le reste, de manière à constituer 
un mélange homogène, on a isolé avec soin la couche super- 
ficielle, de quelques millimètres d'épaisseur, supportant les 
plantes vertes inférieures, et l'on a analysé séparément cette 


diO ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

couche elle sol sous-jacent (il est ici permis de les considérer 
séparément, parce qu'il n'y a point eu de racines ayant visité le 
sol.) La couche superficielle pesait, après dessiccation, oô^^S 
(elle comprenait, h très peu près, 1 gramme de plantes sèches). 
On l'a tout entière introduite dans le tube à analyse; elle a 
fourni 22'»"'",12 d'azote. Le sol sous-jacent, pesant 2415«'',4, 
contenait 23^)"'-^,62 d'azote total '. Or dans le même poids de sol 
sol complet, comprenant l'azote nitrique et les divers ingré- 
dients ajoutés à la terre de Montretout), il y en avait, au début 
de l'expérience, 237'""'", 49^ Le sol n'a donc pas gagné en azote. 
C'est une vérification, faite sur le témoin Y lui-même, d'un 
résultat emprunté plus haut aux témoins YI et YII ^ 

11 résulte de cette première série d'expériences que les plantes 
vertes inférieures qui ont été observées, ou tout au moins cer- 
taines d'entre elles, sont capables d'emprunter de l'azote gazeux 
à l'atmosphère. 

Le fait avait été admis déjà par M. B Frank {Landwirthschaft 
liche J ahr bit cher, i. XYII, cahiers 2 et 3, 1888, et Annales de la 
Science agronomique française et étrangère, 1. 11, 1888; Berichte der 
deulsclien hotanischen Gesellschaft , 1889, p. 34) à la suite d'expé- 
riences qui, à nos yeux, n'en donnent que des preuves indirectes 
et insuffisantes. Il nous semble ici bien établi. 

MM. Arm. Gautier et R. Drouin avaient aussi rencontré des 
algues vertes dans des expériences sur la fixation de l'azote. Ils 
avaient signalé l'influence de ces plantes sur l'enrichissement 
des sols en azote. Mais ils l'avaient fait consister dans une 

\. Analyse du sol sous-jacent. 

( Ici' dostX'^'C 9'"^'" 717 ) 
Azote dans 100 grammes déterre sèche j ç,^ Hnsn^e Omt-rVoS moyenne 0u'E'',755 


Le sol sous-jacent, supposé sec, comprend: 

Terre de Montretout l'463Er,7 , 

Calcaire ajouté , 2gr,5 ( 347 -igr => 

Terre sèche correspondant aux 5 grammes de mélange de terres. 4si',7 i ~ ~ •- 

Sels ajoutés avec la solution minérale If, 3 ) 

A déduire : 556r,8 

Sol sous-jacent : i'416i;'',4 

Azote dans le sol sous-jacent: 0'"gs09755 X 2415,4 — 235i"f,G2. 

2. Azote dans les 2472g'', 2 de sol, supposé sec, au début : 24.2i"oi',!)8 (voir le 
tableau ci-dessus des résultats des expériences). D'où : azote au début dans 
24l5gi-,4= 237mg',/i.9. 

3. Au 'aux de 9'ngi',7oS pour 100 grammes, les aosi',8 de terre de la couche 
superficielle renfermaient 5"io'',44. d'azote. Il y avait donc dans les plantes vertes 
inférieures 22">si',12 — Siiisi',.U ou 16'"oi',68 d'azote, c'est-à-dire que ces plantes conte- 
naient tout l'azote fixé dans l'expérience aux dépens de l'azote libre (-f- 2mS'' environ 
tires du sol, mais ce dernier nombre est de l'ordre des erreurs possibles). 


L'AZOTE LIBRE ET LES PLANTES. Hl 

absorption de composés azotés, absorption dont les végétaux 
sont généralement capables pour tous les physiologistes, et 
avaient rejeté Tidée d'une fixation d'azote libre (Comptes rendus, 
t. CYJ, 1888, et t. CXIII, 1891). 

Nous tenons à rappeler que ce que nous avons désigné sous 
le nom de plantes vertes inférieures, était un ensemble com- 
plexe d'êtres parmi lesquels ont été reconnues des algues et des 
mousses que nous avons nommées, ces dernières atteignant 
parfois plusieurs millimètres de haut. C'est à cet ensemble 
qu'a été due la fixation d'azote libre; nous ne saurions actuelle- 
ment préciser davantage. 

2"^ SÉRIE d'expériences (août-octobre). 

Il était nécessaire d'entreprendre de nouvelles expériences 
dans lesquelles l'influence des plantes vertes inférieures serait 
éliminée. C'est ce résultat qu'on a cherché à obtenir dans la 
2^ série. 

Les expériences ont été disposées et exécutées comme les 
précédentes. On a réussi à éviter le développement des plantes 
vertes inférieures par un artifice très simple, consistant à recou- 
vrir la surface des sols, après l'enfouissement des g-raines et 
l'arrosage avec la délayure de terre, d'une couche de quelques 
millimètres de sable quartzeux calciné. Dès lors, aucune trace 
de matière verte n'est apparue, et, sauf pour les pois on n'a 
plus observé d'absorption d'azote libre, ainsi qu'il ressort des 
chiiïres donnés plus bas. 

Il eût été bon d'employer dans cette seconde série les mômes 
plantes que dans la première; mais, comme semence de topi- 
nambour, on n'a pas trouvé de tubercule qui fût demeuré, au 
milieu d'août où l'on était, en bon état de conservation; et 
quant au tabac, il était trop tard pour songer à en semer. 

Conditions communes aux expériences de VII à XIII. 

2,000 grammes de terre de Montretout à i,46o d'humidité 
p. 100 de terre sèche, soit terre sèche employée : 1, 9718'", 1. Cette 
terre contient 8"'sr,722 d'azote total p. 100 de terre sèche, soit 
dans les l,971g'',l de terre sèche, I71'"fe'',92 d'azote ; 

5 g^rammes d'un mélange de diverses terres riches conte- 


112 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

liant, avec S"^*^ de délayure obtenue comme dans la première 
série, 18"^g^33 d'azote; 

28', 5 de carbonate de chaux pur; 

15'='^ d'eau de lavage; 

2-jO" d'une solution minérale de même composition que dans 
la première série, si ce n'est qu'elle est exempte d'azote (on n'y 
a ajouté de l'azotate de potasse que pour les expériences XII 
etXIII). 

Total de l'eau contenue dans la terre : 298"'', 9, soit 13,2 
d'eau p. 100 de terre humide ou 15,2 p. 100 de terre sèche. 

Le sable quartzeux calciné renferme 0'''^,230 d'azote pour 
100 grammes de s:ible sec. 

Observations sur les cultures. 

Vin. Témoin. — Du 14 août au 17 octobre. La surface du sol 
a été, comme pour toutes les expériences suivantes, arrosée avec 
la délayure des terres, avant d'être recouverte de sable quartzeux 
calciné. Aucune trace verte n'y est apparue. Poids du sable 
quartzeux : 151o'",6. 

IX. Avoine des Salines. — S graines, pesant 0°r,204.j, semées 
le 11 août. Récolte le 20 octobre. Total de l'acide carbonique 
décomposé : 2''',6* Hauteur des tiges : 0'^,oO. Les axes des pani- 
cules sont formés; mais il n'y a pas d'épillets. Racines assez 
ramifiées, longues de 0'",25. Un accident survenu lors de l'ex- 
traction des gaz empêche de mesurer l'azote g-azeux existant à la 
fin de l'expérience. Poids du sable quartzeux : 134^'", 5. 

X. Pois (Fillbasket). — 3 graines, pesant lfe''',024, semées le 
17 août. Deux graines germent. Récolte le 29 octobre. Acide 
carbonique décomposé : 3''', 7. Hauteur des liges : 0'",64. Qua- 
torze fleurs avec corolle blanche, les unes fermées, les autres 
épanouies ou près de s'épanouir. Volumineuses nodosités sur les 
racines. Poids du sable quartzeux : 94&'',5. 

XI. Moutarde blanche. — 7 graines, pesant 0"'',072, semées le 
17 août. Récolte le 24 octobre. Acide carbonique décomposé : 
2'", 2. Hauteur des tiges les plus élevées : 0''\55; la plus petite 
a 0'°,25. Une lige porte un bouquet de boutons non épanouis. 
Poids du sable quartzeux : 99g'',6. 


L'AZOTE LIBRE ET LES PLANTES. 


113 


XII. Cresson alénois. — 20 graines, pesant Os'', 047, semées le 
18 août. Récolte le 24 octobre. Acide carbonique décomposé : 
3''*,0. Hauteur des tiges : 0'",G5. Elles ont donné de très nom- 
breuses fleurs; silicules développées normalement; un petit 
nombre seulement renferment des graines. Poids du sable quart- 
zeux : 92g%8. 

XIII. Spergule géante. — 30 graines, pesant 0s'',0285, semées 
le 18 août; quatorze ont levé. Récolte le 25 octobre. Les plantes 
sont restées petites. Hauteur 0",06 environ. Poids du sable 
quartzeux : 93 grammes. 

Le tableau ci-après présente les résultats numériques des 
mesures et dosages. 

MÉTHODE DIRECTE 


Azote gazeux! i^'H'^l"-- 
^ (final .... 

lau début 

En plus { 

fàlafin..^ 

1 


VIII 

TÉMOIN 


IX 

A V (J I iN E 


X 

POIS 


XI 

. MOL'IAIltlE 


XII 

CHESSON 


XIII 

S|'Ktl(;ULE 


3.101cc^3 
3.100'-c,5 


3.023cc,9 


3.103^^3 
2.996^'«,!2 


3..y03cc.,l 
3.;j0.jc^2 


3..48.5'-S7 
3. 488 '-^'•,7 


3.4.77ci!,S 
3.479'-«,4 


» 
» 


)) 


107c«,l 
=134''>ë,6 


» 


» 

3'-'-,0 

= 3'"S,8 


lcc,9 

= 2'"g,4 


METHODE INDIRECTE 


Azote initial. 


Azote final. . 


En plus.. 


Terre de Montretout. . 

ogr.de mélange de terre 

et .^cc de délayure... 

Azote nitrique ajouté.. 

Sable (juartzeux 

Semence 


Total . 


Récolte 

Amiante 

Eau distillée du sol , 
Sol 


Total. 


f Au début, 
j A la lin... 


VIII 


171,92 
18,33 


0,33 


.90,60 


0,10 

0,02 

194,47 


194.,ii9 


4,0 


IX 


nig 
171,92 
18,33 


0,31 
3,05 


193,61 


18,38 

0,10 

0,02 

176,96 


19o,'î6 


1,S 


X 


171,92 
1 8,33 


0,22 
32,76 


223,23 


170,54 
0.08 
0,01 

193,06 


365,69 


142,4 


XI 


171,92 
18,33 


0,23 
3,98 


194,46 


17,31 

0,19 

0,03 

174,44 


191,97 


2,0 


XII 


171,92 

18,33 

14,00 

0,22 

1,92 


206,39 


28,65 
0,19 
0,0 
179,39 


208,44 


2,0 


XIII 


181,92 
18,33 
14,00 
0,22 
0,49 


:i01,96 


10,16 

0,16 

0,01 

197,83 


208,16 


iU ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

Les résultats des deux méthodes concordent, aux erreurs 
admises près. 

En ce qui concerne les pois, nous renvoyons à une 
observation déjà faite pour expliquer l'excès du gain d'azote 
résultant de la seconde méthode sur la quantité d'azote fixée 
d'après la première (page 95). 

On le voit, dans cette deuxième série, en l'absence de toute 
trace de végétations vertes inférieures, le sol nu du témoin n'a 
point fixé d'azote en quantité mesurable ; l'avoine (d'après la 
méthode indirecte), la moutarde, le cresson, la spergule, n'en 
ont point fixé non plus ; dans des conditions identiques, les pois 
en ont absorbé abondamment. 

RÉSUMÉ ET CONCLUSIONS 

Les expériences qui viennent d'être rapportées, ont toutes, 
sauf de rares exceptions, été exécutées avec le concours des 
deux méthodes que nous avons appelées directe et indirecte. Les 
deux méthodes, destinées à se contrôler l'une par l'autre, la 
première mettant spécialement en évidence l'origine de l'azote 
fixé, quand il s'en fixe, ont toujours concordé dans les limites 
des erreurs admises. Au point de vue des résultats numériques, 
les expériences sont donc satisfaisantes et paraissent dignes 
d'inspirer confiance. 

Dans une première campagne (1890), on a voulu vérifier le 
fait de la fixation de l'azote libre par les Légumineuses. On a 
fait pousser des pois dans un sol presque absolument exempt 
d'azote, stérilisé par la chaleur, puis ensemencé des microbes 
producteurs des nodosités. Les pois ont emprunté à l'azote libre 
de l'air plus de la moitié de l'azote qu'ils contenaient finale- 
ment, le reste leur ayant été fourni par leurs graines. Des pois 
venus en même temps, dans un sol identique mais sans microbes, 
n'ont point fixé d'azote libre. 

L'année suivante, les recherches ont été étendues à des 
plantes autres que des Légumineuses. Le sol a consisté en une 
terre naturelle, pourvue, autant que possible, des divers orga- 
nismes vivants qui se rencontrent dans de bonnes terres. On a 
cultivé des plantes appartenant à diff"érentes familles botaniques 
et, en même temps, des pois, représentants de la famille des 
Légumineuses. Deux séries d'expériences ont eu lieu. Dans la 


L'AZOTE LIBRE ET LES PLANTES. 115 

première, la surface de tous les sols s'est recouverte, à des 
degrés variés, de plantes vertes inférieures ; mais pour deux 
témoins, le développement de ces plantes a été très faible. 
Toutes les expériences, sauf ces deux dernières, ont fait consta- 
ter une absorption d'azote gazeux certaine. Dans l'une d'elles, 
sans plante supérieure, le sol s'étant couvert d'une notable 
quantité de plantes vertes inférieures, on a étudié la répartition 
de l'azote dans le sol et les plantes; on a trouvé dans les plantes 
tout l'azote gagné, et dans le sol situé au-dessous un gain d'azote 
nul. 

On a réussi, dans une deuxième série d'expériences, à 
éviter absolument la production des végétations vertes infé- 
rieures. Dès lors, on n'a plus constaté de fixation d'azote libre, 
ni par le sol, ni par les plantes, si ce n'est toujours par les pois. 

Nous devons faire remarquer que les plantes obtenues dans 
ces diverses expériences n'ont pas pris tout le développement 
qu'elles sont susceptibles d'acquérir en pleine terre *. Mais 
plusieurs, l'avoine, la moutarde, le cresson, sans parler des 
pois qui, dans la 2^ série, étaient très beaux, ont atteint des 
dimensions fort convenables. 

De tout ce qui précède, nous tirerons les conclusions sui- 
vantes, que nous ne donnons pas comme nouvelles, mais 
comme trouvant dans nos expériences une base solide qui leur 
manquait : 

1° Les Lég-umineuses, ou du moins les pois, peuvent préle- 
ver larg-ement de l'azote libre sur l'atmosphère, et faire passer 
cet azote dans leur propre substance à l'état de combinaison ; 

2° Il y a des plantes vertes inférieures qui jouissent de la 
même propriété ; 

3° Dans les conditions de nos expériences, les sols nus, c'est- 
à-dire exempts de toute végétation apparente, n'ont point fixé 
d'azote libre en quantité mesurable ; l'avoine, la moutarde, le 
cresson, laspergule, n'en ont pas fixé davantage, alors que, dans 
des conditions identiques, les pois en fixaient abondamment ^. 

1. Il est difQcile (non impossible, croyons-nous) d'obtenir en vase clos des 
plantes à très peu près normales. Mais ici, il y avait encore un obstacle au déve- 
loppement des plantes, savoir la faible teneur du sol en azote facilement assimilable, 

2. M. Gagnebien nous a prêté, dans l'exécution de ces rechercbes, le plus 
habile concours. Nous avons plaisir à lui en exprimer ici tous nos remercie^ 
ments. 


m L'HISTOIRE DU DiVELOPPlMT 

ET DU MODE 

DE PROPMATION DE lA TUBERCULOSE DES ARTICULATIONS 

Par m. a. D. PAWLOWSKY, professeur a l'université de kiew. 


Parmi les questions encore controversées de l'étude de la 
tuberculose, une des plus importantes est celle de l'origine du 
tubercule et de son mode de développement. Faut-il attribuer sa 
formation aux cellules du tissu conjonctif, comme le veut 
M. Baumgarten, ou aux leucocytes, comme le pensent quel- 
ques autres savants? Dans l'espoir d'avancer la solution de 
cette question et de contribuer ainsi à édifier la doctrine de 
développement du tubercule, j'ai étudié au laboratoire de l'Insti- 
tut Pasteur la tuberculose des articulations. 

Pour cela j'ai injecté des cultures du bacille tuberculeux sur 
glycérine peptonée ' dans les articulations du genou des cobayes. 
Ensuite j'extirpais ces jointures après 1/2-1-2-3-4-6-8-10 jours, 
et après 2-3-4-5-6-8 semaines, pour les soumettre à l'examen histo- 
logique. Des morceaux de tissu, provenant des animaux tués par 
le chloroforme, étaient conservés dans l'alcool, ou dans le 
liquide de Flemming, ou dans une solution à 0,2 0/0 d'acide 
chromique (d'après Baumgarten), ou inclus dans du celluloïde, 
et étudiés après coloration par la safranine ou le carmin alu- 
mine pour les tissus, par la méthode d'Ehrlich, de Weigert et 
de Ziel pour les bacilles. 

Avant tout je dirai quelques mots sur les changements 
macroscopiques de l'articulation inoculée. C'est seulement vers 
le quatrième jour qu'apparaît une hyperémie du cartilage. Vers 

L Les mêmes que celles qu'employait M. Yersiii, ;'i côté duquel je travaillais au 
laboratoire. 


TUBERCULOSE DES ARTICULATIONS. 117 

le sixième jour, l'articiilalion esL gonflée, rinjection du cartilage 
est forte; la membrane synoviale est tant soit peu raboteuse, et 
d'une couleur grise ; quelquefois il y a un peu de liquide laiteux 
dans la cavité de la jointure. Les glandes inguinales sont 
gonflées. Vers le douzième jour, le tissu périarticulaire est œdé- 
mateux. Après trois semaines l'articulation est assez souvent 
remplie de pus, les cartilages sont rongés, d'une couleur grise ; 
la tunique synoviale est fortement épaissie, couverte d'une 
couche de pus caséeux et de granulations molles; les os sont 
mous. Vers la sixième semaine, la jointure est fortement grossie 
et remplie de granulations épaisses; la membrane synoviale est 
parsemée de petites nodosités grises, quelquefois de petites 
pustules caséeuses; il y a bien rarement une suppuration 
caséeuse dans le tissu périarticulaire ; les glandes ing-uinales et 
abdominables sont gonflées. L'état se maintient ainsi quelquefois 
durant deux mois, tantôt avec une suppuration plus ou moins 
copieuse, tantôt avec la complication de gTanulations fong-ueuses 
plus ou moins abondantes. 

L'examen microscopique des coupes de la tunique syno- 


Fig. 1. 

Coupe verticale de la membrane synoviale, a, cellules du tissu conjonctif (endothélium) avec des 
bacilles. — b, cellules du tissu conjonctif de la paroi articulaire avec des bacilles. Hartnack 1/12 
Hom. Oc. i. 

viale (fig. 1), fait après 42 heures, montre que les bacilles pas- 
sent d'abord de la jointure du genou dans son endothélium, et 
de là dans les fentes lymphatiques du tissu conjonctif de la tuni- 
que articulaire. Là, ils rencontrent et infectent les endothé- 
liums ou les cellules immobiles du tissu conjonctif, et pour 


il8 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


cela, ils passent d'une cellule à l'autre (fig. 2), en se servant de 
leurs prolongements comme de ponts. 

Après 12-24 heures, on voit souvent, dans le tissu conjonctif 
encore complètement inaltéré, loin des endroits déjà dégénérés 
et granuleux, des groupes de cellules, infectées par les bacilles, 
dont la voie de pénétration est comme jalonnée par quelques exem- 
plaires restés en arrière. De même on voit déjà après 12 heures, 


Fig. 2. 

Propagation des bacilles dans le tissu conjonc- 
tif de la paroi articulaire, 12 heures après 
l'injection. 


Fig. 3. 

Bacilles tuberculeux dans le liquide synovia 
de l'articulation du genou, 12 heures après 
l'injection, a, leucocytes avec bacilles. — 
b, cellules du tissu conjonctif (endothéliales) 
de l'articulation. 


quoique rarement, de vrais globules blancs dans le liquide 
synovial, avec des bacilles dans le protoplasme. Bientôt aussi, 
quelquefois après 24 heures, se révèlent des parties envahies de 
part en part par des cellules fongueuses, et on commence à 
apercevoir, quand on y regarde avec attention, des bacilles dans 
les cellules fusiformes polygonales du tissu conjonctif (fig. 3), 
celles dont le protoplasme est granuleux et le noyau grand et 
pâle ; il y a aussi des bacilles dans les globules blancs. Cette pré- 
sence simultanée des bacilles dans les cellules du tissu conjonctif 
et dans les globules blancs se rencontre à toutes les périodes de 
la tuberculose des articulations, provoquée artificiellement, de 
12 heures jusqu'à deux mois inclusivement. 

11 est certain que dès les premiers moments de l'infection, 
s'engage, dans les tissus, une lutte vive à laquelle les corpus- 
cules blancs prennent une part active. On ne peut pas en suivre 
les progrès dans la région fongueuse, là où la mêlée est la plus 
confuse; mais, aux limites de celte région, on trouve une zone 


TUBERCULOSE DES ARTICULATIONS. 


119 


oïl les globules blancs sont plus rares et les phénomènes histolo- 
giques plus visibles. Là on voit quelquefois (fig-. 4), réunis autour 
d'une cellule du tissu conjonctif infectée de bacilles, 1-2-3 
globules blancs, étendant leurs prolongements vers les bacilles; 
il y a aussi des bacilles dans les g-lobules blancs, mais en 
quantité moindre que dans les cellules du tissu conjonctif. Quel- 
quefois les bacilles se trouvent déjà dans le prolongement du 
globule blanc, quelquefois aussi seulement en face de lui, et 
encore situés dans la cellule, etc. Ce phénomène se rencontre 


Fig. L 

Amas de leucocytes {b,b) autour des cellules {a, a) du tissu conjonctif. Migration des bacilles 
dans les leucocytes, 30 heures après l'injection. • 

encore souvent, plus tard, dans le développement de la tubercu- 
lose des jointures. 

Après 36 heures, la région envahie par les granulations 
compactes s'est élargie, et le réseau du tissu adipeux périarticu- 
laire présente déjà, çà et là, des globules blancs chai'gés de 
bacilles. 

En dehors de cette zone de granulations compactes et de 
cellules du tissu conjonctif, entourées de globules blancs, s'en 
trouve une autre en apparence intacte. Les bacilles se trouvent 
déjà, par-ci par-là, dans les cellules du tissu conjonctif de cette 
zone, et aussi dans les fentes lymphatiques. Un peu plus loin, 
tout semble être resté à l'état normal, et pourtant on peut y voir, 
par-ci par-là, quelques exemplaires de globules blancs chargés de 
bacilles. Déjà après 24 heures, plus souvent après 3G heures, on 


120 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

voit sur des coupes (fig. 5, 6), des globules blancs, chargés de 
bacilles, dans le tissu conjonctif, entre les fascicules des fibres 
musculaires et dans le réseau du tissu adipeux périarticulaire. 
Après 40 heures, les bacilles sont toujours dans le liquide 
articulaire, en grande partie dans les cellules endothéliales dont 
ils repoussent le noyau, en quantités plus faibles dans les 
globules blancs. En même temps le processus inflammatoire 
s'étend dans le tissu, en suivant toujours la même marche, et 
pendant toute la période du développement du tubercule, l'érup- 


Fig. 5. 

Bacilles contenus exclusivement dans les leu- 
cocyes b, — o, cellules du tissu conjonc- 
tif, 64 heures après l'injection. 


Fig. 6. 

Leucocytes (a) chargés de bacilles, entre les 
faisceaux musculaires inaltérés (i), loin 
du point d'injection, 12 heures après l'opé- 
ration. 


tion des tubercules neufs et jeunes se continue aussi bien que la 
propagation des bacilles tuberculeux dans l'organisme. Dans 
chaque coupe, on peut suivre l'envahissement des éléments des 
tissus, étudier les premiers commencements du tubercule et 
construire toute l'histoire de son développement. Aussi, en 
continuant celte description, me bornerai-je à signaler, à mesure 
de leur apparition, les faits nouveaux et saillants que révèle 
l'examen microscopique. 

Yers le sixième jour, on peut en signaler un : c'est l'appari- 
tion de petites pustules contenant un pus caséeux, visible 
macroscopiquement, sur la tunique synoviale et dans sa 
substance. Sur dos coupes on voit des parties entières de la 
synoviale criblées d'éléments pyogènes (avec des contours 
indistincts), de fragments de noyau qui se colorent mal, et qui 
sont parfois disloqués en granules présentant les signes de la 
dégénération adipeuse. Outre cela on voit clairement, ça. etlà, des 
bacilles tuberculeux, dispersés sur un fond pâle de granulations 


TUBERCULOSE DES ARTICULATIONS. 121 

indistinctes et amorphes provenant des éléments cellulaires. 

Je n'ai eu delà suppuration tuberculeuse que dans quelques 
expériences; mais dans d'autres, lorsque la quantité de bacilles 
injectés était faible, on observait des changements progressifs 
aboutissant à la tuberculose miliaire de la jointure. 

Au huitième jour, à côté des globules blancs typiques on en 
voit de plus grands, polygonaux, ovales, avec un protoplasme 
volumineux. A côté de ceux-ci se trouvent déjà des globules 
blancs tout pareils, couchés auprès des cellules du tissu 
conjonctif, dont les noyaux sont fortement teints, mais qui ont 
encore conservé leurs dimensions et leur affinité pour les couleurs 
d'aniline. Enfin il y a aussi des cellules épithéliales jeunes, avec 
un noyau de la même dimension que celui des cellules du tissu 
conjonctif, mais encore fortement coloré. 

Vers le 10"-12^ jour, on voit par-ci par-là, répandus dans 
le tissu, des amas de cellules épithélioïdes du tissu conjonctif, 
avec des globules blancs insinués entre elles, et des formes 
de transition, depuis les globules blancs jusqu'aux cellules épithé- 
lioïdes jeunes. Peut-être ces changements progressifs dans les 
globules blancs se manifestent-ils un peu plus tôt dans le tissu; 
mais je ne les ai pas remarqués avant le terme indiqué plus haut. 

En poursuivant le développement du procès tuberculeux dans 
la jointure, j'ai vu, outre l'infection incontestable et successive 
de tout un système de fentes et de cellules du tissu conjonctif, 
de la karyokinèse apparaître du 15^ au 21^ jour dans le tissu. 
Les cellules du tissu conjonctif, tombées danslazonedePinfection, 
s'agrandissent au fur et à mesure que le procès tuberculeux se 
développe; leur protoplasme se gonfle, et elles se métamor- 
phosent en cellules polygonales formatrices ou épithélioïdes 
{Bildimgszellen, Epitheliuidzellen de Ziegler). Comme nous l'avons 
vu plus haut, une partie de ces cellules provient des globules 
blancs, par agrandissement de leur protoplasme et de leur noyau. 
C'est justement dans ces cellules épithélioïdes que les phéno- 
mènes de la karyokinèse s'observent, c'est-à-dire des figures en 
forme de pelotes, d'astres et de métakinèse, et point celles de la 
division directe, au moins en colorant avec de la safranine ou 
par la méthode de Gram. Cette karyokinèse, dont l'existence est 
siire pour les cellules du tissu conjonctif, est-elle exclusive à leurs 
descendantes épithélioïdes dans le tubercule, ou s'étend-elle 


122 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

aussi aux cellules épithélioïdes dérivant des globules blancs? Je 
ne saurais le dire avec précision, rien nepermettant de distinguer 
ces différentes cellules épithélioïdes les unes des autres. Mais qu'il 
y en ait provenant des globules blancs, c'est ce que démontrent 
les formes transitoires observées. Ainsi donc, je ne peux que 
confirmer le fait de la karyokinèse dans les cellules épithélioïdes 
du tubercule, en reconnaissant la double origine de ces dernières. 

Les cellules épithélioïdes des tubercules jeunes ont assez de 
résistance dans la lutte contre l'infection. Ordinairement on ne voit 
pas de symptômes d'une métamorphose régressive, ni dans leur 
protoplasme, ni dans leurs noyaux, ni dans leurs rapports avec 
les substances tinctoriales. D'un autre côté, il n'y a pas de doute 
que les bacilles ne se multiplient dans leur intérieur. Une fois 
arrivés dans le protoplasme, ces bacilles se trouvent générale- 
ment en amas multiformes repoussant parfois le noyau devant 
eux. Pendant que la multiplication se poursuit, ce noyau résiste, 
mais à la fin il est atteint, la cellule se détruit, et à sa place on 
trouve un amas debacilles qui en conserve grossièrement la forme. 

En outre de ces amas de bacilles, et des cellules mortes du 
tissu conjonctif, il y a encore des cellules épithélioïdes d'une 
dimension plus grande que celles dont j'ai signalé l'apparition 
au 8^-10^ jour. Les unes ont un noyau grand et pâle et un proto- 
plasme clairement délimité, tandis que les autres portent des 
signes de la karyokinèse. Des globules blancs se sont insinués 
entre elles avec un noyau tantôt divisé et distinctement coloré, 
tantôt déjà avec un noyau rond, mais conservant encore un 
coloris bien prononcé. Le cercle de protoplasma qui entoure 
ce noyau est tantôt grêle, tantôt plus épais ; enfin il y a aussi 
des cellules polygonales riches en protoplasme, presque de la 
même dimension que les cellules du tissu conjonctif: ce sont des 
cellules jeunes, épithélioïdes, avec un noyau encore fortement 
coloré et un protoplasme succulent. Leur lien de parenté avec 
les globules blancs saute promptement aux yeux, vu la ressem- 
blance des protoplasmes, celle de la dimension etde la coloration 
du noyau, vu aussi toutes les formes transitoires, du globule 
blanc jusqu'à la cellule épithélioïde. Donc nous avons dans cette 
période des tubercules épithélioïdes jeunes. 

Après 21 jours, en dehors des parties envahies par des gra- 
nulations compactes, et loin d'elles, on trouve de petits tuber- 


TUBEIICULOSE DES ARTICULATIONS. 123 

cules microscopiques où les cellules épithélioïdes sont plus larges 
que dans les préparations de IS jours. On les rencontre en nids 
composés de 6-7 pièces, dont 3-4 ont un noyau grand et pâle. 
Les autres, à noyau plus petit et distinctement coloré, conservent 
tous les signes de leur filiation avec des globules blancs, dont quel- 
ques exemplaires se rencontrent au nombre d'un ou de deux entre 
les cellules épithélioïdes. Lorsqu'on colore avec de la safranine et 
selon la méthode de Gram, on observe des figures de karyokinèse 
en forme de pelote et d'astre dans les cellules épithélioïdes. 


Fig. 7. 

Infiltration des trabécules du tissu cellulaire Tubercule dans l'articulation d'un cobnyc 

adipeux autour de l'articulation, a, a noyaux 2 mois après l'infection, a, a, leucocytes et 

des trabécules. b, b, leucocytes avec bacilles. leurs formes de transitions, b, cellules épi- 

thélioïdes. c, cellules en karyokinèse. 

Vers la quatrième semaine apparaissent par-ci par-là de 
grandes cellules épithélioïdes du tissu conjonctif avec 2-3 noyaux ; 
des tubercules typiques. Il y a aussi, quoique rares et épars, 
entre les cellules épithélioïdes, des globules blancs et leurs formes 
transitoires, progressives, vers les cellules épithélioïdes. Les 
cellules épithélioïdes contiennent moins de bacilles tuberculeux. 
Quelquefois on rencontre des endroits dont la texture est entiè- 
rement pénétrée de cellules épithélioïdes. Rarement on y voit des 
phénomènes de karyokinèse, mais entre elles apparaît un réseau 
grêle formé des fibres du tissu conjonctif, restes de l'ancienne 
texture normale, écartées et désunies par les cellules épithélioïdes 
nouvellement formées. On ne voit pas de cellules géantes. 

Vers la.^'^-G^ semaine, on voit des tubercules épars, typiques, 
dans le tissu. Les bacilles ne s'y rencontrent qu'en nombre insi- 
gnifiant, par un ou deux, dans une cellule épithélioïde. Par-ci 


124 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

par-là on observe des tableaux histologiques semblables à ceux 
que nous avons dépeints plus haut, comme étapes de l'infection 
tuberculeuse croissante; on observe enfin une série de métamor- 
phoses régressives, en forme de décomposition et dégénération 
adipeuse. Les noyaux des cellules dég-énérées se teignent mal; 
le protoplasme est granuleux, inégal, mal limité. En un mot, dans 
ces parties, la suppuration tuberculeuse s'est établie. Ce procès 
de suppuration est distinct de la suppuration chaude typique, 
provoquée par les coccus pyogènes. Le premier est un procès 
nécrotique et aboutit à la décomposition granuleuse et grais- 
seuse des éléments du tissu et des globules blancs; tandis que 
dans le pus phlegmoneux chaud, les éléments figurés sont bien 
conservés, et les globules blancs sont même doués de mouve- 
ments amiboïdes. 

Après deux mois d'infection, on voit particulièrement bien la 
zone de la dégénération tuberculeuse du tissu et, dispersés par-ci 
par-là au milieu d'un tissu conjonctif sain (fig. 8), des groupes 
microscopiques de tubercules, composés de G-8-10 cellules épithé- 
lioïdes, de vieilles cellules du tissu conjonctif, et déjeunes descen- 
dantes des globules blancs : ni karyokinèse ni cellules géantes. 

En comparant les faits observés par moi avec ceux qu'a décrits 
Baumgarten, on voit d'abord que les phénomènes évolutifs s'ac- 
complissent plus rapidement dans mes expériences, et ensuite 
sont beaucoup plus compliqués que ne l'admet ce savant. 

Les faits que je viens d'exposer me mettent à même de con- 
clure que déjà 12 heures après l'infection, — par conséquent 
dès les premiers moments de l'entrée des bacilles dans le tissu, 
— on observe deux phénomènes parallèles dans la tunique syno- 
viale : l'infection des cellules du tissu conjonctif et des fentes 
lymphatiques par les bacilles, et l'engloutissement des bacilles 
par les globules blancs. On peut distinguer trois zones de pro- 
pagation de l'infection : la zone extérieure, dans laquelle les 
bacilles sont libres dans les lacunes du tissu conjonctif et se 
trouvent rarement dans les cellules de ce tissu, la zone intermé- 
diaire, où les bacilles sont enfermés dans les cellules du tissu 
conjonctif, bien souvent entourées de globules blancs; la zone 
intérieure, celle de l'envahissement compact de granulations sur 
une large étendue^ où, pour la plupart, les bacilles se trouvent 
dans des globules blancs. De plus, j'ai trouvé des bacilles dans 


TUBERCULOSE DES ARTICULATIONS. 125 

le liquide synovial, et, de la comparaison des situations qu'ils y 
occupent avec ce qu'on sait sur la structure normale de la tuni- 
que synoviale, sachant en même temps qu'entre les cellules de 
l'endothélium se trouvent, dans l'articulation, des orifices des 
vaisseaux lymphatiques ', on déduit facilement la voie par laquelle 
les bacilles tuberculeux ont fait leur entrée dans le tissu syno- 
vial, en quittant la cavité articulaire. Grâce aux mouvements de 
l'animal, les bacilles tuberculeux sont poussés, dès les premières 
heures après l'infection , dans les petits orifices et dans les 
glandes lymphatiques, en infectant avant tout ces fentes et les 
cellules du tissu conjonctif. Ici apparaissent des globules blancs 
qui commencent à s'emparer des bacilles. Leur nombre augmente 
là oià il y a beaucoup de bacilles. Il y a des endroits où ils se 
montrent en rangs serrés, et l'observation révèle qu'ils sont 
chargés d'ennemis. Quelques globules blancs des rangs anté- 
rieurs (je nomme rangs postérieurs la couche qui est plus près de 
la surface intérieure de la synoviale) émigrent en emportant des 
bacilles avec eux. Ce sont eux que j'ai trouvés 24 heures après l'in- 
fection, éloignés du lieu de celle-ci, entre des fascicules de mus- 
cles et entre des lobules de graisse (fig. 6 et 7). Ceux-là voyagent 
tant que leurs mouvements amiboïdes persistent, c'est-à-dire 
tant que les bacilles ne les ont pas tués. Quand ils périssent, ils 
infectent les tissus et donnent naissance à un tubercule neuf. 
Les autres, qui n'ont pu émigrer, périssent sur place; leurs 
noyaux et leur protoplasma subissent la métamorphose régres- 
sive, en un mot on observe les signes de la suppuration nette- 
ment précisés plus haut. En même temps les bacilles continuent 
à progresser autour du centre d'attaque par les conduits du suc, 
par les fentes lymphatiques, infectant ainsi peu à peu, chemin 
faisant, les cellules du tissu conjonctif. Les globules blancs, qui 
accourent pour secourir l'organisme, s'arrêtent d'abord auprès 
de ces cellules infectées et essayent de les entourer. 

D'oîi provient cet arrêt? Est-ce d'une attraction chimiotaxique? 
ou bien la cellule gonflée par l'incorporation des bacilles ferme- 
t-elle le chemin aux leucocytes? Quoi qu'il en soit, ces groupes 

1. Hagen Thokn, Développement et construction ^de la tunique synoviale. Dissertr- 
lion, Saint-Pétersbourg, 1883, pages 47 et 48. L'auteur a prouvé aussi que l'endo- 
tiiélium proprement dit n'existe pas dans les jointures, mais seulement une couche 
de cellules du tissu conjonctif interrompue non cohérente (p. 49). Pour abréger, 
je nomme endothélium les cellules intérieures de la tunique synoviale. 


126 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

de cellules du tissu conjonctif, entourées de globules blancs, 
tiennent la première place dans l'explicationdu développement du 
tubercule, en ce que j'y vois les germes primitifs du tubercule. 
J'ai décrit plus haut les phénomènes qui témoignent que les 
globules blancs vont chercher les bacilles dans les cellules (fig. 4). 
On pourra me dire que ces globules blancs n'ont pas emprunté 
aux cellules les bacilles qu'ils contiennent et ne se sont arrêtés 
auprès d'elles que lorsqu'ils étaient déjà infectés. On peut 
prétendre aussi que ce sont eux, au contraire, qui infectent les 
cellules du tissu conjonctif. Contre la dernière objection, on 
peut invoquer la présence des bacilles dans les cellules du 
tissu conjonctif de la zone la plus avancée, avant que les 
globules blancs ne soient apparus. Contre la première objection, 
parlent les allongements amiboïdes du globule blanc vers la 
cellule du tissu conjonctif et ce fait que, quelquefois, les 
bacilles se trouvent en partie dans le corps de la cellule, en 
partie déjà dans le globule. Tl faut donc admettre que les 
globules blancs peuvent aller chercher les bacilles dans les 
cellules du tissu conjonctif. Ces groupes de cellules se retrouvent 
dans toutes les périodes de l'évolution du tubercule jusqu'à la 
sixième semaine inclusivement, mais avec des changements 
caractéristiques pour les périodes avancées de la tuberculose. 
Théoriquement, ces changements peuvent être de deux genres : 
les globules blancs voisins des cellules du tissu conjonctif ne peu- 
vent que succomber, ou bien subir une série de métamorphoses 
progressives. Or, je n'ai pas observé de phénomènes régressifs 
dans ces groupes de cellules lorsque le nombre des bacilles était 
faible, tandis que plus tard, à côté des globules blancs typiques, 
j'ai vu des formes de trlnsition avec des cellules épithélioïdes, 
et j'ai observé la karyokinèse dans ces dernières. De là, je 
conclus que le globule blanc du sang j)articipe activement à la 
construction du tubercule, après avoir subi une série de changements 
progressifs jusqu'à la cellule épithélioïde typique. Le tubercule 
provoqué artificiellement est donc, d'après mes recherches, un 
produit des cellules épithélioïdes dérivées des globules blancs 
aussi bien que des cellules du tissu conjonctif. A l'appui de 
cette conclusion, on peut invoquer la structure compliquée du 
tubercule typique, avec ses cellules géantes, épithélioïdes, ses 
éléments fongueux et sou réseau. 


TUBERCULOSE DES ARTICULATIONS. 127 

Cotte diversité d'éléments constitutifs avait frappé Baum- 
garten. Plus d'une fois, il avait signalé la présence des globules 
blancs dans le tubercule : il l'explique par une irruption 
secondaire de ces globules entre les cellules du tissu conjonctif ; 
mais il ne se préoccupe pas de savoir ce que deviennent ces 
globules blancs. Ni lui, ni d'autres observateurs n'ont vu, 
chez ces derniers, de changements progressifs ou régressifs. 
M'appuyant sur les faits que j'ai trouvés, je dois me prononcer 
d'une manière décisive contre l'opinion de Baumgarten, que le 
tubercule provienne de la cellule du tissu conjonctif, et que les 
cellules épithélioïdes ne soient que les dérivées de cette cellule. 
Selon mon opinion, elles sont les descendantes aussi bien des 
cellules du tissu conjonctif que des globules blancs. Cette opinion est 
d'accord avec les recherches connues deZiegler*, qui démontrent 
que les cellules épithélioïdes ou les cellules formatrices du tissu 
coxiioncliî {Bildiimjszellen) dérivent des globules blancs; elle est 
aussi d'accord avec mes expériences ^ sur le développement du 
tissu conjonctif, pendant lesquelles j'ai observé aussi bien des 
formes transitoires depuis les globules blancs jusqu'aux 
cellules épithélioïdes, que la karyokinèse dans ces dernières. 
Dans mes expériences sur le développement du tubercule, nous 
rencontrons les mêmes phénomènes de participation de la part 
des globules blancs, dans la construction de la subtile organi- 
sation épithélioïde, mais dans la tuberculose il n'y a plus de chan- 
gement, tandis que, dans le développement du tissu conjonctif, 
il y a une série de métamorphoses progressives ultérieures, 
jusqu'à atteindre la forme des fibrilles du tissu conjonctif. 
Ainsi, le tubercule est le produit d'une inflammation chronique 
contagieuse., avec tous les attributs capitaux et caractéristiques des 
organisations inflammatoires. Après s'être introduit dans l'orga- 
nisme, le bacille tuberculeux infecte d'abord les cellules du 
tissu conjonctif, qui, lorsque la quantité des bacilles est insi- 
gnifiante, se multiplient et forment les cellules épithélioïdes et 
périssent lorsqu'elle est grande. De même pour les globules 
blancs qui peuvent ou périr, lorsqu'ils sont trop envahis, ou se 


1. ZiEGLER, Experimentelle Untersachungeti ûber die pathologische Bindegewcbes, 
und Gefassneubildung. Wûrsburg, 1876. 

2. V. ma dissertation : Les tumeurs de la moelle des os et les cellules géantes (en 
russe). 


428 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

métamorphoser en cellules épithélioïdes qui prennent part à la 
construction du tubercule, ou transportent les bacilles dans 
l'organisme. Dans cette manière de voir, la cellule du tissu 
conjonctif est la seule qui préside à l'infection locale du tissu. 
Le rôle des globules blancs, c'est : 1° la lutte contre les bacilles 
au point d'infection, lutte qui se manifeste par la ruine du 
leucocyte, ou par sa part active dans la formation du tubercule ; 
2° la propagation des bacilles dans l'organisme. 

Cette conclusion résume mon étude sur l'histoire du déve- 
loppement de la tuberculose des articulations. Mais je voudrais, 
avant de terminer, ajouter quelques mots au sujet du mode de 
propagation de l'infection tuberculeuse, depuis son entrée dans 
l'articulation jusqu'à l'envahissement de l'organisme. 

Nous avons vu plus haut les bacilles inoculés envahir peu à 
peu l'organisme par la voie lymphatique. Seuls, en dehors de 
cette voie, les globules blancs ont un rôle à jouer. Je n'ai jamais 
trouvé de bacilles dans les vaisseaux sanguins de l'articulation. 
11 était donc indiqué d'examiner, à ce point de vue, les glandes 
les plus voisines du lieu de l'infection. J'ai, en effet, trouvé des 
bacilles après six jours, quelquefois môme en quantité considé- 
rable, dans les glandes inguinales; après huit jours dans celles 
du bassin; quelquefois déjà, vers le dixième jour, les glandes 
lombaires en logeaient. Ces faits nous permettent de compléter 
notre déduction et de la formuler ainsi : Le virus tuberculeux se 
répand loin de V articulation par les conduits lymphatiques; il infecte 
un système après Vautre, les glandes les plus proches et ensuite les 
plus éloi(j?u'es. 

Ce mode de propagation de la tuberculose par les voies 
lymphatiques était déjà connu et accepté pour d'autres tissus ; 
mais il n'avait pas été observé avec la rigueur nécessaire pour 
la tuberculose des articulations, et l'ensemble des faits connus 
nous autorise à admettre que la propagation du bacille se fait 
partout de même, par les conduits lymphatiques, mais non par 
le système sanguin. Il va sans dire que la vitesse de dilïusion de 
la tuberculose est variée pour les tissus divers, et dépend du 
point de première infection et du nombre de systèmes isola- 
teurs, des glandes lymphatiques, placées sur son chemin vers les 
organes profonds. Ainsi, les articulations sont une région 
défavorable pour la propagation rapide du poison tuberculeux 


TUBE1{CUL0SE DES ARTICULATIONS. 129 

à travers rorganisme, puisqu'elles sont séparées des organes 
intérieurs par les glandes lymphatiques inguinales superfi- 
cielles, les profondes et celles du bassin; aussi, la propagation 
est lente. Un seul de mes cobayes sur seize m'a montré des 
bacilles tuberculeux dans la rate, 14 jours après l'injection dans 
la jointure du genou. Chez deux autres, il y avait des bacilles 
danslarate, après deuxmois. De môme, deuxlapinspérirentd'une 
suppuration tuberculeuse locale et étendue de la jointure du genou 
et de la jambe, 2o ou 2G jours après l'injection d'une culture dans 
cette articulation ; mais on n'a trouvé chez eux ni de bacilles dans 
la rate, ni dans le foie, quoiqu'il y en eût dans les glandes lym- 
phatiques. Ce fait s'accordeparfaitement avec le cours prolongé 
et local de la tuberculose des articulations chez l'homme. 

Cette loi de propagation du poison tuberculeux par les con- 
duits lymphatiques, et son retard dans les glandes lymphatiques, 
se manifeste d'une façon encore plus frappante, lorsque l'injec- 
tion des cultures se fait dans la moelle des os. Selon certains 
auteui^s, cet organe n'a pas de vaisseaux lymphatiques. Si nous 
détruisons, en expérimentant, la pulpe de la moelle de l'os, nous 
mettons la substance injectée en contact direct avec des veines 
sans parois, et on sait qu'à la suite des injections artificielles de 
la tuberculose par le sang, les animaux périssent vite. Si on 
injecte au contraire la moelle sans détruire la pulpe, les bacilles 
ne peuvent se répandre qu'à l'aide des globules blancs et des cel- 
lules de la moelle, par le système lymphatique. Dans le premier 
cas, la tuberculose inoculée doit évoluer beaucoup plus vite que 
dans le second, et cette conclusion est confirmée par l'expérience. 
Deux lapins, auxquels fut injectée une culture tuberculeuse dans 
la moelle, sans lésion, au moyen d'un tube courbé émoussé, et 
après trépanation du fémur, moururent après deux mois et demi 
d'une tuberculose générale. A l'autopsie on trouva chez eux des 
chaînes continues de tubercules jeunes, suivant le trajet des con- 
duits lymphatiques de la cuisse et du tissu cellulaire de 
l'abdomen, une dégénération caséeusedes glandes lymphatiques 
le long de ces chaînes, et des glandes inguinales et pelviennes 
gonflées. Dans ce cas l'infection avait laissé des traces nettes de 
la moelle vers les organes intérieurs, et les bacilles introduits 
dans la moelle non lésée ont passé, pour se généraliser, par les 

9 


130 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

voies lymphatiques. Mais pour un troisième lapin, où l'injectiou 
a été faite avec lésion de la moelle, la mort est arrivée après 
19 jours à la suite d'une tuberculose générale, c'est-à-dire dans 
le même espace de temps qu'après l'injection d'une culture 
dans le sang. 

Je ne voudrais pourtant nier la propagation delà tuberculose 
par le sang, défendue par Muller' en ce qui concerne les os. Cette 
voie est praticable et possible, par exemple, lors de l'envahis- 
sement et de la destruction des parois des veines ou des arlères" 
par les bacilles; mais c'est une exception rare, qui ne se réalise 
guère qu'au voisinage du foyer de la lésion. Comme règle, ce 
sont les voies lymphatiques qui servent de chemin naturel au 
poison tuberculeux lorsqu'il se généralise. 

Dans la clinique de mon maître, feu le professeur E. -F. Bogda- 
nowski, j'ai pu observer des faits d'accord avec mes conclusions 
au sujet du gonflement et de l'infection des glandes lymphatiques 
les plus voisines dans la tuberculose des jointures ; plus d'une 
fois j'ai trouvé un gonflement des glandes inguinales dans la 
tuberculose du genou, et dans la tuberculose du poignet, même 
d'un seul doigt, les glandes du coude furent gonflées. 

En résumé, je crois pouvoir dire qu'aux découvertes pré- 
cieuses de Baumgarten sur le rôle de la cellule du tissu conjonc- 
tif dans la tuberculose, j'ai ajouté des faits nouveaux sur le rôle 
du globule blanc du sang dans la lutte avec les bacilles, et sur 
sa participation dans la conslrucVion du tubercule. Je suis d'ac- 
cord avec Yersin au sujet du rôle important des globules blancs 
dans la tuberculose, mais je ne considère pas uniquement les leu- 
cocytes comme destinés à combattre les bacilles. Je crois qu'ils 
participent à la construction du tubercule et travaillent en outre, 
par leur émigration, à l'infection générale de l'organisme. Ils 
sont donc à la fois utiles et nuisibles. Il en est de même pour 
le système lymphatique, qui est une voie de transport par ses 
canaux et un obstacle par ses glandes. 

d. Dculsclic Zeitsclirift far Chirurçiic, p. o7-SI. Après avoir injecté du pus tuijer- 
rnleux dans l'artère nutritive du fémur, l'autour trouvait des foyers tuberculeux 
souvent en formes d'infarctus cunéiformes, dans la moelle des os. 

2. Tels sont, par exemple, deux cas communi(|ués par Laugerhans où, directe- 
ment ajtrès une hémoptysie, des tubercules niiliaires aigus se développèrent qui 
tuèrent les tualades en 18-19 jours {Virchow's Archiv, I, cxir, 1888, p. -KJ). 


SDR U PRODUCTION DRS ACIDES VOLATILS 


DANS 


LES CULTURES DU BACILLE CHARBONNEUX, 

Par m. s. IVVANOW. 


On sait qu'un grand nombre de microbes donnent naissance, 
dans leurs milieux de culture, à des acides gras variés. Quand 
ces acides proviennent du dédoublement d'une matière hydro- 
carbonée, le mécanisme de leur filiation avec la substance mère 
est en général facile à saisir: il n'en est plus de même quand 
ils proviennent du dédoublement d'une matière albuminoïde 
complexe. De quelle source proviennent, par exemple, ceux que 
donnent les divers microbes vivant dans le lait, ceux qu'on ren- 
contre comme produits à peu près constants dans la dig-estion 
des aliments azotés? M. Duclaux a démontré, pour ceux qu'il a 
étudiés, que leur origine était surtout albuminoïde, mais il n'a 
pas recherché quelles étaient les circonstances de leur apparition, 
la façon dont ils variaient avec l'âge de la culture, l'influence du 
milieu sur leur composition qualitative et quantitative. 

J'ai profité d'un trop court séjour dans le laboratoire de 
M. Duclaux, à l'Institut Pasteur, pour aborder ce sujet, qui est 
trop vaste pour que j'aie pu l'étudier tout entier, mais où j'ai 
trouvé quelques résultats qui me semblent utiles à publier. Les 
microbes que j'ai mis en œuvre sont surtout le bacille du char- 
bon, le Tyrothrix tennis de M. Duclaux, et le Bacillus sublilis. 
Je les ai ensemencés dans du lait écrémé et stérilisé, placé 
en faible épaisseur dans des ballons à fond plat. La culture 
avait lieu à 33-35". Dans ces conditions, il y a d'ordinaire 
coagulation au commencement de la culture, et redissolution 
ultérieure du coagfulum. L'analyse du lait avant et après culture, 
la détermination de la caséine en suspension et de la caséine 
dissoute se faisaient suivant les méthodes indiquées par 


d32 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

M. Duclaux, et sur lesquelles je ne reviendrai pas. Je me con- 
tente dedirequ'avecle Tyrothrix tenuis et le bacille charbonneux, 
les analyses montrent que la quantité de matières g-rasses ne 
subit, avant et après culture, quB des variations iusensibles, 
tandis qu'elle décroit nettement avec le Bacillus subtilis. Quant à 
la caséine, le Tyrothrix tenuis l'amène tout entière à pouvoir 
passer au travers du filtre de porcelaine. Il n'y en a plus en suspen- 
sion muqueuse, tandis qu'il en reste des proportions sensibles, 
environ S grammes par litre, dans les cultures de bac.téridie 
charbonneuse. De plus, avec tous ces microbes, le sucre n'est pas 
atteint, et pourtant le résidu d'évaporalion d'un volume donné 
diminue de plus en plus à mesure que la culture vieillit. Il faut 
évidemment mettre celte diminution au compte de la caséine. 
Je n'insiste pas plus longtemps sur ces analyses, auxquelles je 
demandais surtout une confirmation de ce qu'on savait déjà, que 
c'est la caséine qui est la plus atteinte avec ces ferments, et qui 
fournit sans doute les acides volatils qu'on trouve dans les 
cultures. 

Ce qui m'intéressait plus, c'était de savoir si la production 
decesacides, enquantitéet en qualité, dépendait exclusivement de 
l'espèce du microbe, ou de son milieu de culture, ou des deux à 
la fois. En cultivant dans les mêmes milieux les bacilles char- 
bonneux sporogène et asporogène, des bacilles virulents et le 
premier et le second vaccin charbonneux, je pouvais espérer 
mettre encore en évidence, outre les caractères d'espèce, les 
caractères de race de ces divers bacilles. 

Ces cultures présentent déjà des différences faibles, mais 
appréciables. Avec le bacille asporogène et le bacille sporogène 
virulent, il se forme, au bout de 3 à 4 jours, des coagulums 
floconneux qui disparaissent ensuite en 2 ou 3 jours. Le lait 
prend graduellement une couleur rouge brun, demi-transparente, 
et à sa surface flottent des flocons de filaments mélangés à des 
gouttelettes de graisse, dont quelques-unes sont très larges. Avec 
le premier et le second vaccin, la coagulation est plus tardive, et 
les coagulums formés ne se redissolvent plus. L'infériorité 
vitale de ces vaccins, au point de vue des sécrétions, se mani- 
feste donc ici comme sur beaucoup d'autres points. 

Le Bacillus subtilis caogule le lait un peu plus lentement que 
le bacille du charbon, et les coagulums se redissolvent aussi un 


ACIDES GRAS DU BACILLE DU CHARBON. 133 

peu moins vite. C'est le Tijrothrix tennis qui est le plus actif sous 
ce double rapport. 

Pour l'étude des acides volatils, je commence par le cas 
qu'on avait le droit de supposer le plus simple, le cas du bacille 
asporogène, pour lequel il n'y avait pas à compter avec la 
formation de la spore. L'étude de ces acides a été faite suivant la 
méthode indiquée par M. Duclaux, c'est-à-dire qu'après avoir 
mis en liberté les acides, on soumettait le liquide qui les con- 
tenait à une distillation fractionnée, avec saturation à l'eau de 
chaux des diverses prises. Je ne reviendrai pas sur cette méthode 
dont les détails ont été suffisamment indiqués par M. Duclaux 
dans ses Mémoires sur le lait. Elle démontre l'existence, dans les 
cultures du bacille asporogène, d'un mélange d'acide caproïque 
et d'acide acétique, dont les proportions varient avec l'âge de la 
culture, ainsi que le montrent les chiffres suivants, qui sont des 
grammes par litre de culture. 


Acide acétique. 


Acide caproïque. 


Rapport en équivalents. 


Culture de 15 jours 


0, 37 


1, 37 


0, 41 


— 23 — 


0, 78 


2, 08 


0, 55 


— 37 — 


i, 408 


3, 52 


0, 60 


On voit que les deux acides sont présents à tous les âges de la 
culture, mais que l'acide acétique augmente plus rapidement que 
l'acide caproïque. 

La matière grasse du lait contient de l'acide caproïque, et 
peut se saponifier pendant la culture. Onpourrait donc être tenté 
d'y voir l'origine de l'acide caproïque observé. Pour éliminer 
cette objection, et aussi celle qui ferait rechercher l'origine des 
acides gras dans le sucre du lait, j'ai fait une culture dans une 
solution à 2 de peptone Chapotot, qui contient par elle- 
même un peu d'acide acétique, environ O^^OS par litre. 

L'étude de la culture par la méthode des distillations frac- 
tionnées nous a donné des nombres qui se rapportent mieux à 
un mélange d'acide formique et caproïque que de tous autres 
acides. L'acide caproïque manifestait sa présence par les pelli- 
cules cristallines qu'il forme en se condensant sur les parois 
refroidies du réfrigérant. Quant à l'acide formique, qu'on n'a 
que rarement signalé parmi les acides volatils d'origine micro- 
bienne, j'ai tenu à m'assurer de sa présence par une de ses réac- 
tions caractéristiques. 


134 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

Dans ce but, lorsque dans ma distillation fractionnée j'avais 
retiré, pour les dosages à l'eau de chaux, les huit premières 
prises, je faisais une nouvelle prise de 10 ou 20 centimètres 
cubes, que j'alcalinisais avec une goutte d'ammoniaque, et que 
j'additionnais, après l'avoir fait bouillir pour chasser l'ammo- 
niaque en excès, d'une goutte de solution de nitrate d'argent. 
Le liquide devient alors brun, et quelquefois fournit un abon- 
dant précipité d'argent métallique. 

Les quantités d'acide formique et d'acide caproïque trouvées 
dans des cultures à 2 0/0 de peptone, de divers âges, ont été les 
suivantes, pour le bacille charbonneux asporogène : 


Culture de 6 joues. 
— 18 jours. 


Ac. formique. 


Ac. caproïque. 


Rapport 
en équivalents. 


08%50 


05% 31 


3.0 


Os',82 


05^31 


2.8 


En comparant ces chiffres à ceux qui précèdent, il semble 
légitime de conclure que, qualitativement et quantitativement, 
les acides produits par le même microbe sont différents suivant 
les milieux : quantitativement, la chose n'est pas douteuse 
quand on se rapporte à l'acide caproïque; mais d'un autre côté 
nous ne sommes pas sûrs qu'une partie de celui que nous avons 
trouvé dans le lait ne provienne pas de la saponification du 
beurre. Qualitativement, la différence semble plus marquée 
parce que, dans un cas, nous avons de l'acide acétique et dans 
l'autre de l'acide formique. Mais la marche de la distillation de 
l'acide acétique, surtout quand on se borne aux 8 premières 
prises, diffère trop peu de celle de l'acide formique pour que 
nous prenions parti tout de suite. Cherchons d'abord ce que 
donne la culture du bacille charbonneux sporogène. 

Je l'ai cultivé dans le lait et dans les solutions de peptone, 
à 2, 4 et 6 0. J'ai essayé ici des solutions concentrées de 
peptone, pour me rapprocher de la teneur en matières albumi- 
noïdes du lait, qui contenait environ 4 de caséine, et pour 
voir si on n'arrivait pas, en forçant la dose de peptone, à obtenir 
dans ces milieux autant d'acide caproïque que dans le lait. 

Les chiffres ci-dessous résument les expériences que j'ai 
faites sur ce sujet. Ujie culture de 14 jours, d'un charbon sporo- 
gène très virulent, capable de tuer le chien, a donné par litre : 


AGIDKS GllAS DU BACILLE DU CHARBON. 135 


Rapport 
Ac. forniique. Ac. caproï(|iic. en é(iiiivnlents 


Dans le lait 

Dans la peptone à 2 0,0. 


(6M2 


28^40 


1.15 


0«^57 


0«^82 


2.4 


Une culture de 16 jours, du charbon sporogène de virulence 
moyenne, a donné de même : 

Rapport 
Ac. forniique. Ac. caproïque. en équivalents. 

Dans la peptone à 2 0/0 0e^90 05%u8 2.9 

— 4 0,0 0'%79 0s'-,32 4.2 

Enfin, avec une culture de 20 jours, de virulence moyenne, 
j'ai trouvé, dans une solution à 6 de peptone, ls'",81 d'acide 
formique et 1^''",30 d'acide caproïque, ce qui donne un rapport 
en équivalents de 2,4. 

On voit que la proportion d'acides dans les solutions de 
peptone est inférieure à ce qu'elle est dans le lait, et que c'est 
la qualité de l'aliment et non sa quantité qui intervient surtout. 

Mes expériences mettent aussi en évidence l'intervention de 
la virulence. Dans un même milieu, dans le lait par exemple, le 
charbon sporogène virulent, capable de tuer le chien, donne 
plus d'acides que le charbon sans spores. En 15 jours, une cul- 
ture du premier dans le lait m'a donné 2e'", 40 d'acide caproïque 
et 1^'",12 d'acide formique. Une culture du second, en 15 jours, 
a fourni {s'',31 d'acide caproïque et 0s'',37 d'acide acétique. Les 
acides qui accompagnent l'acide caproïque sont, en outre, 
différents, mais c'est un point sur lequel nous allons revenir 
tout à l'heure. 

Le charbon sporogène de moyenne virulence est, relative- 
ment à la production d'acides, tout à fait comparable au char- 
bon asporogène. Dans une solution à 2 0,0 de peptone : 

Rapport 
Ac. formique. Ac. caproïque. en équivalents. 


Le premier a donné en 16 jours. . . 


0s%90 


0^^.58 


2.9 


Le second — 18 jours. . 


0s^82 


os^5I 


2.8 


De même, dans le lait : 


Ac. acétique. 


Ac. caproïque. 


Rapport 
en équivalents. 


Le premier a donné en 27 jours. . . 


16^63 


3s',41 


0.7 


— — 37 jours... 


lS'-,40 


3gr,52 


0.6 


136 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

On voit que, relativement à la production d'acides volatils, le 
bacille sporogèrie est seulement un peu plus actif que le bacille 
asporogène. La production des spores ne modifie donc que 
d'une manière insig^nifiante la nature et la proportion des acides 
volatils. 

Enfin, si nous arrivons aux bacilles charbonneux encore 
moins virulents qui constituent le l*''" et le 2^ vaccin, voici les 
quantités d'acides trouvées dans un litre de culture : 


!<'■■ vaccin, 24 jours, lail 

2* vaccin, 25 — 

4" vaccin, 20 j. sol. à 2 0/0 peptone. 


:. acétique. 


Ac. 


caproïque. 


Rapport 
en équivalents, 


lg',36 


Is^TO 


1.2 


^s^04 


Ig'Ji 


1.2 


is^,l2 


0g'-,8l 


2.1 


On voit que la quantité totale d'acides volatils est encore 
plus faible qu'avec le charbon de moyenne virulence. 

Reste maintenant à envisager l'influence du temps. J'ai 
étudié pour cela des cultures de 14 jours (A) et de S7 jours (B) 
de charbon sporogène très virulent, celui qui tuait le chien au- 
quel on l'inoculait. J'ai trouvé, pour des cultures dans le lait ; 

A Sg^iO acide caproïque et lg'',l2 acide formique. 
B 2gr,33 — et 1p'',93 acide acétique. 

De même, dans une solution à 2 0/0 de peptone : 

A 0ç'",82 acide caproïque et 0sr,57 acide formique. 
B ^g^ 60 — et ls'',24 acide acétique. 

Le fait que révèlent ces deux séries de chiffres m'a paru tout 
à fait générai. J'ai toujours trouvé que les cultures jeunes con- 
tenaient de l'acide formique, les cultures âgées de l'acide acé- 
tique. Je ne réponds pas, vu les difficultés qu'il y a à caracté- 
riser ces deux acides et à les doser quand ils sont en faibles 
quantités, qu'il n'y ait pas aussi un peu d'acide acétique dans 
les cultures jeunes et d'acide formique dans les cultures âg-ées. 
Mais l'acide formique m'a paru dominer de beaucoup dans les 
premières, l'acide acétique dans les secondes. On ne peut évi- 
demment pas songer à une transformation chimique du premier 
dans le second. Il est plus conforme aux faits d'admettre que 
des acides gras, surtout lorsqu'ils sont aussi instables que l'acide 


ACIDES GRAS DU BACILLE DU CHARBON. 137 

acétique et Tacido formique, se font et se défont d'une façon 
continue. La production d'acide formique, qui correspond à 
une oxydation plus complète, correspond à la vie active des 
premiers jours de l'ensemencement. L'acide acétique corres- 
pondrait surtout à la vie pénible que le microbe mène dans son 
milieu de culture, et qui aboutit plus ou moins rapidement à la 
mort. En étudiant ces acides à un moment quelconque, on les 
a, si Ton veut, au même âge de la culture, mais non à la même 
période de son évolution, si les milieux de culture sont diffé- 
rents, et l'on s'explique ainsi quelques-unes des bizarreries 
qu'on pourrait relever dans les nombres que j'ai cités jus- 
qu'ici, par exemple à propos des bouillons de peptones, où la 
solution à 4 donne, au même âge de la culture, moins d'acides 
que les solutions à 2 et 6 0. 

Quant à l'origine de ces acides, il est naturel de les considé- 
rer comme des produits de vie cellulaire, et, en quelque sorte 
comme des matériaux d'excrétion. Ils se retrouvent, en effet, à 
peu près les mêmes pour les divers microbes, quel que soit leur 
mode d'alimentation, que ce soient des ferments des matières 
hydrocarbonées ou albuminoïdes. 

La complexité de composition que présentent le plus ordi- 
nairement les sécrétions cellulaires conduit à se demander si les 
acides que nous venons d'indiquer et de caractériser sont bien 
les seuls produits dans la culture. La méthode de la distillation 
fractionnée, que j'ai utilisée dans ce travail, est la seule qui 
puisse donner quelques indications précises sur la nature et la 
proportion des acides volatils quand ils sont en aussi faible 
quantité, mais sa sensibilité a des limites, et en outre, elle ne 
s'applique bien qu'aux mélanges de deux acides. Ainsi, je ne 
voudrais pas assurer qu'il n'y a pas un peu d'acide valérianique 
mélangé à l'acide caproïque dans les cultures du bacille char- 
bonneux. Pour le Tyr. tenuis, j'ai observé qu'en outre de l'acide 
valérianique signalé par M. Duclaux, il y a de l'acide caproïque 
et un peu d'acide formique. Mais pour pousser plus loin cette 
étude, il faudrait une installation en grand qui ne s'est encore 
imposée à aucun laboratoire. 


REVUES ET ANALYSES 


LA DÉSINFECTION DES MURAILLES 

REVUE CRITIQUE. 

KoNiG. Centralbl. f. Chemie, i88o, 11° 12. — IJeraeus. Deutsche med. 
Woch., 1885, no 22. - Kummel. Ibid., eiZeitschr. f. Hygiène, 1886. 

— KocH ET Gaffky. Recherches sur la désinfection des vaisseaux. 
ArO. a.d. Kais. Gesund, 1. 1, 1886. — Khui-in. Zeitschr.f. Hijgiene, 1887. 

— GuTTMANN et Merke. Vlrclioïc' S Arcliiv , 1889, t. CVII, — Eî^march. 
La richesse en germes des murs, et leur désinfection. Zeitschr. f. 
Hyg., 1887, t. II. — Gerlogzy. Jfihresberirht de Baumgarten, 1889. — 
de GiAXA. Sur l'action désinfectante du blanchiment des murs au lait 
de chaux. Ani)alesde micrographie, 1890. — Gaffky. Désinfection des 
habitations. Deutseh. Viertel Jahrschrift f. off. Gesund., 1891. — 
G. Bordoni-Uffreduzzi. Sur la désinfection des locaux. Archivio per 
le Scieuze mediche, t. XVI, 1892. 

Quelle est la richesse en germes des murs de nos habitations, et 
comment peut-on parvenir à les désinfecter quand on y soupçonne 
la présence de quelques germes dangereux. Voilà une question, à la 
fois théorique et pratique, qu'on a beaucoup étudiée sans être parvenu 
encore à la résoudre d'une façon complète. C'est que sa simplicité est 
apparente. Il y a murs et murs : celui du salon ne doit pas ressembler, 
au point de vue du nombre et de la nature des germes, à celui de la 
chambre à coucher ou de la salle à manger, celui de la cuisine à celui du 
grenier. D'un autre côté, toutes choses égales d'ailleurs, une chambre 
où a vécu un tuberculeux, un diphtérique doit être traitée autrement 
que celle qui a été occupée par un varioleux. Un mur baigné de soleil 
a chance d'être plus pauvre en germes qu'un mur restant à l'ombre, 
un mur peint à l'huile qu'un mur rugueux, etc. 

On doit donc s'attendre à trouver très variable la quantité de 
germes existant en divers lieux sur l'unité de surface, et c'est, en effet, 
ce qu'on a partout constaté. Le travail le plus complet à ce sujet est 
celui d'Esmarch, qui opérait par la méthode suivante. 

Une éponge fine est découpée en morceaux de la grosseur d'un 
pois, qu'on chauffe pendant quelques minutes, à l'ébullition, dans un 
tube en verre à moitié plein d'eau. On évacue l'excédent de liquide, et 
on conserve dans ce tube, à l'abri d'un tampon de coton, les fragments 
d'épongé, qui s'y gardent humides et stériles. Quand on veut s'en 
servir, on les saisit avec une pince flamljée et on les promène sur la 
surface à étudier, en pressant d'abord peu, puis en frottant plus for- 


REVUES ET ANALYSES. 139 

tement. Le fragment souillé est alors introduit dans de la gélatine 

nutritive, et agité avec elle de façon à obtenir une distribution aussi 

uniforme que possible des germes dans le liquide, qu'on soumettra à 

la culture suivant la méthode d'Esmarch. Le fragment d'épongé aété, 

au préalable, porté dans un autre tube, et il a besoin quelquefois 

de 2 ou 3 nettoyages successifs pour perdre tous ces germes. Voici 

quelques nombres, trouvés par cette méthode, en opérant sur un carré 

de muraille de cinq centimètres de côté. 

Stalle d'écurie. Mur peint à la chaux 7.087 colonies. 

Laboratoire. Peinture à la colle 115 — 

— Porte de bois 30 — 

Chambre d'habitation. Tenture de velours. . . 19 — 

— Autre point to8 — 

Je ne cite que quelques chiffres. Les autres sont du même ordre, 
et on a le droit d'être surpris qu'ils soient tous, ou presque tous, si 
petits. On se demande si la gélatine employée par M. Esmarch était 
bien nutritive, et si, par hasard, elle n'était pas un peu trop acide. Ce 
qui tendrait à le prouver, c'est que souvent le nombre des végétations 
cryptogamiques dépasse dans ses cultures le nombre des colonies de 
bacilles ou de micrococcus. C'est le cas ordinaire dans les milieux 
acides. Un milieu neutre alcalin renverse la proportion en donnant 
le pas aux cultures non mycéliennes, dont le nombre, petit tout à 
l'heure, devient tout de suite très grand. Il est possible que cette 
cause d'erreur ait beaucoup diminué les chiffres relevés par M. Esmarch. 

Une autre cause d'erreur a été relevée par Gerloczy, qui a réussi à 
trouver encore de très nombreux germes, sur la paroi frottée avec 
l'éponge de M. Esmarch, à la seule condition d'en racler un peu la 
surface. Mais M. Esmarch a eu lui-même le sentiment qu'il ne nettoyait 
pas complètement la surface lavée, puisqu'il s'est ensuite borné à un 
seul nettoyage à l'éponge, au lieu d'en faire plusieurs. Tous ses 
chiffres sont donc trop petits, mais leur intérêt résulte surtout de leur 
comparaison, et il suffit qu'ils varient dans le même sens que les 
chiffres réels. 

Je passe rapidement sur les résultats relatifs à l'étude de diverses 
pièces de maisons habitées, dont la conclusion générale est l'inégalité 
de la distribution des germes dans les divers locaux et même sur les 
divers points d'une même chambre. Voici comme exemple les nombres 
de germes sur les parois de la stalle d'écurie de l'Institut hygiénique, 
à hauteur d'homme. 

Côté de la fenêtre 6,070 colonies. 

— autre point très voisin 6,391 — 

Côté opposé 3,185 — 

— autre point très voisin 2,170 — 

Plus près de la stalle de l'animal 14,200 — 

— un mètre plus haut 1 ,386 — 


140 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

Le nombre des germes semble donc décroître à mesure qu'on 
s'éloigne du sol, et il y a, en effet, très peu de germes sur le plafond. 
Rappelons que M. Canalis a depuis trouvé (v. ces Annales, t. III, 
p. 198) des résultats analogues pour les wagons à bestiaux. 

Dans une salle d'opérations, servant surtout à des laparotomies, 
et dont les murs, couverts de carreaux vitrés jusqu'à hauteur d'homme, 
sont lavés chaque fois avec de l'eau contenant 2 0/0 de savon phé- 
nique, les parois de verre se sont montrées très pauvres en microbes. 
Mais ce n'est pas tout que de compter les germes. Il serait aussi 
très intéressant de savoir quels sont ceux qui sont pathogènes. La 
science s'est enrichie beaucoup sur ce point, dans ces dernières 
années. On se rappelle les faits curieux mis en évidence par 
Cornet et Kruger sur la diffusion des bacilles tuberculeux dans les 
locaux habités par des phtisiques. Emmerich a de même signalé le 
pneumocoque de Friedlander dans le plancher d'une prison, le strepto- 
coque de l'érysipèle sur celui d'une salle d'autopsie. Ullmann a trouvé 
très répandu partout le coccus pyogène; on sait l'ubiquité du vibrion 
septique et du bacille du tétanos, et tout récemment Kelsch cherchait 
dans les poussières du sol et des planchers les causes des épidémies 
de typhus qui éclatent quelquefois dans les casernes, sans qu'on puisse 
incriminer d'autres causes. 

C'est de tous ces éléments nocifs qu'une bonne désinfection du sol 
et des murailles doit réussir à nous protéger, non pas d'une façon 
absolue, car l'absolu n'est jamais réalisable, mais de façon à faire 
apprécier ses effets, et à se concilier la faveur du public, qui ne craint 
rien tant qu'il n'a pas été échaudé, et qui craint tout ensuite. Une bonne 
méthode de désinfection des locaux doit assurer l'intégrité absolue des 
parois, et des matériaux, papiers ou tentures, qui la recouvrent : 
elle doit être inoffensive pour ceux qui l'appliquent et pour ceux 
qui viendront ensuite habiter l'appartement désinfecté : elle doit 
être d'une application facile, peu coûteuse. Enfin, elle doit être 
efficace. 

Tout le monde est d'accord sur les premières conditions que nous 
venons de poser, et qui sont de sens commun. L'accord semble aussi 
absolu sur la dernière, mais cet accord n'est qu'apparent. Les théori- 
ciens demandent qu'on ne puisse plus retrouver un germe vivant sur 
la paroi récemment nettoyée. Les praticiens disent utinam! mais 
comme ils ne peuvent y arriver, ou n'y arrivent qu'au prix de 
dépenses considérables que ni le public ni les administrations ne 
veulent ou ne peuvent faire, ils perdent courage, et font trop souvent 
leur besogne en sceptiques, en dignitaires d'une religion à laquelle ils 
ne .croient plus : les gestes y sont, mais la foi y manque. La vérité est 
à moitié chemin entre ces opinions extrêmes, et le meilleur procédé 


REVUES ET ANALYSES. 141 

de désinfection est celui qui est à la fois le plus facile, le plus efficace, 
et le meilleur marché. 

Il est clair pourtant que la condition d'efficacité prime toutes les 
autres, et l'expérience peut seule nous renseigner à son sujet. Sans 
entrer dans le détail de toutes celles qui ont été faites, on peut dire 
qu'elles ont éliminé du concours les fumigations au chlore et à l'acide 
sulfureux, qui sont toujours difficiles à appliquer, et irrégulières dans 
leurs effets, parce que la dissémination du gaz antiseptique n'est pas 
assurée. Ces pratiques doivent être réservées à quelques cas spéciaux, 
où les irrégularités ou les anfracluosités du local sont telles, que les 
divers points n'en sont pas abordables. 

M. Esmarch a proposé une autre méthode, très employée en ce 
moment en Allemagne, celle du nettoyage à la mie de pain. On coupe 
des morceaux, grands comme la main, de croûte à laquelle on laisse 
adhérer une mince couche de mie, et on frotte sans trop appuyer. En 
une seule opération, la paroi est suffisamment nettoyée, et les chiffres 
de germes qu'on y relève ne sont pas supérieurs à ceux qu'on trouve 
après un lavage antiseptique. Il faut seulement que le mur ne soit 
pas couvert de trop grosses impuretés, de croûtes, sur lesquelles la 
mie est sans action. Le procédé a l'inconvénient d'être long, et de 
coûter assez cher, tant à cause du prix de la matière première que du 
temps employé à l'opération. II ne s'applique pas, d'ailleurs, au plan- 
cher de la pièce, sur lequel tombent lesfragments demie provenant du 
frottement sur la muraille. Pour ce plancher, il est recommandé de 
le baigner avec une solution à 5 0^ d'acide phénique, qui laisse long- 
temps dans la pièce une odeur de chambre mortuaire à laquelle le 
public ne s'habitue pas facilement. 

Telle est aussi une des raisons qui rendent peu populaire l'emploi 
des pulvérisations à l'acide phénique ou au lysol. D'après les expé- 
riences de Gerlach, ce lysol à 3 0/0 est un peu plus actif que l'acide 
phénique à 5 0/0, Mais il faut au moins arriver à ces degrés de con- 
centration pour que ces substances soient efficaces. Comme, sans être 
chères, elles ont encore un certain prix, l'opération devient coûteuse. 

Le bichlorure de mercure semble échapper à tous ces inconvé- 
nients. Il peut être efficace à doses beaucoup plus faibles, et il est tout 
à fait sans odeur. Il est vrai qu'on l'a accusé d'être dangereux. Gom- 
ment mettre entre les mains du public une substance aussi toxique? 
Comment renvoyer des habitants dans une chambre dont les parois 
auront été lavées au sublimé, et d'où partiront constamment, pour 
se répandre dans la pièce, des poussières qu'on ne saurait respirer ni 
avaler impunément? Voilà ce qu'on se demandait à l'origine. Mais 
l'expérience a eu raison de toutes ces appréhensions. Comme je le 
rappelais à propos des expériences de M. Ganalis dans l'article cité 


142 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

plus haut, on a employé à Messine, pendant la dernière épidémie de 
choléra, plus de -400 kilogrammes de sublimé corrosif sans qu'il en 
soit résulté aucun inconvénient. Gaffky rappelait récemment au 
congi'ès d'hygiène à Brunschwig que des centaines de navires avaient 
été désinfectés à la Louisiane, au moyen de bichlorure de mercure à 
la dose de 26 kilogrammes par navire, sans danger pour personne. 
Krupin a fait de même une désinfection de salles d'hôpital à Péters- 
bourg, et d'après M. Bordoni-Uffreduzzi, on fait depuis deux ans à 
Turin des désinfections au sublimé dans des locaux où on renvoie les 
habitants au lendemain de l'opération, sans qu'il se soit révélé aucun 
inconvénient. 

M. Bordoni-Uffreduzzi a rendu l'opération très pratique en pulvé- 
risant la solution mercurielle avec un appareil analogue à celle qui 
sert pour combattre les maladies de la vigne. L'opérateur, portant 
sur le dos un vase rempli de la liqueur antiseptique, fait mouvoir avec 
ses deux mains une pompe très maniable qui projette le jet à la hau- 
teur qu'on veut. En une heure, on peut ainsi parcourir toute la sur- 
face des parois d'une chambre de dimensions ordinaires. L'opération 
ne détériore ni les papiers, ni les tentures : elle a l'inconvénient de 
noircir les dorures, mais il n'y a pas de dorures partout. Elle est donc 
très pratique. 

La note nouvelle que M. Bordoni-Uffreduzzi apporte dans la ques- 
tion, c'est que la concentration de la dissolution de sublimé ne 
doit pas être toujours la même, mais différer suivant la nature des 
matériaux, leur degré de porosité, et aussi leur degré de saleté. 

Pour juger de l'efficacité des lavages au sublimé, MM, Guttmann 
et Merke, qui ont les premiers proposé cette méthode de désinfection, 
avaient appliqué contre les murailles des fils chargés de spores, qu'ils 
détachaient et reportaient, après l'opération, dans un liquide nutritif. 
Il est clair qu'ils introduisaient ainsi, dans leur gélatine, un peu de 
sublimé corrosif qui devait gêner le développement des germes. 
Leurs expériences, de même que celles de M. Esmarch, relevaient de 
cette cause d'erreur, signalée par M. Geppert, et qui pouvait faire 
croire morts des germes encore vivants. M. Bordoni-Uffreduzzi, qui a 
renoncé aux fils tendus de Guttmann et Merke, et qui se contente de 
racler un fragment de la paroi stérilisée, après l'avoir protégée, 
aussitôt la pulvérisation terminée, contre toute nouvelle chute de 
germes, s'expose aussi à croire stérile un fragment qui eût peut-être 
donné des cultures, si on l'avait soustrait à l'action du sublimé en 
précipitant le mercure de la liqueur. Mais cette objection est surtout 
théorique. Dans la pratique, il est indifférent que le germe nocif soit 
mort ou vivant. Il suffit qu'il ne se développe pas, et la solution de 
bichlorure qui produira ce résultat est celle qu'il faut employer. 


IIEVUKS ET ANALYSES. 143 

D'accord avec MiM. Guttmann et Merke, M. Bordoni-UtTreduzzi 
trouve la solution à 1 1000 trop souvent inefficace, et ne la recommande 
pas. Ce n'est qu'avec une solution à 3 millièmes, acidulée avec 5 mil- 
lièmes d'acide chiorhydrique,qu'ila obtenu la stérilisation des murailles 
nues ou couvertes ; cette même solution est suffisante pour les plan- 
chers formés de briques à surface vitreuse, de ciment, d'asphalte, ou 
les planchers de bois cirés ou vernis, lorsqu'ils sont en bon état, et 
pas très sales. Il faut porter la dose à 4 ou 5 millièmes pour les pavés 
de briques couvertes d'un enduit, et à 7 ou 8 millièmes pour les pavés 
de briques ordinaires, à cause de leurs propriétés absorbantes. On 
part pour la maison à désinfecter avec une Hqueur mère, ce qu'il faut 
pour l'étendre au degré voulu, et un petit outillage, très réduit et très 
portatif. On commence par enlever de l'appartement tout ce qui peut 
et doit passer par l'étuve de désinfection; on réunit le reste au milieu 
de la chambre; on commence par baigner le parquet pour que tout ce 
qui tombera des parois tombe dans un liquide désinfectant, et on 
procède ensuite à la pulvérisation, qu'on pousse jusqu'au moment où 
le mur parait uniformément mouillé, et où le liquide qui le baigne 
commence à se réunir en gouttelettes. Quant au plafond, on ne le 
désinfecte que dans les cas de variole, de scarlatine, de rougeole et 
de typhus exanthématique. En même temps que la désinfection de 
l'appartement, on fait celle des latrines, et éventuellement celle des 
lieux où ont pu être déposés des objets contaminés. Enfin, à chaque 
opération, on prélève une taxe de 5 francs non sur le locataire, mais 
sur le propriétaire. 11 y aurait profit et justice à faire aussi payer le 
locataire, quand il le pourrait. Dx. 


INSTITUT PASTEUR 


Personne morte de la rage après le traitement. 

Lacombe Ernest, 30 ans, menuisier à Paleslro (Algérie), mordu le 
17 mars 1891 par un chien kabyle qu'on n'a pu rejoindre. 

Les morsures au nombre de six sont réparties sur les faces interne 
et externe du poignet gauche et sur la périphérie de la jambe gauche, 
à la hauteur de la crête tibiale; toutes sont profondes et ont donné 
beaucoup de sang; elles ont été cautérisées au thermocautère un quart 
d'heure après. 

Lacombe a suivi le traitement antirabique du 25 mars au 14 avril. 
Vers le 10 décembre, il est pris de bâillements incoercibles; le 20, il 
ressent des fourmillements dans le bras gauche, puis des douleurs 
violentes partant du poignet, gagnant i'avant-bras, le bras et l'épaule; 
le 23 il refuse de boire et manifeste de l'aérophobie ; le 25, il est pris 
de délire, devient furieux et succombe. 

L'incubalion de la maladie a été de 267 jours. 


144 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


INSTITUT PASTEUR 

STATISTIQUE ' DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE — JANVIER 1892. 


Morsures aux mains 


Morsures à la tête l simples 

et à la figure ( multiples . . . . 
Cautérisations efficaces 

— inefficaces 

Pas de catitérisution 

simples 

multiples . . . . 
Cautérisations efficaces 

— inefficaces 

Pas de cautérisation 

Morsures aux mem- | simples 

bres et au tronc \ multiples . . . . 
Caxitérisations efficaces 

— inefficaces 

Pas de cautérisation 

Habits déchirés 

Morsures à nu 

Morsures multiples en divers points du 

corps. . . 

Cautérisations efficaces 

— inefficaces 

Pas de cautérisation 

Habits déchirés 

Morsures à nu 


Trttaiiv ! Français et Algériens . 
lotaux. i Etrangers 


1/, 


31 


;5 


î|2 


7/ 
li 


Total général 100 


7 
3 


1 

jio 


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24 
18 


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10 

7 


17 


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3 


3 


» 


» 


» 


» 


» 


» 


» 


» 


» 


» 


— 


69 
3 


72 


li' 


13 


4^1 
l5 


17* 


20 


■1. La colonne A comprend les personnes mordues par des animaux dont la 
rage est reconnue expérimentalement; la colonne B celles mordues par des ani- 
maux reconnus enragés à l'examen vétérinaire; la colonne C les personnes mordues 
par des animaux suspects de rage. 

Les animaux mordeurs ont été : chiens, 95 fois; chats, 
S fois. 


Le Gérant : G. Masson. 


Sceaux. ~ Imprimerie ChaT'aire et C'a. 


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12 


Oino ANNÉE. MAUS 1892. N» 3. 

ANNALES 

DE 

L'INSTITUT PASTEUR 


MMMm m\ Il PAMSITISMl 

IMRAfELLlLAIRE ET I^TRAMJCLÉVIIÎE CHEZ L'HOMME 

Par m. SOUDAKEWITCII, 

Prosectenr à l'Institiu pathologo-anatoiïiiqus de Kiefl*. 


PARASITISME INTRACELLOLÂIRE DES lOPLÂSIES CAIlREOSES 


I 

Un observateur, initié à la pathogénèse et aux tableaux 
microscopiques des diverses maladies infectieuses, n'admet pas 
sans peine que les microbes jouent un rôle dans Tétiologie du 
développement des néoplasies épithéliales et conjonctives. 
D'ordinaire, en effet, les microbes n'édifient pas, ils détruisent. 
Les néoplasies que l'on rencontre dans les maladies micro- 
biennes ne sont constituées que par des leucocyte et autres 
phagocytes mésodermiques. 

Dans aucune de ces maladies, on n'observe de modifications 
progressives des tissus, tels que les tissus épithéliaux, par 
exemple, et si, dans quelques alfections de la peau, comme la 
lèpre, la tuberculose cutanée, on observe un développement 
assez intense de la couche papillaire, ce n'est pas à l'influence 
directe des bactéries qu'il est dû. Les microbes paraissent éviter 
le tissu épilhélial. 

10 


146 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

Le rôle des microbes dans le développement des condylômes 
aig-us (condjjlomata aciuninata) n'est point non plus bien établi. 

Tl n'est donc pas étonnant que les recherches bactériolo- 
giques n'aient pas donné de résultats positifs au sujet de l'étio- 
logie des carcinomes. Les travaux de MM. Nedopile, Scheurlein 
et Koubassow n'ont pas résolu cette question, qui est donc à 
reprendre. 

Les cinq dernières années ont vu paraître des descriptions 
de plus en plus fréquentes de divers corps inclus dans les cel- 
lules cancéreuses. Quelques auteurs prennent ces inclusions 
pour des Sporozoaires ou des organismes voisins. Ils inclinent 
même à leur attribuer la cause du cancer (Thoma, Darier, Albar- 
ran, Russel, Wickham, Malassez, Michaux, Nils Sjôbring, 
Pfeifîer, Kossinsky, etc.). 

D'autres savants croient que ces corps ne sont autre chose 
que des leucocytes ayant pénétré dans les cellules cancéreuses, 
où leur protoplasme subit une dégénérescence partielle (Borel, 
Klebs, Schlitz, Ilauser, Firket, Chattock-Ballance, Éberth, etc.). 

Il est évident qu'on ne peut nier la possibilité d'une dégéné- 
rescence partielle, par exemple hyaline, graisseuse ou muqueuse 
des cellules. La supposition, émise déjà en 1868 par Stendener *, 
d'une invagination des cellules cancéreuses les unes dans les 
autres, est aussi parfaitement plausible, surtout vu l'accroisse- 
ment si rapide de certains cancers et la résistance des tissus 
environnants. Je vais pourtant tâcher de prouver dans cet 
article que la plupart des corps inclus, décrits dans les cellules 
cancéreuses, doivent être reg-ardés comme des produits étran- 
gers, je dirai même comme de vrais parasites appartenant au 
groupe des Sporozoaires. 

J'ai d'autant plus hâte de le faire, que dans son dernier tra- 
vail sur ce sujet, M. Steinhaus^ dit que les formes qu'il a vues 
dans les cellules cancéreuses ne suffisent pas pour établir le 
parasitisme. 

En examinant de temps en temps des carcinomes, opérés 
dans la clinique chirurgicale du professeur llineck ou 
provenant d'autopsies, j'ai souvent pu observer des inclu- 
sions tantôt intracellulaires, tantôt intranucléaires. Elles se 

■1. Ueber d. invaginirte Zellen. Arch. f. m. Anal., B. 4-, s. 188. 
2. Ueber Carcinom-Einschlùsse. Virchoio's Archiv., t. 12(i, [i. 533. 


UEGHEaCllES SUll LE PAIIASITISME. 147 

présentaient sous forme de cavités rondes ou ovales, quelquefois 
à parois distinctes. Ce n'est que nirement que j'eus la chance do 
voir à leur intérieur une ou plusieurs j^ranulalions centrales ou 
excentriques. Dans rautomnc de Tannéo 189U, le professeur 
MorosolT eut ramabilité de mettre à ma disposition une tumeur 
de parotide opérée par lui. L'examen microscopique démontra 
que cette tumeur était un cancer glandulaire. Il contenait 
de nombreuses inclusions intracellulaires et surtout intranu- 
cléaires. On en trouvait souvent 3 à 10 sur un môme champ 
visuel. Ces corps inclus avaient une forme ronde ou ovale, et 
des parois résistantes. Leurs dimensions étaient différentes, 
depuis celle d'un point jusqu'à une dimension beaucoup plus 
grande. Dans ce dernier cas, la substance nucléaire était complète- 
mentrefoulée et atrophiée. Malheureusement je ne trouvai aucun 
contenu dans ces cavités (la tumeur était conservée dans le 
liquide de Millier et ensuite dans de l'alcool). Pendant mon 
séjour à Paris, je montrai des préparations de ce cancer à 
M. Metchnikoiï, qui se prononça pour la nature parasitaire des 
corps inclus. 

Après mon retour en Russie, je me mis à étudier divers 
cancers, surtout les cancers glandulaires. Je commençai par 
examiner le matériel de l'Institut pathologo-anatomique, con- 
servé dans le liquide de Miiller et l'alcool. Naturellement, j'étu- 
diai de préférence le matériel chirurgical et non anatomique. 
Je commençai parles nombreux cancers de la glande mammaire, 
en examinant toujours les ganglions lymphatiques enlevés 
avec le foyer primordial. 

Les coupes faites avec le microtome de Reichert étaient 
incluses dans de la celloïdine, et étaient colorées par différentes 
méthodes. C^est surtout le carmin borique que j'employais, en 
prenant pour couleur supplémentaire le bleu de méthylène 
aqueux, le vert iodé ou l'hématoxyline et l'éosine. 

J'ai étudié en tout 59 cas de cancers (cancers des glandes 
mammaires, de la lèvre inférieure, des glandes lacrymales, du 
cerveau, du foie, de l'estomac, du duodénum, de l'œsophage, de 
la langue, du testicule et du rectum). 

Je trouvais toujours des corps inclus intracellulaires et 
intranucléaires. Dans certains cas, ils étaient très nombreux 
(comme, par exemple, dans un carcinome de la glande mam- 


148 ANNALES DE L'INSTlïUT PASTEUR. 

maire); dans d'autres, beaucoup plus rares; il n'y avait 
pas d'exemple où ils fussent absents. En examinant les prépa- 
rations, je choisissais les vacuoles renfermant un contenu quel- 
conque, sans oublier jamais les possibilités d'erreur et de confu- 
sion indiquées plus haut. 

Mes observations me permettent de donner une planche de 
figures (PI. V), représentant les formes les plus nettes que j'ai 
pu voir. Pour économiser la place et simplifier les dessins, j'ai 
cru pouvoir ne point reproduire toujours le corps des cellules et 
leurs noyaux. 

La figure 1 (PI. V) représente la première inclusion qui attira 
mon attention. Une cellule cancéreuse de la glande mammaire 
renfermait un corps régulier, sphérique, qui avait refoulé et 
visiblement comprimé le noyau. Ce corps faisait l'etïet d'une 
bulle à parois résistantes; sur la surface intérieure des parois 
étaient disposés de petits corps clairs et arrondis. Ils étaient 
bien visibles à cause de la coloration intense de la paroi par 
riiématoxyline. Ces corps inclus étaient indubitablement étran- 
gers à la cellule cancéreuse, et on ne pouvait les confondre ni 
avec le noyau, ni avec le protoplasme dégénéré, ni avec les leu- 
cocytes. 

Le reste des figures est disposé sur la planche à peu près 
d'après la marche graduelle de complication de leur structure. 
Chaque corps inclus est muni d'une capsule plus ou moins 
épaisse. Leurs formes sont très variées, tantôt rondes (fig. 2, 3, 
19, 23), tantôt irrégulières, dans le genre d'une cellule amiboïde 
(fig. 9, 10, 11, 12), tantôt vermiformes (fig. 13, 14), ou semilu- 
naires (tig. 15, 16, 20). Dans quelques-uns, aut'our des corps 
amiboïdes apparaît une couche annulaire de substance finement 
granuleuse (fig. 17, 18). Puis on aperçoit une formation ana- 
logue au noyau (fig. 15, 20, 21) et, enfin, un vrai noyau, ayant 
une affinité pour les couleurs spécialement nucléaires (fig. 22). 
Finalement, je trouvai dans la cellule cancéreuse une autre cel- 
lule moins grande, ayant une capsule distincte et se rapprochant 
d'un leucocyte par sa structure et ses dimensions (fig, 25). Les 
inclusions les plus complètes sont celles représentées sur les 
figure 23, 20, et sur la figure 1, Planche VI. Elles ont, ou bien 
deux capsules {{\<^. 20 et 1, Pi. Vl), ou bien peuvent être regar- 
dées comme des inclusions doubles [tii^. 27). Le contenu des 


IIECIIEIICIIES SUR LK ]>AIIASITISME. 149 

inclusions f sL parfois multiple, tantôt volumineux (fig. Jk 6j, 
lantôtlrès petit (fig. 7). 

Dans des cas comparativement rares, il y avait 2, 3 et même 
o corjis inclus dans une cellule (fig. 2, PI. VI). Ces corps étaient 
alors tDUJours moins grands que lorsqu'ils étaient à l'état d'in- 
clusions isolées. 

Tous les tableaux représentésdanscemémoire, ainsi que toute 
une série d'autres observés par moi, me coniirmèrent de plus 
en plus dans l'idée que les cellules cancéreuses renfermaient des 
parasites. 

Dans de vieilles préparations de cancer, faites à ditférentes 
époques et conservées dans le liquide de Flemming', je retrou- 
vai de petites cellules dans celles du cancer; elles étaient 
renfermées à l'intérieur de vacuoles à parois distinctes, prove- 
nant évidemment de la solidification du protoplasme (PI. VI, 
%. 3, 4). 

Il fallait donc attendre de nouveaux cas et modifier la 
méthode de durcissement. 

Au mois de novembre 1891;, mon honoré collègne, M. le 
D"" Favorsky, rencontra dans une autopsie (à l'hôpital militaire) 
une carcinomatose étendue dans la cavité abdominale. îl eut la 
complaisance de mettre ce matériel à ma disposition. 

C'est le pancréas qui servait évidemment de foyer pri- 
mordial. 

On trouva de plus une inliltration cancéreuse accusée des 
gang-lions rélro-péritonéaux et des ganglions lymphatiques du 
mésentère. Le foie, la rate, les poumons, l'intestin grêle conte- 
naient des métastases volumineuses. Les lésions de l'intestin 
grêle se présentaient sous forme d'ulcères ronds à bords nette- 
ment infiltrés. Enfin il y avait une dégénérescence cancéreuse 
accusée du ganglion de l'aine droite. Cette tumeur avait la 
dimension d'un œuf de pigeon. — La veine cave inférieure 
était bouchée sur l'étendue de 1,5 centimètre, en partie par 
un coagulum sanguin pâle, en partie par un thrombus can- 
céreux. 

Je conservais en général mon matériel dans le liquide de 
Millier. Mais en même temps je découpais de petits morceaux 
dans les régions les plus typiques et non dégénérées, que je 
divisais en deux parties. L'une était piacée dans le liquide de 


150 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

Mûller.raiilre dans une solution à 1 0/0 d'acide osmique. J'opérais 
ainsi afin de pouvoir comparer les résultats des deux méthodes. 

Les morceaux restaient pendant deux jours dans Tacide 
osmique, et étaient ensuite transportés dans le liquide de MûUer * 
pour 3 à5 jours. Après un lavage soigneux dans de l'eau, on les 
transportait dans de l'alcool à concentration de plus en plus 
forte jusqu'à durcissement complet. 

Les coupes, faites avec des morceaux qui n'avaient été 
inclus dans aucune matière, se coloraient très bien par l'héma- 
toxyline ancienne de Ranvier. 

Les tableaux que j'observai sur les premières préparations 
me déconcertèrent. 

Sur le fond légèrement jaune sale de la préparation, on voyait 
à côté des noyaux, colorés comme d'habitude, des formations 
.sphériques et régulières, disséminées et colorées en violet pur 
plus ou moins intense (phénomène de métachromatie). Cette 
couleur était tout à fait analogue à une coloration par un violet 
d'aniline. 

La structure des nodosités cancéreuses était parfaitement 
typique. Dans le foyer primordial on observait le tableau du 
cancer glandulaire mou, tandis que les métastases présentaient 
un accroissement du tissu conjonctif et ollraient un caractère 
cirrhotique. 

Les cellules cancéreuses se distinguaient par leur grande 
dimension. Leur protoplasme était tantôt normal, à fines granu- 
lations, tantôt consistait en grains brillants, sphériques et homo- 
gènes. Ces grains ne se coloraient nullement par l'hématoxyline. 
Quelquefois, parmi eux, étaient dispersées des gouttes graisseuses 
beaucoup plus petites et colorées en noir par l'acide osmique. 
On pouvait observer sur les préparations les transformations 
progressives du protoplasme en grains homogènes. 

Ces cellules, que j'avais observées antérieurement dans 
d'autres cas, avaient beaucoup d'analogie avec les cellules 
hyalines des granulomes du rhinosclérome. Pourtant les granu- 
lations de ces dernières étaient uniformément fines, et je n'avais 
pas rencontré du tout de grands amas. 

1. J'ai remarqué que les tissus fixés par l'acide osmique se coloraient mieux 
par l'hématoxyline après avoir séjourné, même peu de temps, dans le liquide 
de Millier. 


RECHERGIIES SUR LE PARASITISME. lot 

Les corps violets avaient des dimensions très difl'érentes, 
depuis celle d'un coccus, jusqu'à celle de la cellule cancéreuse 
elle-même. Souvent on voyait des formations petites ou grandes 
d'une couleur olive; elles ne se coloraient pas du tout. Tous les 
corps inclus, à de rares exceptions, avaient une capsule distincte 
à double contour. 

Ce n'est que rarement qu'on pouvait voir dans les prépa- 
rations deux corps complètement semblables ; ils différaient tous 
par leur dimension, et par leur structure très variée. 

Les corps les plus simples avaient l'aspect d'un amasolivaire 
arrondi, de consistance colloïde; mais ils devenaient de plus en 
plus compliqués. 

Le petit amas s'entourait d'une nouvelle couche, tantôt homo- 
gène et tantôt finement granuleuse (PI. Vil, fig 4, 5, 8). Dans 
certains cas on observait encore un nouvel anneau avec des 
intervalles minces etréguliers (fig. 13). Quelques-uns avaient à 
leur périphérie comme des rayons tantôt minces et tantôt 
épais; ces rayons étaient ou bien uniformes dans leur par- 
cours, et pointus à l'extrémité, ou bien portant de petits renlle- 
ments aux bouts (PL YII, fig. o, 6, 7, 11, 14). La capsule externe 
en contenait une autre, pas aussi régulière, plissée, on aurait 
dit affaissée sur elle-même (fig. 14). 

Les rayons de certains corps étaient plus longs, se coloraient 
par l'hématoxyline, et ressemblaient beaucoup à des pseudo- 
podes (fig. 3, 10). 

La capsule contenait souvent plus d'une inclusion; quelque- 
fois il y en avait plusieurs, — 6, 8, 12 et plus. Leur forme était 
tantôt sphérique, tantôt elliptique, tantôt celle de bâtonnets un 
peu courbés et renflés aux bouts (fig. 15, 18). De telles capsules, 
contenant plusieurs corps inclus comparativement volumineux, 
ne se coloraient pas en violet. 

Il y avait des cellules qui renfermaient plusieurs corps 
inclus, — jusqu'à 15. Ils étaient d'une dimension à peu près 
égale, ayant chacun une capsule séparée. Leur contenu était 
tantôt semblable, tantôt ditîérent. Plusieurs fois j'ai trouvé des 
cellules dont les inclusions étaient de dimension et de structure 
différente (PL VI, fig. 7, 8; PL VII, fig. 19). 

Les cellules cancéreuses à corps inclus multiples étaient 
hypertrophiées, et atteignaient de très grandes dimensions. Enfin 


152 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

1rs nodules métastatiques renfermaient des capsules à contenu 
multiple. Ce dernier consistait en granulations tantôt fines et 
serrées, tantôt rangées en filaments. Les granulations se colo- 
raient en violet foncé par l'hématoxyline. On observait au 
centre ou à la périphérie de l'amas granuleux une petite masse 
protoplasmique incolore (PI. YII, fig. 20, 21). 

11 y avait aussi sur les préparations beaucoup de formes sem- 
blables aux leucocytes, renfermées dans les vacuoles. 

Ne pouvant décrire les nombreuses formes dans toutes leurs 
diversités, je me contente de donner ici des figures exactes (PI. YII), 
plus démonstratives que toute description. La figure 1 représente 
un foyer métastatique, comparativement rare, du foie. On peut 
y observer sur le même champ visuel 28 inclusions différentes 
de grandeur variée. 

Un examen superficiel des premières préparations de ce 
cancer me montra parfaitement que j'avais affaire à un vrai 
organisme animal étranger, et non à des noyaux déformés, à du 
protoplasme en voie de dégénérescence, à des leucocytes incor- 
porés, ou à des cellules cancéreuses invaginées. Il m'était 
beaucoup plus difficile de définir la nature et la place de cet être 
dans le système zoologique. 

J'abandonnai donc aux spécialistes la solution de ce pro- 
blème, ainsi que l'éclaircissement des relations mutuelles entre 
les diverses formes, et je continuai à étudier ce cas ainsi que 
d'autres encore. 

Je fis des coupes avec des morceaux du cancer du dernier 
cas décrit, en les durcissant dans le liquide de Miiller. Je 
vis alors que sur ces nouvelles préparations, les sporozoaires 
indubitables que je viens de décrire avaientun tout autre aspect. 
Par exemple on n'observait presque pas de phénomènes de méta- 
chromatie après la coloration par l'hématoxyline. 

Les parasites étaient très nombreux, mais on ne retrouvait 
plus en eux la trace de la structure compliquée décrite plus 
haut; ils ressemblaient beaucoup aux formes représentées sur la 
première planche. Ce sont surtout des corps parfaitement sembla- 
bles à des colloïdes, ou à une substance muqueuse sans structure, 
que l'on trouve sur ces préparations. 

De tels tableaux pouvaient être facilement interprétés comme 


RECIIEIÎGHES SUR LE PARASITISME. 133 

provenant de la dégénérescence protopiasmique des cellules 
cancéreuses. 

Parmi le matériel de l'Institut pathologo-anatomiqiie, je 
trouvai encore deux cancers de pancréas (l'un secondaire, après 
un cancer de l'estomac, l'autre primaire, les deux accompagnés 
de métastases du foie) conservés dans le liquide de Millier. En 
examinant les préparations faites avec ce matériel, je compris 
la signiiication de ces inclusions intracellulaires, volumineuses 
parfois, que je prenais autrefois pour une modification des 
noyaux ou pour une dégénérescence protopiasmique. 

Les figures 9 et 10 (PL YI) présentent les inclusions les plus 
caractéristiques de ces cas. 

Les tableaux étaient quelque peu différents dans le cas d'un 
cancer extirpé des reins. Ici les inclusions (PI. VI, fig. 11, 12, 
13, 14, 15) avaient l'aspect de bulles sphériques, fortement 
colorées par l'hématoxyline; leur contenu était différent. On ne 
pouvait confondre ces bulles qu'avec les noyaux. 

Les trois cas que je viens de mentionner ( 2 du pancréas et 
1 des reins), ainsi que 14 autres cas observés par moi dans le 
matériel de llnstitut patholog-o-anatomique (cancers du foie, des 
glandes mammaires, du testicule et de la matrice) présen- 
taient des inclusions d'aspect très semblable à celui des forma- 
tions que je regardais comme de vrais sporozoaires. Ces 
observations prouvèrent de plus que le premier cancer pancréa- 
tique étudié avait un gjrand intérêt, non seulement comme 
cas isolé de cancer contenant quantité de vrais sporozoaires, 
mais aussi comme point de départ dans l'explication de toutes 
les autres inclusions cancéreuses. 

Je fixais les carcinomes frais par le liquide de Flemming et 
l'acide osmique. Je constatais toujours la présence de parasites. 
J'ai étudié jusqu'ici 18 cas semblables (cancers du foie, de 
la glande mammaire, glande lacrymale, matrice et lèvre infé- 
rieure). 

C'est surtout dans un carcinome du foie (dans la clinique 
chirurgicale du professeur Rineck) que je trouvai la plus 
grande quantité de parasites. Le cadavre nous parvint assez 
frais, de sorte que l'autopsie fut faite bientôt après la mort. 
L'examen macroscopique démontra que le foie était complète- 
ment envahi par une quantité de nodules, surtout petits, et que 


154 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

le parenchyme était réduit au minimum. Il n'y avait point du 
tout de métastases. 

Les cellules cancéreuses étaient très grandes, et présentaient 
des figures karyokinétiques géantes et asymétriques bien mar- 
quées, de l'hypochromatisme, etc. Ces cellules contenaient des 
parasites tantôt isolés, tantôt multiples. 

Après nne coloration prolongée par la safranine, quelques 
préparations présentèrent des phénomènes de métachromatie et 
prirent une couleur violet pâle (comme dans les observations 
faites sur la coloration du système nerveux d'après la méthode 
d'Adamkiewicz). Il y avait des formes très ressemblantes aux 
formes rayonnées du cancer du pancréas (PL YII, fig. 19, 20, 
28); d'autres étaient tout à fait originales (fig. 22, 23). Très 
souvent, on trouvait ici non seulement des formes intracellu- 
laires, mais aussi intranucléaires (fig. 2.j, 26) de dimensions 
différentes. 

Dans ce cas, les cellules cancéreuses contenant des parasites 
présentaient des modihcations très caractéristiques ; leur noyau 
était tantôt refoulé et contracté, tantôt agrandi (il rappelait 
le stade monaster). 

Les contours cellulaires étaient irréguliers comme à l'ordi- 
naire, mais, en outre, ils étaient munis de longs prolongements 
lins, dans le genre des pseudopodes. Je ne me prononce pas 
encore sur ce phénomène, observé par moi antérieurement (sur 
la lèvre inférieure). Je ne puis qu'indiquer une modilication 
analogue de l'épithélium rénal de Hdix hortensis sous l'influence 
de l'introduction delà Klossia (Pfeilïer, Protozoen aïs Infections- 
erreger, II AulL, s. lo, 7G, 77). 

Tels sont les faits que j'ai observés. En les résumant, je me 
crois autorisé à dire que dans tous les 95 cas de cancers 
étudiés par moi, j'ai toujours trouvé des parasites intracellu- 
laires de la classe des Sporozoaires. 

La présence du parasite causait d'un côté une hypertrophie 
de la cellule et parfois une modification de son protoplasme, et 
d'un autre, différentes modifications du noyau, souvent dans le 
sens de la karyokinèse. 

Ce n'est que sous forme de supposition plausible que je peux 
ajouter que les parasites, observés dans les divers cancers, 
appartiennent à des espèces différentes. 


REGllEllCIlES SUR LE PARASITISME. 155 

Même eu laissant de côté les nombreux travaux* sur le 
cancer, travaux qui prouvent qu'on avait, sans aucun doute, 
alFaire à de vrais parasites, nous pouvons multiplier les cas de 
parasitisme, observés dans les cellules cancéreuses, en nous 
adressant ù la littérature médicale des décades précédentes. Il 
suffit de lire les articles de Leubuscher-, W. Braum\ Erichsen* 
et d'autres, et de voir leurs dessins pour se convaincre que ces 
observateurs avaient alîaire à des parasites du cancer. 

D'après ce que je sais, Virchovv a le premier observé ces 
parasites, il y a quarante ans de cela. On le voit d'après les 
dessins exacts joints à ses articles : Sur IHistoire du, développe- 
ment du cancer. Archic. de Virchow, t. I, 1847, p. 94, et La for- 
mation endogène des cellules dans le cancer, Ibid., t. III, 1831, 
p. 127. Surtout voir le T. I, PI. II, fig. 5, et T. III, PI. II, fig. 2 
f, (/, (', /', g, II, i,j: iig. 3 b, c, e; lig. 4 a, a' b, c, d, /", ; fig. 6 
a, b, e. 

Dans un article prochain je tâcherai d'exposer mes 
observations sur les relations des parasites envers le proto- 
plasme et le noyau, et sur les cellules géantes typiques, dans les 
néoplasies cancéreuses. 


1. M. A. Kossinsky, Contribution d l'étude des phystaU phares des tumeurs cancé- 
reuses. Annales de VUniversilé de Varsovie, 1890, n° 7, p. o, fig. i, 2, 8, 9. 

L. Wickham, Contribution à l'étude des psorospcrmoses cutanées. Maladie de 
Pacjct. 1890. PI. II, fig, 4, o, 6. PI. III, fig. 12, lo. 

D. Hansemann, Ueb. assimetrische ZeUtlicHung in Epithelkrebsen u. d. biolo- 
gische Reieulung. Vir. Arch., T. 119, 1890, p. 299, PI. IX, fig. 4, 8, 17, 18. 

H. Stroebe, Zur Kenntniss verschiedener cellidurer Vorrionge und Erscheinungen in 
Geschwiilstcn. E. Zieglcr's Beitrdgc. T. XI. 1890, p. 1. Pi! I, fig. 8, 9, 13, ia, 17. 

J. Steinliaus, loco citato, pi. XVIII, fig. 3, 13, Li, lu, 12, 18, 19, 20 et toute la 
planclie XIX. 

Foa, Gazzeta medicn di Torino, 1891. 

2. PatliologischeBindegewebscntwicIcelunj ini Gehirn. Virchow's Arch , t. XIII, 1858, 
s. 494, pi. VIII, fig. 6. 

3. Zur Schleini-metnmorphose der Krebses, Id., t. XVII, 1859, p. 46-4, pi. X, fig. 2. 

4. Zwei Fdlle von Carcinosis miliaris acuta. Id., t. XXI, 1861, p. 465, Pi. VII, 
fig. 3. 

Voir aussi les travaux sur le cyiiiulrome, Koester, Boeltcher, etc., ainsi que 
leurs dessins. 


156 ANNALES DE LLNSTfTUT PASTEUR. 


EXPLICATION DES PL/^NCHES 

PLANCHE V 

Beaucoup de figures représentent les inclusions dans le corps cellulaire 
et le noyau. Toutes les figures sont prises avec l'objectif et l'oculaire 3 
de Hartnack. Les fig. 4 et 26 avec l'apochromatique âjO"™, oculaire 
compensât. IV Hartnack. 

Fig. 1, 2, 3. — Cancer do la glande mammaire. Carmin, Bleu de méthy- 
lène. 

Fig. 3. — L'inclusion s'insinuo dans le noyau. 

Fig. 4. — Ganglion du même cas. 

Le canal du vaisseau lymphatique renferme deux cellules cancéreuses 
avec des inclusions irrégulières. Le traitement des préparations est le mèm e. 

Fig. 5, 6. — Autre cancer de la glande mammaire. Carmin, vert iodé. 

Fig. 7. — Cancer du cerveau. Capsule distincte à contenu finement et 
peu coloré. Elle a refoulé le noyau. Carmin, bleu de méthylène. 

Fig. 8. — Cancer du testicule non descendu. Les parties foncées de 
l'inclusion colorées par l'hématoxyline, le centre par l'éosine. 

Fig. 9, 10, M, 12, 13, 15, 16, 17. — Cinq cas de cancer de la glande 
mammaire. Carmin, bleu de méthylène. 

Fig. m. — Cancer du ganglion de la poitrine. Même traitement. 

Fig. 18, 19, 20. — Métastases miliaires du péritoine, accompagnant le 
cancer de l'estomac. Même traitement des préparations. 

Fig. 21, 22. — Morceaux du foyer primitif du cas précédent. Carmin, 
vert iodé. 

Fig. 23. — Inclusion double du cancer du duodénum. Carmin, bleu de 
méthylène. 

Fig. 2-i. — Cancer du rectum. Même traitement de préparations. 

Fig. 23, 26. — Inclusion du cancer de la glande mammaire. Hématoxy- 
line-éosine. 

PLANCHE VI 

Fig. 1, 7, 8. 10 et 28. — Système apochromatique. 2,0°"", oculaire 
compensât. IV. Les autres figures avec les objectifs 8 et 9 et l'oculaire 3 de 
Hartnack. 

Fig. 1. — Coupe d'un vaisseau sanguin (?) du cancer de l'estomac. 
Le canal de ce vaisseau contient deux cellules cancéreuses, dont Tune ren- 
ferme une inclusion et deux corpuscules sanguins. Hématoxyline-éosine. 

Fig. 2. — Cellule du cancer de la glande mammaire contenant des 
inclusions multiples. Carmin, bleu de méthylène. 

Fig. 3, 4. — Deux cellules d'une ancienne préparation du cancer du foie ; 
l'une contenant deux inclusions. Flemming, safranine, acide picrique. 

Fig. 5, 6. — Diverses formes des parasites du 1" cas du cancer du pan- 
créas. 


[{KCllEllCHKS SUR LE PARASITISME. 157 

FiG. 7 cl 8. — Deux cellules à parasites niulliples. Phénouicnes de 
« Mehi'lings infecUon ». 

FiG. 9. — Inclusion du â* cancci* du pancréas. Héniatoxyline-éosine. 

Fk;. 10. — Cellule avec inclusion d'une métastase du foie, accompagnant 
un cancer primaire du pancréas. (IIP cas). Carmin, bleu de méthylène. 

FiG. Il, 12, 13, 14, 15. — Inclusion du cancer des reins. Hématoxjline- 
éosine. 

FiG. 16. — Inclusion avec capsule épaisse d'un ancien cas de cancer pri- 
maire du foie. Carmin, bleu de méthylène. 

Fu;. 17. IS, 19, 20, 21, 22, 23, 2i, 25, 26, 28. — Inclusions du cancer 
primaire du foie. Flemming. Safranine. 

FiG. 21. 22. 23. — Capsules à contenu multiple non coloré par la safra- 
nine. La formation semi-lunaire sur la fig. 22 est colorée par la safranine. 
Le contenu de la capsule sur la fig. 23 ressemble à un groupe de bacilles 
courts et épais, collés ensemble. 

FiG. 25. — Noyau agrandi d'une cellule cancéreuse avec deux inclusions. 

Fig. 26. — Inclusion intranucléaire. 

FiG. 27. Cellule du cancer de la glande mammaire avec une inclusion et 
une figure karyokynétique. Flemming. Safranine. 

Fig. 28. — Cellule avec deux corps inclus, dont le plus petit est en 
dehors du foyer. 

PLANCHE VII 

La fig. 1 est reproduite avec l'objectif 7 et l'oculaire 3. Les autres avec 
l'objectif 9, l'oculaire 3 de Hartnack. Acide osmique. Coloration par 
l'hémaloxyline. 

Fig. 1. — Région de métastase du foie. P'' cas du cancer du pancréas. 
Acide osmique. Dans l'angle inférieur gauche du dessin on voit un groupe 
d'érytrocytes jaune pâle. On voit 28 formes diverses du parasite sur la 
figure. La forme a correspond à celle de la fig. 1 représentée avec un plus 
fort grossissement. 

La forme b ressemble aussi à celle de la fig. 4. Seulement les filaments 
sont beaucoup plus minces et l'enchevêtrement formé par eux plus épais. 

Fig. 2, 3, 6, 7, 8, 9, 10, \ 1, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 20, 21. — Diverses 
formes des parasites ilu 1" cas du cancer du pancréas. Acide osmique, 
hématoxyline. 

Fig. 4. — Au centre de la capsule est disposé un corps rond, de couleur 
olive. Il contient un noyau. Le reste de l'espace est occupé par des filaments 
tantôt grêles et tantôt épais entrelacés et de couleur violette. 

Fig. 5. — Formation en pelotte à épingles. Les filaments sont colorés en 
violet, et leurs bouts renflés (spores) en violet foncé. 

Fig. 19. — Cellule à infection multiple du même cas. Même traitement 
des préparations. 


AU SUT DB MÉMWIIE M M. SOliDAKEWlTCtt 


Pau xAI. E. METGHNIKOFF, 


M. Soudakewitch a joint à son manuscrit plusieurs pré- 
parations du cas de cancer principalement étudié par lui, c'est-à- 
dire d'un cancer du pancréas et des ganglions lymphatiques, 
siège de métastases. Partout on voit toute la série de formes 
exactement décrites dans son mémoire. Ce sont d'abord de très 
petits corps ronds, nettement délimités et siégeant sûrement 
dans l'intérieur du protoplasma des cellules cancéreuses. 11 ne 
peut être question ni d'invagination des cellules cancéreuses 
ni d'une dégénérescence des cellules dans ces corps ronds. La 
seule interprétation qui puisse être en harmonie avec les connais- 
sances actuelles est celle-ci, que les corps intracellulaires sont 
des parasites qui se sont introduits dans l'intérieur des cellules 
et y ont acquis des proportions considérables. La structure de ces 
parasites, leur enveloppe solide, ainsi que leur contenu proto- 
plasmique indiquent que nous avons aifaire plutôt avec des 
Coccidies qu'avec aucun autre groupe d'organismes. 

Parmi les données d'autres savants qui ont précédé 
M. Soudakewitch, il faut citer surtout celles de M. Foa, qui a 
trouvé dans un cas de cancer de la mamelle des corps ronds 
tout à fait semblables à ceux de M. Soudakewitch. J'appuie cette 
.analogie sur l'examen des préparations qui m'ont été obligeam- 
ment montrées par M. Foa, et surlesquelles on aperçoit plusieurs 
états du parasite rond, correspondant à ceux de M. Soudakewitch. 

Mais le parasite décrit par les auteurs cités n'est point 
évidemment le seul qu'on trouve dans des tumeurs malignes. 
Depuis quelques années j'ai eu l'occasion d'examiner les pré- 
parations de M. Malassez et de ses élèves, MM. Albarran, Darier, 
Wickham, sur lesquelles on voit bien des parasites dans 
l'intérieur des cellules des néoplasies. Ce qui frappe surtout 
l'observateur, c'est la ressemblance frappante qui existe entre 
ces intrus et les jeunes stades de la coccidie du lapin, décrits 


RtCIIEIlClIES SUR l^l'] PARASITISME. 139 

par M. JMalassez ', ainsi que l'analogi»^ outre la néoplasie 
épilhéliale des canaux biliaires du lapin alteint de psoro- 
spermose et les véritables tumeurs épithéliales. Ces deux 
rapprochements, appartenant à M. Malassez, ont servi de point 
de départ aux études sur l'éliologie des tumeurs, études entre- 
prises par M. Malassez lui-même et ses élèves. 

Les découvertes de M. Soudakewitch constituent un pas 
nouveau et très intéressant dans cette voie. 

Une fois orientés dans la question du parasitisme dans le 
cancer, on pourrait tracer une sorte de programme pour les 
études subséquentes. 

Comme dans ces tumeurs on ne trouve qu'un nombre limité 
de stades qui ne résument point le développement complet des 
coccidies, il faudrait rechercher ce que deviennent les parasites 
en dehors de lorganisme malade. Les parasites devraient être 
étudiés surtout à l'état vivant, dans leurs évolutions après l'abla- 
tion de la tumeur. L'étude des pièces durcies n'est point suffisante 
pour éclaircir toutes les questions principales. 

Pour ce qui concerne les inoculations, il ne faudrait point 
perdre de vue que les coccidies sont des parasites très délicats, 
dont chaque espèce n'est capable de vivre que dans une espèce 
de cellules d'une seule espèce animale. Voilà pourquoi on ne 
peut pas espérer inoculer avec succès le cancer de l'homme à 
des animaux. D'un autre coté l'analogie des cancers avec la 
psorospermose des lapins oblige d'entreprendre les inoculations 
non avec des pièces fraîches, mais bien avec des cancers 
qui ont séjourné pendant un temps plus ou moins long en dehors 
de l'organisme. La psorospermose des lapins est une maladie 
miasmatique typique, se propageant par des spores qui se déve- 
loppent après la mort des lapins, dans le milieu ambiant. L'ana- 
log'ie avec le cancer fait présumer de même que ces néoplasies 
appartiennent au nombre des maladies miasmatiques, qui se 
répandent aussi à l'aide de spores formées en dehors de l'orga- 
nisme. 

Toutes ces hypothèses peuvent servir au moins comme point 
d'appui pour des recherches ultérieures sur cette maladie des 
plus importantes. 

1. Archives de médecine expérimentait', 18'Jl, p. 1. 


ETUDE EXPERIMENTALE 

m mh mm\m ou cobra cape 

ET EXPOSÉ D'UNE MÉTHODE DE 

\EliTlî.\llSATIO.\ DE CE WJIN II.WS l/OIKIAMSME 

Par m. le D"" Albert CALMETTE. 

Médecin de l''" classe du corps de santé des colonies. 
Directeur de l'Inslitut bactériologique de Saigon. 


Un village des environs de Bac-Lieu (Cochinchine), a été 
assailli, au mois d'octobre 1891, à l'époque des grandes pluies, 
par une bande de serpents venimeux appartenant à l'espèce Naja 
tripiidians ou cobra capel. Ces animaux, refoulés jusque dans les 
cases indig'ënes par l'inondation, ont mordu quarante individus, 
dont quatre, d'après ce qui nous a été rapporté, sont morts 
presque aussitôt. Un Annamite a pu capturer et enfermer dans un 
baril dix-neuf de ces cobras, et l'administrateur de l'arrondis- 
sement, M. Séville, eut l'obligeance de les adresser au labo- 
ratoire. 

Quatorze d'entre eux arrivèrent encore vivants. Nous en 
sacrifiâmes immédiatement onze pour extirper leurs glandes à 
venin. 

On sait que le naja tripudians est le serpent le plus redou- 
table de toutes les espèces venimeuses : sous le rapport de la 
puissance destructive, il dépasse de beaucoup les crotales et les 
trigonocéphales ou serpents fer de lance du nouveau monde. Dans 
l'Inde anglaise seule, où il est extrêmement répandu, il occa- 
sionne, d'après les rapports officiels, une mortalité de 20, 000 per- 
sonnes chaque année Ses victimes sont nombreuses aussi en 
Birmanie, dans la péninsule malaise, à Sumatra et Java. 

En Cochinchine, les Annamites le redoutent beaucoup, mais, 


ETUDE EXPEIUMKNTALE. 161 

bien qu'il soit assez commtin, on entend rarement parler d'acci- 
dents mortels occasionnés par ses morsures, du moins aux 
environs de Saigon. 

La variété la plus répandue dans ces parages porte sur la 
face supérieure de la dilatation du cou une empreinte circulaire 
blanche, en monocle, au lieu de la forme en lunettes qui est plus 
commune dans l'Inde, surtout à Ceylan. Les autres caractères 
zoologiques sont les mêmes, d'ailleurs, pour les deux variétés, 
et elles n'ont rien à s'envier l'une à l'autre, en ce qui concerne 
l'intensité de leur venin. 

Les laboratoires d'Europe ne sont pas bien placés pour fies 
recherches sur le venin des najas, des trigonocéphales ou des 
crotales. Aussi nos connaissances sur ce sujet sont-elles 
restreintes. Weir Mitchell et Reichard en Amérique, Wall et 
Armslrong- en Ang-leterre, le professeur A. Gautier en France, 
ont cependant pu étudier la composition chimique de ces venins, 
et quelques-unes de leurs propriétés physiologiques. 

M. A. Gautier a préparé, en 1881, avec des échantillons de 
venin authentique de trigonocéphale et de naja, deux alcaloïdes 
nouveaux (najine et élaphine) présentant les réactions habituelles 
des ptomaïnes, mais qui ne constituent pas la partie la plus dan- 
gereuse de ces venins : ils ne font pas succomber les animaux; 
tout au plus leur donnent-ils un peu d'essoufflement ou d'hébé- 
tude, quelquefois de la somnolence. 

D'après ce savant*, « la partie essentiellement active du venin 
des ophidiens est azotée, mais non alcaloïdique ; bien mieux, la 
composition centésimale du venin se rapproche singulièrement 
de celle de la partie incristallisable extractive des urines nor- 
males ». 

La nature du principe actif des venins nous est donc inconnue ; 
mais leur mode d'action physiologique et la disposition anato- 
mique des glandes qui les sécrètent font supposer une analogie 
entre eux et la salive parotidienne. Les glandes des najas repré- 
sentent exactement les parotides des autres animaux, et même, à 
l'état normal, la salive des vertébrés supérieurs, celle de l'homme 
par exemple, contient des substances toxiques. M. k. Gautier en 
a retiré un extrait, venimeux au moins pour les oiseaux, et, 

1. Séances des 12 et 19 janvier 1886, Bulletin de l'AccuL de méd. 

11 


162 ANNALKS DE L'INSTITUT PASTEUR. 

d'après lui, le venin des serpents diffère de notre salive par 
l'intensité des effets bien plus que par sa nature intime '. 

En dehors des recherches que nous venons de citer, aucun 
travail d'ensemble n'a été entrepris encore, avec des matériaux 
d'expériences suffisants, sur la physiologie de l'envenimalion par 
le naja, et sauf la Thanatophidia indica de Fayrer (Londres 1872) 
et le mémoire lu par le même auteur à la Société médicale de 
Londres le 28 janvier 1884% qui résume à peu près tontes les 
connaissances que l'on avait acquises, à cette époque, sur le 
venin des serpents en général, nous n'avons pu relever, dans la 
bibliographie médicale, aucun document un peu complet sur ce 
sujet®. 

Aussi ne pouvions-nous pas laisser échapper l'occasion 
exceptionnelle qui s'offrait d'en poursuivre l'étude, à l'aide des 
vingt-deux glandes venimeuses fournies par nos cobras. Nos 
expériences, entreprises avec la collaboration de M. le D' Gaston 
Lépinay, médecin adjoint du laboratoire de bactériologie, ont 
porté sur 215 animaux. Nous avons cherché, malheureusement 
sans succès, à produire l'état réfractaire, l'immunité artificielle 
contre l'envenimalion, en appliquant tour à tour chacune des 
méthodes à l'aide desquelles on a pu, récomment, créer l'immu- 
nité contre les toxines microbiennes ou contre les albumoses 
végétales toxiques telle que la ricine (Ehrlich). Mais, par contre, 
nous avons trouvé une méthode qui permet d'arrêter sûrement 
i'envenimation à son début, pourvu que les symptômes de 
paralysie bulbaire ne se soient pas encore manifestés. Cette 
méthode s'est montrée efficace sur les animaux de laboratoire, 
lapins, cobayes, singes, chiens, et bien que nous n'ayions pas eu 
l'occasion de l'appliquer à l'homme, nous pensons qu'elle con- 
serverait sur lui son efficacité. 


1. Les alcaloïdes dérivés des matières proteiques sous l'influence de la vie des 
ferments et des tissus. Journal il'anat. et de plujsiol. sept.-oct. i881. 

'2. Traduit par M. le D'' Treille dans les Archives de méd. navale, juillet 1884. 

3. En revanche les travaux sur le venin de la vipère {Pelias bcrus) commune en 
Europe sont nombreux. Les plus importants ont élé publiés par M. Viaud Grand- 
Marais, de Nantes. On en trouvera, du reste, la bii)liographie rompiète dans ['ar- 
Wç,\ii Serpents venimeux du même auteur, dans le Dicfioinifiire encijclopcdiqu^, 3c série 
t. IX. 


ETUDE EXPÉRIMENTALE. 163 


PRÉPARATION ET CONSERVATION DU VENIN, 

Les glandes à venin du naja adulte ont à peu près la grosseur 
et la forme d'une amande décortiquée. Le liquide qui s'en écoule 
lorsqu'on les comprime, est transparent, filant; mélangé à l'air, 
il forme des bulles très persistantes comme une émulsion de 
blanc d'œuf. Chaque glande en fournit à peu près trente gouttes, 
et nous estimons que tout l'appareil à venin d'un naja de forte 
taille n'en contient pas plus de trois grammes. 

Les vingt-deux glandes dont nous avons pratiqué l'ablation 
ont été recueillies dans des cristallisoirs stérilisés et divisés en 
trois lots : 

i^^ lot. — Sept glandes, finement hachées, ont été triturées 
dans un mortier de cristal et mélangées avec 30 grammes de 
glycérine à 30'^ Baume, pure, puis passées à travers un tamis en 
fil de laiton. Le liquide tamisé a été réparti dans des tubes à 
essai flambés et dans des tubes à vaccin. 

2" lot. — Huit autres glandes ont été mises à macérer dans 
la glacière, pendant 18 heures, avec 300 grammes d'eau distillée 
stérilisée. Le lendemain, un quart du liquide recueilli fut mis à 
évaporer sous une cloche avec de l'acide sulfurique, deux autres 
quarts stérilisés par filtralion sur une bougie Chamberland, et 
le dernier quart mélangé daus un ballon avec 10 grammes de 
phosphate de chaux en poudre. Ce phosphate fut ensuite dessé- 
ché à l'étuve à 50°. 

3® lot. — Les sept dernières glandes, broyées et macérées 
pendant 18 heures avec 2.j0 grammes d'eau salée à 10 0/0, furent 
ensuite traitées par 50 grammes d'une solution saturée de 
sulfate de soude et jetées sur le dialyseur. Douze heures après, 
on a recueilli dans des matras le liquide visqueux resté sur la 
membrane du dialyseur, en l'additionnant de quelques gouttes 
d'essence de santal afin d'éviter la putréfaction. 

Ces préparations nous ont servi à pratiquer toutes nos expé- 
riences. Le produit obtenu par la trituration des glandes avec la 
glycérine s'est montré d'une virulence extrême. Une goutte, 
placée sous la peau, suffit pour donner la mort en moins d'une 
heure aux petits animaux, rats, pigeons, et en un peu plus 


c-^- \.-' d 

^ 

/} 


i64 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUU. 

de temps, mais d'une manière tout aussi fatale, aux poules et 
aux lapins. 

Le venin ainsi préparé ne s'altère pas et conserve proba- 
blement très longtemps toute sa virulence, pourvu qu'il soil 
maintenu dans l'obscurité. 

Celui que nous avons obtenu par l'évaporalion sous cloche, 
au moyen de l'acide sulfurique, présente l'aspect de petites 
lamelles écailleuses jaune brun. Une trace de ce venin desséché, 
triturée avec un peu d'eau distillée et inoculée dans le muscle 
pectoral d'une poule, la tue rapidement. 

La solution aqueuse filtrée sous pression de quatre atmos- 
phères au filtre Chamberland, est aussi virulente après qu'avant 
la filtration. Bien que cette préparation représente seulement 
une dilution de venin à environ 2 0(0, il suffit d'en injecter 
3 gouttes à un pigeon pour lui donner la mort en 10 minutes 
environ. Le lapin en supporte quelquefois i/8 de centimètre 
cube, mais en injection intraveineuse, deux gouttes le tuent 
sûrement. 


PHYSIOLOGIE DE L ENVENIMATION. 

Nous n'avons pas eu l'occasion d'observer les phénomènes 
de l'envenimation chez. l'homme, à la suite des morsures de 
cobras, mais ils ont été décrits maintes fois par les médecins 
anglais et français de l'Inde et par les missionnaires. 

La piqûre du serpent n'est pas très douloureuse, paraît-il; 
elle est surtout caractérisée par l'engourdissement qui survient 
dans la partie mor due, se propage rapidement dans tout le corps 
et produit des syncopes, des défaillances; la bouche se contracte, 
devient baveuse, la langue se gonfle, les dents se resserrent, 
puis le malheureux blessé tombe dans le coma le plus profond 
et expire en quelques heures'. 

La morsure du cobra n'est pas toujours mortelle. Les statis- 
tiques donnent des chiffres très variables à cet égard. D'après 
celles de Fayrer et de Desaint, la léthalité moyenne des indi- 
vidus mordus serait de 25 à 35 0[Û: d'après Huillet, elle attein- 

1. C. Desaint, missionnaire de l'Inde, Manuel de médecine, Coiapiègno: 1870, et 
Sir J. FAYRERy Thaïiatophidia indica. 


ÉTUDE EXPÉRIMENTALE. 165 

drait 45 0/0. Le pronostic dépend évidemment surtout de la 
quantité de venin inoculée et de sa plus ou moins grande viru- 
lence, suivant que le serpent qui l'a fourni était à l'état déjeune 
ou venait de mordre une proie. 

S'il est introduit dans une région très vasculaire, ou directe- 
ment dans une veine, il tue presque fatalement. Au contraire, 
si le derme est à peine entamé, ou si les vêtements ont pu exercer 
une action protectrice, l'absorjition du venin deviendra presque 
nulle. On se retrouve ici en présence des mêmes facteurs de 
gravité que pour les morsures faites à l'homme par des animaux 
atteints de rage. 

L'expérience permet d'éliminer tous ces facteurs, de suivre 
che.-^ un animal inoculé toute la série des phénomènes de l'enve- 
nimation et d'en graduer l'intensité. Nous avons étudié à ce 
point de vue toutes les espèces d'animaux qu'il est possible 
d'utiliser dans un laboratoire. Seuls le cobra, et un autre serpent 
colubriforme non venimeux que nous avons pu nous procurer, se 
sont montrés réfractaires à l'envenimation. 

Les mammifères, singes, chiens, lapins, cobayes et rats 
succombent plus ou moins rapidement suivant la dose inoculée. 
Il est impossible de calculer avec quelque précision la dose 
mortelle pour chaque animal : elle est impondérable, puisque 
une seule goutte de la macération de huit glandes dans 
300 grammes d'eau distillée, introduite dans la veine de l'oreille 
d'un lapin, le lue en cinq minutes! 

Toutefois, par l'inoculation sous-dermique d'ime petite quan- 
tité de venin glycérine à l'avant-bras d'un singe de moyenne 
taille par exemple, on peut étudier les troubles morbides qui se 
succèdent alors assez lentement. 

Le premier signe apparent de l'absorption du poison est une 
sorte de lassitude générale, puis les paupières se ferment à demi ; 
l'animal semble chercher un endroit favorable pour se reposer; 
il se relève aussitôt, marche avec des saccades; ses membres 
ont de la peine à le supporter. Bientôt, il est pris de nausées, de 
vomissements et d'anxiété respiratoire; il appuie sa tête sur le 
sol, la redresse en cherchant à aspirer l'air, porte ses mains à 
sa bouche, comme pour arracher un corps étranger du 
pharynx. Il vacille sur ses membres et se couche sur le côté, la 
face contre le sol. Le ptosis s'accentue et l'asphyxie coaiplète 


166 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

survient bientôt. Le cœur continue à battre cinq minutes au 
moins après que la respiration a cessé, puis il s'arrête en 
diastole. 

La rig'idité cadavérique survient très rapidement et persiste 
long-temps même après le début de la putréfaction. Pendant les 
derniers moments de la vie, la pupille reste très impressionnable ; 
l'animal conserve intacte la sensibilité à la douleur et l'ouïe. 
L'excitabilité électrique des muscles delà face persiste, mais 
celle des membres et des muscles du tronc est presque totale- 
ment abolie. L'application de courants volta-faradiques de la 
nuque au diaphragme ne provoque aucun mouvement respira- 
toire lorsque l'asphyxie commence à se manifester. Les sphinc- 
ters de la vessie et de l'anus se relâchent après quelques spasmes 
qui provoquent fréquemment, chez les mâles, l'éjaculation du 
sperme. L'urine et les fèces s'échappent ensuite. 

Les oiseaux présentent à peu près la même succession de 
phénomènes, mais, chez eux, la période asphyxique est beaucoup 
plus longue, probablement à cause des réserves d'air accumu- 
lées dans leurs sacs aériens et leurs canaux osseux. Ils bâillent 
comme des pigeons qu'on étouffe, reposent la pointe de leur bec 
sur le plancher des cages, et ont fréquemment des spasmes 
convulsifs du pharynx accompagnés de battements d'ailes. 

Les petits oiseaux et même les pigeons meurent très rapide- 
ment sous l'influence de doses inflnitésimales de venin. La 
poule est plus résistante. 

Les grenouilles, grâce àleurrespiration cutanée, succombent 
très lentement. Nous en avons vu survivre pendant trente heures 
à l'inoculation de la quantité de venin qui tue le lapin par injec- 
tion sous-cutanée en dix minutes. Le crapaud meurt plus vite. 
Les lézards et les caméléons sont très sensibles au venin. 

Les poissons ne sont pas réfractaires à son action : nous 
avons expérimenté sur deux spécimens de ces poissons de combat 
que les Annamites élèvent dans des aquariums pour assister à 
leurs luttes et engager sur elles des paris. Ils ont succombé 
S heures seulement après l'inoculation intramusculaire d'une 
dose mortelle pour le pigeon en 20 minutes. 

Les invertébrés eux-mêmes, — du moins les sangsues, — 
sont tués par rinoculation d'une très minime quantité de 
venin. 


ÉTUDE EXPÉRIMENTALE. 167 

Le serpent semble donc la seule espèce animale réfractaire: 
Fontana, Weir Mitchell et Yiaud Grand-Marais avaient déjà 
constaté le même fait pour les vipériens elles crotales. Nous 
avons inoculé impunément une dose considérable de venin pur 
g-lycériné (G gouttes) sous la peau d'un petit serpent colubriforme 
non venimeux, long- de 35 centimètres et de la grosseur du 
doigt auriculaire. 

Nous avons aussi injecté à un cobra environ 10 gouttes du 
même venin pur glycérine, à l'aide d'une canule de seringue 
hypodermique soudée à un tube de verre. L'aiguille, enfoncée 
dans la chair du serpent, y est resiée à demeure. L'animal n'a 
paru nullement incommodé. 

Je ne veux pas prétendre expliquer les divers phénomènes 
de l'envenimalion par des théories basées sur la physiologie 
pathologique des centres nerveux, mais il est bien évident que 
l'action toxique du venin se manifeste par des phénomènes bul- 
baires. Le ptosis, symptôme do début, surtout apparent chez le 
singe, indique l'atteinte de la substance g^rise du plancher du 
4e ventricule et des noyaux d'orig^ine des nerfs moteurs oculaires 
communs. La paralysie bulbaire progresse ensuite rapidement, 
et, lorsqu'elle a frappé les noyaux d'origine des nerfs pneunio- 
g-astriques, l'animal meurt en état d'asphyxie. 

Le venin est charrié jusqu'au bulbe par le sang. Les nerfs 
périphériques ne semblent pas gênés par son contact immédiat. 
Si, après avoir dénudé le nerf sciatique d'une grenouille, on 
dépose sur ce nerf, isolé des tissus environnants, une goulle de 
venin pur glycérine, l'animal ne manifeste aucune douleur; le 
nerf n'en conserve pas moins son irritabilité, ainsi qu'il est facile 
de s'en assurer en le touchant avec une aiguille. 

Nous avons sectionné la moelle épinière de deux g-renouilles 
au-dessous du bulbe, et nous les avons inoculées à la cuisse, en 
même temps qu'une troisième grenouille témoin, avec O'^'',2o de 
venin dialyse. L'une des premières et la grenouille témoin sont 
mortes au bout de 26 heures. La troisième, plus vigoureuse, a 
vécu 30 heures. 

Si, mettant à nu les deux sacs pulmonaires d'une grenouille, 
on dépose à la surface de l'un une goutte de venin pur, on voit 
immédiatement la coloration du réseau capillaire des alvéoles 


168 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

devenir rouge foncé, et, au bout d'un très court instant, le sac 
s'affaisse sur lui-même comme une vessie qui se vide, tandis que 
l'autre reste dilaté. 

Le venin porté directement à l'aide d'une pipette capillaire 
dans le tissu musculaire ou dans les cavités du cœur, ne modifie 
pas la régularité des contractions de cet organe, jusqu'à ce que 
l'intoxication bulbo-médullaire ait eu le temps de se produire. 

Mélangé au sang, il n'altère ni la forme ni la couleurdes glo- 
bules, jusqu'après la mort de l'animal. Je n'ai pas vu dans les 
globules ces petits corps ovoïdes, brillants, qu'a signalés 
Lacerda. J'ai examiné des préparations de sang frais de pigeon 
avant et pendant Tenvenimalion, sans pouvoir saisir, sous le 
microscope, le moindre changement dans les hématies. 

Après l'arrêt du cœur, la coagulation survient très vite ; 
tout le sang contenu dans les cavités se prend en masse homo- 
gène offrant l'aspect de la gelée de cassis, 

La rapidité d'absorption du venin chez les animaux inoculés 
est incroyable, même lorsqu'il est simplement déposé sous la 
peau. Nous avons fait plusieurs expériences sur des rats dans le 
but de la mesurer, mais sans pouvoir y parvenir avec précision : 

Exp. L — Un rat (no 4) est inoculé au dernier tiers de la queue avec une 
goutte de venin pur glycérine, au moyen d'une pipette de verre effilée. 
Cinq minutes après, on lui coupe la queue au premier tiers. L'animal suc- 
combe au bout d'une heure. 

Un rat n" 2, témoin, inoculé avec la même dose de venin et auquel la 
queue n'a pas été sectionnée, meurt en 40 minutes. 

Exp. II. — Un rat n» 3 est inoculé au dernier tiers de la queue avec 
une goutte de venin pur. Une minutii après, la queue est sectionnée au tiers 
supérieur. Mort au bout de quatre heures vingt minutes. 

Le venin est donc très diffusible : c'est ce qui explique l'inef- 
ficacité presque absolue des traitements locaux les plus énergi- 
ques des morsures des serpents. Ni les larges incisions, ni la 
cautérisation au fer rouge, ni les injections de permanganate de 
potasse, ni la ligature du membre mordu ne suffisent à enrayer 
l'absorption du poison : tout au [tins ces moyens la retardent-ils 
un peu. C'est déjà un résultat utile, il est vrai, car il pourra 
permettre d'intervenir à temps pour neutraliser le venin déjà 
entré dans la circulation générale. 


ÉTUDE EXPÉRLMENTALE. 169 


VOIKS 1) INTRODUCTION DU VENIN. 

Les différentes voies par lesquelles le venin peut être intro- 
duit dans l'organisme des animaux ne sont pas toutes également 
propices à son absorption. La plus dangereuse est Y intraveineuse. 

On peut tuer un lapin adulte en moins de cinq minutes en 
lui introduisant, dans la veine marginale de l'oreille, une seule 
goutte de la préparation glycérinéé dont nous avons fait usage. 

L'inoculation sous-ciUanre, sauf pour les petits animaux, ne 
lue pas toujours à cette dose, mais deux gouttes font succomber 
sûrement les lapins et les poules, dans un délai maximum de 
huit heures. 

Les séreuses absorbent lentement le venin : l'inoculation 
intrapéritonéale produit beaucoup plus tardivement l'envenima- 
tion à quantité égale de substance toxique. Nous possédons 
même un cobaye qui a résisté à l'inoculation d'un dixième de 
centimètre cube de venin dialyse dans le péritoine, alors que 
son témoin, inoculé sous la peau, mourut en trois heures. 

Le foie nous paraît susceptible d'arrêter le venin dans une 
certaine proportion, comme il arrête une partie des alcaloïdes 
végétaux toxiques qui le traversent. 

Nous avons fait, à cet égard, l'expérience suivante : 

Exp. III. — Le 13 nove-mbre, un lapin adulte pesant 2 k. 100 est laparo- 
tomisé à 9 h. 10 du malin. On lui injecte, dans la veine niésaraïque, 4 gouttes 
de venin dialjsé pur, et l'abdomen est ensuite suturé avec les précautions 
antiseptiques d'usage. 

Pendant toute la journée, l'animal est resté couché sur le flanc, ne 
mangeant pas. Le lendemain matin, il était debout, et la guérison de sa 
plaie abdominale s'est parfaitement opérée sans autre incident. 

Sur la muqueuse conjonctivale, le venin amène une inflamma- 
tion très intense, comparable à celle du jequirity. Toutefois, 
cette propriété irritative se perd lorsqu'on chauffe le venin à 90", 
et pourtant sa puissance toxique est à peine amoindrie. 

Exp. IV. — Un lapin adulte reçoit le 6 novembre sur la conjonctive de 
l'œil droit, sans lésion préalable, I goutte de venin pur glycérine. Cinq 
minutes après, l'oeil est tout œdématié, rouge, larmoyant. Le lendemain, 
la conjonctive est vivement enflammée; il s'est formé des petites ulcératio)is 


170 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

phlycténulaires sur la cornée, et l'humeur aqueuse delà chambre antérieure 
est devenue trouble. 

La guérison spontanée s'est effectuée en dix jours, mais la cornée reste 
opaque et dépolie. Pas d'accidents ultérieurs. 

Ëxp. V. — Un lapin adulte reçoit le '1 1 novembre, sur la cornée de l'œil 
droit, 4 gouttes de venin chauffé à + 90". Pas d'intlammalion. Trois gouttes 
de ce venin, injectées sous la peau, tuent pourtant un pigeon en S5 minutes. 

L'inoculation dans la trachée est moricUe. 

Dans ï intestin, par la voie rectale, le venin n'exerce aucune 
action irritative : nous avons injecté dans le gros intestin d'un 
cobaye mâle, à l'aide d'une sonde, jusqu'à 5'^'^ de venin dialyse, 
pur, sans produire le moindre accident. 

Vingestion n'offre également aucun danger réel, à moins 
qu'il n'existe une lésion de la muqueuse pharyng-ienne ou gas- 
trique. Fayrer a soutenu une thèse opposée : il prétend que la 
succion des morsures de cobra offre des dangers. Nos expé- 
riences contredisent cette assertion : 

Exp. VI. — Un cobaye adulte mâle a ingéré biquotidiennement, du 6 au 
14 novembre, des doses croissantes de venin pur glycérine, en commen- 
çant par 5 gouttes le matin et autant le soir. Le 13 novembre ce cobaye a 
ingéré 26 gouttes de venin dans sa journée, sans accident. 

Il a succombé le 14 à une injection hypodermique de 0^''^,25 de venin 
dialyse, faite dans le but de constater si le traitement par ingestion avait 
produit l'immunité. 

Exp. VII. — Une poule adulte a ingéré, du 6 au 14 novembre, des doses 
progressives et biquotidiennes de 2 à 12 gouttes de venin pur glycérine, sans 
accident. 

Exp. VIII. — Deux pigeons ont ingéré, à partir du G novembre, des doses 
progressives et biquotidiennes de 2 à 8 gouttes de venin pur glycérine. L'un 
des pigeons a succombé le 7. Le second continue jusqu'au 9 son traitement, 
sans accident ultérieur. 11 est probable qu'une petite quantité de venin, 
chez le pigeon qui a succombé, a pénétré dans la trachée pendant l'ingestion. 

Exp. IX. — L'inoculation de deux gouttes de venin, pratiquée dans la 
cliambre antérieure de l'œil d'un lapin, a provoqué immédiatement une 
inflammation très intense, et l'animal a succombé au bout de cinq heures. 

Exp. X. — Un autre lapin, inoculé par trépanation, sous la dure-mère, 
avec la même dose, est mort en une heure quarante minutes. 

Ainsi, nous pouvons conclure de ces expériences que le 
venin mis en contact avec les muqueuses saines, sauf la mu- 
queuse trachéo-bronchique, ne produit pas d'accidents mortels ; 


ÉTUDE EXPÉRIMENTALE. 171 

qu'il s'absorbe plus lentement par le réseau lymphatique des 
séreuses que par les vaisseaux capillaires sous-cutanés, et qu'il 
peut-être arrêté en partie par la glande hépatique. 

DE L\ .\ON-TRANSMISSIBlLITK DE l'eNVENIMATION PAR LE SANG. 

Lacerda au Brésil et Fayrer aux Indes disent avoir constaté 
que le sang- d'un animal tué p.irle venin est lui-même venimeux, 
et que, si on l'injecte à un autre animal, il produit rapidement 
les mêmes etfets. Fayrer aurait ainsi transmis le venin à une 
série de trois animaux avec un résultat fatal. 

]ci encore les résultats de nos expériences sont en contradic- 
tion formelle avec les faits annoncés par ces médecins. Nous les 
avons contrôlés plusieurs fois avec le plus grand soin. Nous 
n'avons jamais pu réussir à tuer un animal par l'inoculation, 
même à haute dose, du sang ou de l'émulsion des organes 
d'un animal de même espèce ou d'espèce différente, tué par le 
venin de cobra. M. Yiaud Grand-Marais a toujours obtenu le 
même résultat négatif par l'inoculation du sang d'animaux 
tnorts d'empoisonnement par les vipères. Pour lui, le venin se 
détruit dans le sang- en modifiant sa composition chimique. 

L'erreur de Lacerda et de Fayrer doit tenir à ce que ces 
auteurs ont peut-être expérimenté avec du sang sortant de la 
plaie venimeuse. 

Exp. XI. — Un pigeon reçoit sous la peau du thorax !'■« du sang du cœur 
d'un lapin qui vient d'expirer à la suite de l'inoculation de 3 gouttes de 
venin dialyse, dans la veine de l'oreille. Il n'éprouve aucun symptôme de 
malaise. 

Exp. XII. — Un pigeon reçoit sous la peau U'^ du sang du cœur d'un pigeon 
tué par 3 gouttes de venin pur glycérine. Ré.'îisle, sans malaise apparent. 

Exp. XIII. — Un rat reçoit sous la peau 4''« du sang recueilli dans le cœur 
d'un autre rat inoculé avec 3 gouttes de venin glycérine pur. Ce sang a été 
aspiré dans le ventricule droit avant que le cœur ait ce^sé de battre. Résiste. 

Exp. XIV. — Un cobaye reçoit dans le péritoine toute la rate (triturée 
dans de l'eau stérilisée) d'un rat tué par six gouttes de venin glycérine. 
Résiste. 

Exp. XV. — Un cobaye reçoit, dans le péritoine, tout le foie trituré du 
même rat. Résiste. 

Exp. XVI. — Un lapin reçoit sous la peau lO'-'- d'une émulsion du cer- 
veau et du bulbe d'un lapin tué par l'inoculation de 3 gouttes de venin pur 
glycérine. Pas d'accident. 


il2 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


PROPRIETES PHYSICO-CHIMIQUES LU VENIN. 

Le venin du cobra est parfaitement neutre au papier de tour- 
nesol. Il se dissout très facilement dans l'eau et dans Talcool 
étendu. 

L'alcool fort, l'éther, l'ammoniaque, le tannin et Fiode le 
précipitent, mais le précipité formé se redissout dans l'eau. 
Ses réactions chimiques sont identiques à celles des échidnines 
étudiées par Weir Mitchell : il est donc superflu d'en répéter la 
description. 

Nous avons observé qu'il n'adhère pas aux précipités de 
phosphate de chaux, contrairement à ce qui se produit pour les 
toxines de la diphtérie et du tétanos. On peut insérer, sous la 
peau d'un pigeon, une quantité considérable de ce précipité 
lavé, puis desséché, sans développer le moindre accident. 

Traité par le chlorure de sodium à 10 0/0, puis parla solution 
saturée de sulfate de soude, le venin ne forme aucun précipité 
ap])arent. Jeté sur le dialyseur, il se débarrasse du chlorure de 
sodium et du sulfate de soude, puis dialyse lui-même, mais fai- 
blement. Pour produire l'envenimation avec le liquide dialyse 
après douze heures, il faut en injecter 1" au pigeon. Au con- 
traire, le liquide albumineux resté sur la membrane tue cet 
animal à la dose de trois à cinq gouttes, mais plus lentement 
qu'avec la même quantité de solution aqueuse pure filtrée au 
filtre 'Chamberland. 

L'action de la chaleur fait perdre beaucoup plus difficilement 
ses propriétés virulentes au venin de cobra qu'aux toxines micro- 
biennes ou qu'aux diastases en général. On peut le chauffnr 
impunément jusqu'à -f 90° pendant une heure sans lui faire 
perdre son activité. Les effets sont seulement un peu plus 
tardifs. 

Un chauffage d'une demi-heure à -|- 97" au bain-marie laisse 
encore subsister la virulence, mais si la température monte à 
-}- 98° pendant au moins dix minutes, celle-ci est détruite. 

Nous avons injecté, dans la veine de l'oreille d'un lapin, 
gcc jg venin dialyse, chautfé une demi-heure à -f- 98°, sans pro- 
duire d'autre accident qu'un peu de somnolence et de dyspnée 
passagère. 


KTUDE EXPERIMENTALE. 173 

Donc la viraleiice du venin est déLniile exactement entre 
4- 97 et -j- 98", et ne résiste pas à une ébullition prolongée, 
comme l'ont écrit quelques auteurs. 

Nous avons chauffé du venin à l'autoclave à -|- 100° et à 
-f- 120° pendant 1 4 d'heure, et jamais l'injection de ces liquides 
chauffés n'a développé le moindre symptôme d'envenimation 
chez les animaux, même à doses très élevées et répétées deux 
fois par jour pendant une semaine. 

Le chauffage régulier à l'éluve à -|- 38°, prolongé pendant 
15 jours, n'altère j)as la virulence. Au contraire, l'exposition à la 
lumière solaire, en tubes clos, privés d'air, la détruit assez rapi- 
dement : deux pigeons inoculés chacun dans le muscle pectoral 
avec Icc d"abord, puis avec 2''' de venin dialyse, exposé pendant 
deux semaines au soleil, ont résisté, alors que les pigeons 
témoins, inoculés avec 14 de centimètre cube du même venin 
conservé à l'obscurité, succombaient eu 15 minutes. 


ACTION DES ANTISEPTIQUES ET DE DIVERSES SUBSTANCES CHIMIQUES. 

Nous avons borné nos recherches à l'essai des substances 
qu'il est possible d'introduire sous la peau des animaux sans 
développer des lésions ou des accidents de toxicité. Toutes nos 
expériences ont été dirigées d'une manière uniforme : 

1° Nous avons mélangé d'avance une dose mortelle de venin 
avec la substance à essayer, puis nous avons injecté ce mélange 
à des animaux; 

2'' Nous avons ensuite inoculé le venin pur aux animaux, 
puis, autour de la plaie d'inoculation, la substance à essayer. 

L'acide phénique, le bichlorure de mercure au j-^ ^n solu- 
tion acide, le sulfate de cuivre, l'eau naphtolée, le nitrate d'ar- 
gent à 1 0/0 ne détruisent pas la virulence du venin et ne retardent 
même pas l'apparition des symptômes d'envenimation, lorsque 
ces antiseptiques sont injectés sous la peau en même temps que 
le venin. 

11 en est de même du chlorure de sodium, du carbonate et du 
sulfate de soude, de l'iodure de potassium, de l'iode, de l'alcool, 
du chloroforme et de l'éther. 


174 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

Nous n'avons pas été plus heureux avec les essences de san- 
tal, de romarin, de girofle, de citron. 

L'ammoniaque, même dans la proportion de 1 gramme pour 
1 goutte de venin glycérine, nous a donné un résultai absolu- 
ment négatif. Beaucoup de ces corps, particulièrement l'iode, 
l'ammoniaque, les essences, l'éttier, l'alcool, le chloroforme, le 
sulfate de cuivre, le nitrate d'argent et le bichlorure de mercure, 
forment avec le venin des précipités, mais ceux-ci sont solubles 
dans l'eau ou dans un excès de réactif, et aussi virulents que le 
venin pur. 

Le permanganate de potasse., actuellement considéré comme le 
meilleur neutralisant du venin d'ophidiens, depuis les travaux de 
Lacerda, forme avec le venin du naja un coagulum albumineux, 
noir, insoluble dans l'eau. Avec le même venin chauffé à -|-80* 
et dépouillé de son albumine par tillration, le précipité prend un 
aspect poussiéreux, brunâtre. 

Nous l'avons expérimenté sur des pigeons, des poules, des 
lapins, des cobayes et des rats, en faisant usage d'une solution 
au centième stérilisée. 

Les animaux auxquels nous avons injecté une partie de venin 
mélangée préalablement avec dix parties de la solution de per- 
manganate au centième ont tous résisté, alors que les témoins 
inoculés avec les mêmes quantités de venin pur sont tous 
morts. 

Si l'on pratique, à un animal un peu résistant, comme le lapin 
ou la poule, une injection intra-musculaire de venin à dose 
mortelle, et aussitôt après une injection de permanganate de 
potasse dans le trajet même de la première inoculation, l'animal no 
succombe presque jamais. 

Cependant si l'on tarde, ne fût-ce qu'un très court instant, 
à porter le permanganate dans le trou où se trouve déposé le 
venin, l'envenimation se produit. Les petits animaux, chez 
lesquels l'absorption est presque immédiate, succombent toujours 
malgré le permanganate. 

Exp. XVII. — Pigeon adulte reçoit le 3 novembre, en injection dans 
le pectoral, 2 gouttes de venin pur glycérine, mélangé avec I'''' de per- 
manganate de potasse à 1 0/0. Résiste. 

Le 8, il succombe à l'inoculation de 5 gouttes de venin chauffé à 97°. 

Exp. XVIII. — Poule adulte reçoit sous la peau, le 5 novembre. 


ÉTUDE EXPERIMENTALE. 175 

5 gouttes (le venin glycérine dilué dans i'-o de permanganate do potasse à 
1 0/0. Résiste. 

Le 10, elle succombe àrinoculation de l'aède venin dialyse, chaufîé à +97°. 

Exp. XIX. — Lapin adulte reçoit sous la peau, le 5 novembre, 4 gouttes 
de venin glycérine, mélangées à 2'^'' de permanganate à 1 0/0. Même ino- 
culation répétée le matin et soir, et le 7 au matin. Succombe le 10 à l'inocu- 
lation de Ici- de venin chauffé à + 97°, sans injection consécutive de per- 
manganate. 

Exp. X\. — Lapin adulte reçoit sous la peau, le 3 novembre, 0'^'^,^ 
de venin dialyse et, aussitôt, au même point, S^"*^ [fi de solution de per- 
manganate à 1 0/0. Résiste. 

Exp. XXI. — Un rat reçoit sous la peau da ventre 2 gouttes de venin 
glycérine, et aussitôt, au même point, Ice de permanganate de potasse. 
Le rat succombe au bout d'une heure et demie. 

Exp. XXII. — Une poule adulte reçoit, dans le muscle pectoral droit, 
5 gouttes de venin glycérine pur, et, aussitôt, dans le pectoral gaache, Icc de 
permanganate à 1 0/0. Succombe 1 h. 33 après l'inoculation. 

Les lapins supportent très bien Tinjection intraveineuse 
de 2<=*' de la solution de permanganate à 1 0/0, mais cette injection, 
suivant immédiatement l'inoculation du venin sous la peau, ne 
les empêche pas de succomber : 

Exp. XXIII. — Lapin adulte reçoit sous la peau 5 gouttes de venin glycé- 
rine et, aussitôt après, en injection intraveineuse, 2»^- de la solution à 
I 0/0 de permanganate. Mort 4 > minutes après l'inoculation. 

Un lapin témoin reçoit en injection intraveineuse 2^''^ de la solution de 
permanganate, sans venin. 

Résiste après une courte période de tremblements et d'agitation. 

Nous avons fait deux autres expériences qui démontrent 
l'impuissance du permang-anate à neutraliser le venin lorsque 
celui-ci a déjà imprégné les tissus voisins du point d'inoculation : 

Exp. .XXIV. — Le 10 novembre à 8 h. oO matin, un lapin adulte reçoit 
à la patte postérieure droite 2 gouttes de venin glycérine sous la peau, à 
l'aide d'une pipette, et sans qu'il se produise la moindre effusion de sang. 

A o centimètres au-dessus du point d'inoculation, on place aussitôt une 
ligature élastique bien serrée. 

Dix minutes aprèfj, on injecte, dans la profondeur des tissus, au point 
d'inoculation et tout autour, 2cn de solution de permanganate de potasse à 

I 0/0. Le lien constricteur est enlevé une heure après. Gonflement considé- 
rable de la patte. Le lendemain, toute la journée, l'animal paraît malade. 

II ne mange pas. Mort le 12, après-midi. 

Exp. XXV. — Le 12 novembre, à 8 heures de matin, un lapin adulte reçoit, 


176 ANNALES DE L'INSTITUÏ PASTEUR. 

dans une petite plaie saignante faite au ciseau, à la patte droite posté- 
rieure, 2 gouttes de venin glycérine. 

Ligature élastique immédiate à 5 centimètres au-dessus du point d'ino- 
culation. Dix minutes après, injections interstitielles de 2'-'^ de permanga- 
nate au 1 0/0 tout autour de la petite plaie et au-dessus, mais non dans la 
plaie. Mort à 9 h. -40, soit moins de 2 heures après l'inoculation. 

c. 

Le permanganate resle donc inaclif lorsque le venin a 
pénétré dans les tissus. Mais il en arrête l'eflet lorsqu'il est 
injecté dans la plaie en même temps ou aussitôt après l'inocula- 
tion venimeuse : il peut alors en empêcher l'effet. 


NEUTRALISATION DU VENIN ET TRAITEMENT DES 3I0RSURES VENIMEUSES 
PAR LES INJECTIONS INTERSTITIELLES DE SOLUTION DE CHLORURE d'oR 
PUR A 1 0/0. 

La plupart des alcaloïdes physiologiques des tissus animaux 
possédant la propriété déformer avec le chlorure de platine elle 
chlorure d'or des sels cristallisables, nous avons voulu étudier 
l'action de ces corps sur le venin. Le chlorure de platine en 
solution au centième produit un précipité gélatineux blanc qui, 
introduit sous la peau, est très vite absorbé et tue l'animal aussi 
promptement que le venin pur. 

Le chlorure d'or, au contraire, donne un précipité d'aspect 
semblable mais insoluble. Le mélange de celte substance, même 
en proportion très faible, avec le venin, enlève à celui-ci toute 
sa toxicité : il se produit là une réaction comparable à celle de 
l'albumine d'œuf en présence des sels mercuriques. On peut 
en injecter des quantités considérables sous la peau, dans les 
muscles ou dans les cavités séreuses comme le péritoine, sans 
que le moindre accident apparaisse. 

Les tissus fraîchement imprégnés d'une solution faible de 
chlorure d'or sont rendus incapables d'absorber le venin. 

Exp. XXVI. — Un pigeon adulte l'cçoit dans le muscle pectoral trois 
gouttes de venin glycérine diluées dans i^f^ de solution de chlorure d'or 
au 4/500. Résiste. 

Un pigeon témoin succombe en o minutes avec la même dose de 
venin pur. 

Exp. XXVII. — Une poule reçoit 4 gouttes de venin glycérine diluées 
dans 1" de solution de chlorure d'or à 1,500. Résiste. 


ÉTUDE EXPEIIIMENTALE. 177 

Une poule Irmoiii suceoiiihe l h. 10 après l'injection. 

Exp. XXVill. — l'n pigeon reçoit sous la peau et dans le pectoral 
Oci;,5 de venin dialyse mélangé à l''c 1/2 de solution d'or à 1/100. Hésiste. 

Exp. XXIX. — lu lapin adulte pesant l's840 reçoit sous la peau O'"^, 25 de 
venin dialyse et, immédiatement après, en injection intraveineuse, 2e<: de 
solution de chlorure d'or à 1/500. Résiste. 

Un lapin témoin qui a reçu la même quantité de venin et pas de chlorure 
d'or meurt 3 heures 1/2 après l'inoculation. 

La même expérience est renouvelée sur un autre lapin avec O'',o de 
venin dialyse sous la peau du ventre et 2''<~,o de solution d'or à 1/500 en 
injection intraveineuse. 

Ce lapin a succombé seulement au bout de cinq heures. 

Exp. XXX. — Lapin adulte reçoit sous la peau 4 gouttes de venin dialyse, 
le 14 novembre, et aussitôt après 2'^'^ de solution d'or à 1/50C en injection 
intraveineuse. Résiste. 

Le 15 au soir, nouvelle inoculation sous-cutanée de 0cc,25 du même 
venin, et, aussitôt après, injection sous-cutanée de 2'^'^ de solution d'or. 
L'animal reste bien portant à la date du 5 décembre. 

Exp. XXX[. — Pigeon adulte reçoit, dans le muscle pectoral, 0''<^,25 de 
venin dialyse, et aussitôt après, tout autour du point inoculé, une injection 
de 2*^° de chlorure d'or à 1/500. Mort une heure après. 

Exp. XXXII. — Un cobaye reçoit sous la peau 0'^''^,25 de venin dialyse, et 
autour de la piqûre 3i^'- de lasolulion d'or à 1/100. Résiste. 

Exp. XXXlll. — Lapin adulte reçoit 0<=^,75 de venin dialyse sous la peau du 
ventre, et tout autour, une injection sous-cutanée de Se»; de solution d'or 
à dlOO. Résiste. In lapin témoin, inoculé avec la même dose de venin, 
meurt au bout de 55 minutes. 

Exp. XXXI V. — Poule reçoit 0l-';.25 de venin dialyse en injection intramus- 
culaire, et aussitôt après, tout autour, B*"^ de solution d'or à 1/1 00. Résiste. 

Exp. XXXV. — Lapin reçoit sous la peau 0'^':,75 de venin dialyse et 
aussitôt après, en injections multiples, 5^c de solution d'or à 1/100. Résiste. 

Exp. XXXVl. — Poule inoculée dans la cuisse droite avec 5 gouttes de 
venin glycérine, et, un peu plus haut, puis dans le muscle pectoral, elle 
reçoit 5'-''^ de solution de chlorure d'or pur à 1/100. Résiste. Une poule témoin 
meurt au bout de 1 h. 25. 

Exp. X.XXVII. — Deux lapins reçoivent sous la peau de la patte posté- 
rieure droite, 5 gouttes de venin glycérine, et aussitôt après, à la racine du 
membre et dans le tissu cellulaire du cou, sans ligature préalable, b<^'^ de 
solution d'or à l/lOO. Résistent tous deux. Un lapin témoin meurt 1 h. 45 
après l'inoculation. 

Exp. XXXVIII. — Un lapin pesant 1^,870, traité du 4 au 18 novembre 
par des injections à doses progressivement croissantes de venins chaufîés, 
puis virulents, reçoit le 18 novembre sous la peau, O^^'^,!^ de venin diahsé 
pur, el aussitôt après, tout autour de cette injection, 5'''; de solution d'or 
k l/lOO. Pas d'accident. Le lapin est encore en bonne santé le 5 décembre. 
Un autre lapin, pesant li^.SSO, traité du 14 au 17 novembre par les mêmes 
injections de venins chauffés et virulents, a reçu le 17, 0*^'=,25 seulement du 

12 


178 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

même venin dialyse pur, sans chlorure d'or ensuite. Il a succombé deux heures 
après. 

Exp. XXXIX. — Ciiien adulte de petite race à poils longs (poids 3^,200), 
reçoit le 21 novembre, à 3 h. 15, sous le ventre, en injection hypodermique, 
Ici'jS de venin dialyse pur, et aussitôt après, dans la partie supérieure du 
cou et du thorax, 9'^'^ de la solution d'or à 1/100. Résiste. Est encore en 
bonne santé le 5 décembre. Un chien témoin un peu plus gros, à poils ras, 
pesant S'^, a reçu en même temps U"'^,5 du même venin sans chlorure d'or. 
Il a succombé à 5 h. 1/2 du soir. 

Exp. XL. — Poule reçoit le 14novembre, à3heures du soir, en4injections, 
2i--e de solution d'or à 1/500 sous la peau et dans le muscle pectoral. Le 15, 
à 9 heures du matin. O'^'CjâS de venin dialyse et, aussitôt après, 2i-i; de la même 
solution d'or autour du point d'inoculation. Le 15 au soir, la poule est très 
malade. Bâillements continuels, somnolence. Nouvelle injection intramus- 
culaire de 2'-L- chlorure d'or à 1/500. Le 16 au matin, la poule va mieux ; elle 
mange et commence à se tenir debout sur ses pattes. Ckiérison complète. 

Exp. XLI. — Cobaye adulte mâle reçoit, à 3 heures du soir le 14, 2'^c de 
solution d'or à 1/500 dans le péritoine et 1''= sous la peau. Le 16 au malin, 
inoculation sous-cutanée de 0'^'^,25 de venin dialyse et, aussitôt après, 
tout autour, 3'^'^ de solution d'or à 1/100. Hésisle. 

Exp. XLII. — Pigeon reçoit à 3 heures du soir une injection de 3«c de 
solution d'or à 1/100 dans le muscle pectoral. Le 17 au matin, exactement au 
même point, injection de 0'='^',25 de venin dialyse sans nouvelle dose de 
chlorure d'or, Résiste. Pigeon témoin succombe au bout de 45 minutes. 

Exp. XLIII. — Poule reçoit le 18 novembre une injection intramuscu- 
laire de 3^^' de solution d'or sans venin dans le thorax, à 8 heures du matin. 
Le soir du même jour, injection de 0'«.25 de venin dialyse, dans la cuisse 
droite. Morte le 19 à 10 heures du matin. 

Exp. XLIV. — Pouleadulte reçoit le 16 novembre, dans la matinée, 2'"^ de 
solution d'or dans un des pectoraux; une heure après, 0''i^',125 de venin 
dialyse pur dans l'autre muscle pectoral. 

Le soir, la poule est très niaîade. Impossibilité de tenir sur ses pattes, 
somnolence et perte absolue d'appétit, bâillements. Elle reçoit de nouveau 
2cc de solution d'or à -^. Le 17 au malin, même injection renouvelée, la 
poule étant encore malade. Mieux sensible dans la soirée. Le lendemain, la 
poule est guérie. Elle est encore en bonne santé à la date du 5 décembre. 

Nous avons constaté que pour empêcher ou arrêter l'enveni- 
mation chez les animaux un peu résistants comme le lapin, la 
poule, le singe et le chien, il n'est pas nécessaire d'injecter le 
chlorure d'or dans la plaie par laquelle le venin a été introduit : 
si Ton intervient avant l'apparition des premiers symptômes 
morbides, des injections interstitielles disséminées, à une distance 
même considérable du point d'inoculation, suffisent à préserver 
sûrement l'animal. 


ETUDE EXPÉRIMENTALE. 179 

Ainsi, nous avons inoculé des doses mortelles de venin à des 
lapins sous la peau de la patte postérieure, et à des poules dans 
les muscles delà cuisse, puis nous avons injecté le chlorure d'or 
dans le tissu cellulaire sous-cutané du cou et du thorax chez le 
lapin, ou dans le muscle pectoral chez les poules : ces animaux 
ont résisté. 

De même, nous rapprochant des conditions qui se réalisent 
le plus hahituellement pour l'homme, nous avons appliqué une 
ligature élastique à la racine du memhre envenimé, puis quelques 
mtnutes plus tard, nous avons imprégné de chlorure d'or les 
tissus au-dessus de la ligature, sans toucher à la plaie. L'enveni- 
mation ne s'est pas produite. 

jXous avons varié nos expériences autant que pouvaient le 
permettre les ressources matérielles dont nous disposons, et 
nous avons toujours été conduits à la démonstration de ce fait 
que le chlorure d'or, introduit en suffisante quantité dans les tissus 
d'un animal inoculé avec une dose mortelle de venin de cobra, même 
en dehors du point d'inoculation de ce venin, empêche l'intoxication 
de ranimai, pourvu que l'on intervienne avant que des symptômes 
d'asphyxie bulbaire se soient manifestés . 

Dix gouttes d'une solution à I 100 de chlorure d'or suffisent à 
détruire entièrement l'activité toxique d'une goutte du venin 
glycérine dont nous avons fait usage. 

Mais, comme le chlorure d'or ne possède pasla puissance de 
diffusibilité du venin, il est indispensable d'en introduire la plus 
grande quantité possible dans les tissus. 

L'injection intraveineuse n'est pas pratique : elle est mal 
supportée à cause de la causticité légère du sel d'or même dilué 
au 1/500. Cependant nous possédons un lapin qui a supporté sans 
accident l'introduction, dans la veine marginale de l'oreille, de 
2<:c de solution d'or à 1/SOO. 

L'injection dans les séreuses s'est montrée inofFensive dans 
nos expériences, mais elle peut avoir des inconvénients pour 
l'homme, et puisque l'injection intracellulaire ou intramusculaire 
suffit, nous croyons préférable de la conseiller exclusivement. 

Nous injectons de 5 à lO^'' de solution à 1 0/0 aux lapins, aux 
singes, auxchiens etmême aux poules sans provoquer d'accidents. 
Ces quantités sont très suffisantes pour neutraliser une dose de 
venin mortelle en moins d'une heure. Nous pensons qu'elles 


180 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUK. 

seraient également suffisantes pour l'homme, car un naja ne 
peut guère déverser dans les plaies faites par ses deux crochets, 
plus de 4 à 6 gouttes de venin, et il suffit de 10 milligrammes 
d'or réellement absorbé pour précipiter cette quantité de sub- 
stance toxique. 

Néanmoins, la solution d'or occasionnant tout au plus un peu 
de douleur par suite de sa faible action caustique, on peut en 
introduire dans les tissus des quantités considérables sans incon- 
vénients graves, si elle eslbien stérilisée. Pour éviter la rougeur, 
l'œdème et la formation de plaques escharoliques, il serait avan- 
tageux de multijilier les piqûres, comme nous l'avons fait sur 
nos animaux, et d'injecter seulement une petite quantité de la 
solution dans chacune d'elles. 

Avec cette méthode nous n'avons jamais produit d'abcès ni 
d'inflammation vive. 

Le traitement n'estpas applicable aux petits animaux comme 
les rats, les moineaux; l'absorption du venin est chez eux telle- 
ment rapide que toute intervention est absolument inutile. Il est 
très difficile aussi de préserver les cobayes, et encore davantage 
les pigeons, à moins de leur injecter une grande quantité de 
solution d'or avant l'inoculation venimeuse. 

La solution simple dans l'eau distillée nous a très bien 
réussi. La solution dans l'éther sulfurique, que nous avons 
employée dans l'espoir d'obtenir, grâce à l'éther, une plus rapide 
diffusion du sel d'or dans les tissus, nous a donné des succès et 
des insuccès, ces derniers probablement dus à la sensibilité 
extrême des animaux à l'éther, et, par suite, à l'impossibilité 
de leur injecter une quantité suffisante de sel d'or. 

Chez l'homme, le choix de cet excipient n'offrirait pas les 
mêmes dangers. Nous n'oserions cependant pas en conseiller 
l'emploi, car il est possible que la présence de l'éther gêne la 
précipitation du venin parle sel d'or. 

Exp. XLV. — Lapin atlulte reçoit Oc^^.lS de venin dialyse sous la peau et, 
au bout de quelques minutes, injection de 5*=" de chlorure d'or à ~. Résiste. 

Exp. XLVI. — Singe pesant 2 k. 400 reçoit sous la peau du ventre '1'"= de 
venin dialyse, et, 5 minutes après, 5cc de chlorure d'or en plusieurs injec- 
tions disséminées. Meurt au hout de deux heures. 

Exp. XL vil — Lapin inoculé à la patte droite le 19 novembre, à 9 h. 13 du 
malin, avec 6 gouttes de venin glycérine. La plaie saigne. Ligature élastique 
presque immédiate. 6 minutes après, injection hypodermique de 5'^'^ de soûl- 


ETUDE EXPERIMENTALE. 181 

lion d'or à 1 0,0 dans la patte et sous la peau du ventre. La ligature est 
enlevée 1/2 heure après. Mort à 1 heure du soir. Un lapin témoin, de même 
taille, reçoit à la patte droite, à 9 h. 1/2, 6 gouttes du même venin, sans 
ligature ni chlorure d'or. Mort à 10 h. 15 minutes. 

Exp. XLVIIl. — Cobaye inoculé sous la peau du ventre avec l/2«= de venin 
dialyse. Vingt minutes après, injection sous-cutanée de 5ec de chlorure d'or 
à 1 0/0. Mort au bout de 3 heures seulement. 

Exp. XLIX. — Lapin inoculé à la patte antérieure droite avec 5 gouttes 
de venin glycérine pur. Ligature élastique. Injection, 6 minutes après, de 
0^'c de solution d'or à 1 dans le tissu cellulaire du cou et dans la cuisse 
postérieure droite. Résiste. 

Exp. L. — Singe adulte reçoit sous la peau de la cuisse droite 6 gouttes 
de venin glycérine pur. Pas de ligature. Cinq minutes après, injection hypo- 
dermique de Sec de chlorure d'or dans l'aine, dans la fesse et sous la peau 
du thorax. Résiste. 

Exp. LI. — Cobaye reçoit 5 gouttes de venin glycérine sous la peau du 
ventre. Quelques instants après, 5"'= de solution d'or autour du point d'ino- 
culation. Mort 4 heures après. Un cobaye témoin, inoculé avec la même dose 
de venin, succombe au bout d'une heure et demie. 

Exp. lu. — Poule adulte, traitée du 6 au 14 novembre par des injections 
à dose progressives de venin chauffé, puis virulent. Reçoit le 14 novembre 
au soir, en injection intramusculaire, l/4^c de venin dialyse. Le 15 au matin, 
la poule est trouvée très malade : elle est couchée sur le ventre, somno- 
lente, bâille comme si elle asphyxiait, ne mange pas et repose fréquem- 
ment la pointe de son bec sur le plancher de la cage. On lui injecte sous 
la peau des cuisses et dans les pectoraux 8cc de solution de chlorure 
d'or à 1 0/0; mieux sensible le soir. Elle est toujours couchée, mais ne bâille 
plus et mange volontiers un peu de riz qu'on lui présente. 

Le 16, la poule est tout à fait guérie et debout sur ses pattes. 

Le 17, à 9 h. 20 du matin, nouvelle injection intramusculaire de 1/4^'= du 
même venin dialyse sans chlorure d'or (même dose que le 14). La poule 
meurt à 11 heures. 


TENTATIVES POUR PRODUIRE L IMMUNITE ARTIFICIELLE 
CONTRE l'eNVENIMATION. 

Nous avons essayé dé produire, chez des animaux, l'immunité 
artificielle contre l'envenimation, soit en leur pratiquant des 
inoculations successives de venin ciiauffé, puis de doses crois- 
santes de venin virulent, soit en leur injectant du venin viru- 
lent mélangé à du permanganate de potasse ou à du chlorure 
d'or, soit enfin en leur faisant ingérer, pendant dix jours consé- 
cutifs, des doses progressivement croissantes de venin virulent. 

Aucune de ces tentatives n'a été couronnée de succès. Nous 
avons seulement réussi à produire, par les inoculations succès- 


182 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

sives de venins chauffés, un état de résistance à des doses mor- 
telles pour les animaux non préparés : ce n'est point là une 
immunité, même partielle. Il s'agit plutôt d'une sorte de mithri- 
datisme, d'accoutumance à des doses faibles de poison, compa- 
rable à celle qui s'acquiert par l'usage prolongé de poisons végé- 
taux comme l'opium, ou minéraux comme l'arsenic. 

Exp. LIIL — Un lapin adulte, pesant lk, 880, reçoit en injection sous-cuta- 
née, du 4 au 9 novembre, 20'^^ de venin dialyse chauffé à -\- 120% par doses 
quotidiennes de 4'=''. Le 10, il reçoitS^c du même venin chauffé à. -1- 98° (limite de 
la non-virulence). Le 11, il supporte sans accident l/4i='- de venin à 4-97», dose 
mortelle pour le pigeon. 

Le 12 et le 13, il résiste à deux inoculations successives de 1/4'='' de venin 
chauffé à + 90o, dose mortelle pour la poule. I^e 14 et le 13, il supporte, avec 
unjéger malaise, deux inoculations de l/4c>; de venin dialyse non chauffé. 
Cette dose tue en 4 et 6 heures les lapins non préparés. Le 17, après un jour 
de repos, il reçoit l/2'="^ du même venin non chauffé, et succombe 2 heures 
aprèx. 

Exp. LIV. — La même expérience que ci-dessus est renouvelée sur un 
lapin adulte pesant l'',870. On s'arrête, le 14 novembre, à la dose de 1/4'"= de 
venin dialyse non chauffé. L'animal est encore bien portant à la date du 
5 décembre. 

Une poule et deux cobayes, traités en même temps, ont supporté sans 
malaise apparent la dose de 1/8^= de venin dialyse, mortelle pour les autres 
animaux de même espèce non préparés. Mais l'inoculation de doses plus 
considérables les a fait succomber. 

CONCLUSIONS 

En résumé, l'étude expérimentale que nous avons faite du 
venin de cobra nous conduit à conclure : 

1° Qu'il est possible de guérix' les animaux del'envenimation 
en neutralisant le venin absorbé par le sang à l'aide d'injections 
sous-cutanées de chlorure d'or ; 

2" Que tous les agents chimiques préconisés jusqu'ici contre 
les morsures de serpents venimeux, en particulier l'ammoniaque, 
l'iode, le nitrate d'argent, etc., ne peuvent exercer aucune 
action curative. Le permanganate dépotasse détruit l'activité du 
venin qui reste dans la morsure, mais il est impuissante arrêter 
les effets de celui qui est déjà absorbé. 

Le traitement rationnel des morsures de cobras, et peut-être 
des autres serpents venimeux, devra donc être exclusivement 
basé sur l'application des propriétés du chlorure d'or. 


ÉTUDE EXPÉRIMENTALE. 183 

On devra toujours s'opposer, autant que possible, à l'ab- 
sorption du venin en interrompant la circulation veineuse entre 
la morsure et le cœur, à l'aide d'une ligature élastique. 

On injectera ensuite dans la plaie elle-même ettoutautour, à 
laide d'une seringue à injections hypodermiques, 8 à lO''" d'une 
solution de chlorure d'or à 1 0/0 stérilisée, — mais chaque 
injection ne devra pas dépasser un centimètre cube de liquide, 
pour ne pas exercer d'action caustique trop vive sur les tissus. 

D'autres injections semblables seront praliquéesvers la racine 
du membre, au niveau et en deçà de la ligature élastique. Ces 
injections peuvent être faites dans toutes les parties du corps, 
soit dans le tissu cellulaire sous-cutané, soit dans l'épaisseur 
des muscles. Elles ne produisent pas d'escarres ni d'abcès, si la 
solution d'ordont il est fait usage est titrée à 1 0/0 au maximum, 
stérilisée et conservée dans un flacon de verre jaune ou noir 
pour éviter sa décomposition sous l'influence des rayons solaires. 

La ligature élastique peut être enlevée sans inconvénient 
aussitôt que les injections auront été eirectuées. 

Ce traitement, appliqué à l'homme, donnera vraisemblable- 
ment les mêmes résultats heureux que nous avons obtenus par 
l'expérimentation sur les animaux. Il est aussi probable que son 
elTicacité s'étendra aux morsures de tous les serpents venimeux, 
puisque les diverses échidnines (vipérine, crotaline, najine ou 
élaphine, etc.) ne présentent entre elles que des difl"érences 
légères d'action physiologique, et tous les auteurs qui ont entre- 
pris des recherches sur le venin des ophidiens exotiques sont 
d'accord pour affirmer que celui du cobra est le plus actif. 

Les symptômes d'envenimation par les morsures de certains 
vipéridés comme le Daboia de l'Inde, d'après Fayrer et Wall, 
n'ont cependant pas tout à fait les mêmes caractères que ceux 
produits par les morsures des serpents colubritbrmes (naja, tri- 
gonocéphale, crotale). Le venin des Daboia provoque des convul- 
sions précoces, détruit moins vite la fonction res})iratoire, et 
empêche la coagulabilité du sang- après la mort, tandis que le 
venin des najas ne fait que la modilier. 

Quoi qu'il en soit de ces divergences vraiment peu considé- 
rables, les effets locaux et généraux de tous les venins sont à peu 
près identiques, et ne diffèrent que par l'intensité; ilestrationnel 
de penser que le chlorure d'or devra les neutraliser également. 


QUELQUES FAITS RELATIFS 

A LA 

MÉTHODE DE COLORATION DE LUSTCIARTEN 

Par m. R. SABOURAUD, interne uks hôpitaux de Paris. 

Travail du laboratoire de M. le D'^ Tapret, à l'hôpital Saint-Antoine. 


METHODE DE COLORATION ET BACILLE DK LUSTGARTEN. 

Au cours de recherches bactériolog^iques sur la syphilis, j'ai 
dû vérifier les méthodes préconisées pour la coloration d'un 
microbe spécifique et celle de Lustgarten en particulier. C'est en 
effet celle qui offrait le plus de garanties d'authenticité et celle 
qui a eu le plus de retentissement. 

Rappelons d'abord le manuel opératoire que Lustgarten a 
indiqué : 

1° Les coupes de productions syphilitiques ou les lamelles 
enduites de l'exsudat spécifique du chancre sont portées, pendant 
24 heures à froid et 2 heures à 60° environ, dans un bain colorant 
ainsi composé : 

Solution alcoolique saturée de violet gentiane H parties. 

Eau d'aniline 70 — 

2*^ La coloration est suivie d'un lavage de 10 minutes dans 
l'alcool absolu, 

3° Puis la préparation est soumise pendant dix secondes h 
l'action du permanganate de potasse en solution à 1 1/2 0/0, 

4° Et enfin à la décoloration par l'acide sulfureux en solution 
aqueuse, concentrée et fraîche. 

Il faut recommencer cette double décoloration autant de fois 
qu'il sera nécessaire pour qu'elle soit complète. {Liistgarlen.) 

Je dois dire d'abord que la décoloration par l'alcool absolu 
pendant dix minutes suffît à rendre inutile toute décoloration 
ultérieure, car elle est complète si la coupe du tissu est assez fine. 


METHODE DE COLORATION DE LUSTGARTEN. iSo 

Quoi qu'il eu soit, j'ai pratiqué celte méthode sur cinquante 
et une pièces de syphilis, et le résultat a toujours été négatif. 

Ces pièces ont compris, sauf la roséole, toute la série des 
lésions ordinaires et indiscutables de la maladie : le chancre 
initial de tous sièges, les papules et les plaques muqueuses, les 
ulcères de la syphilis maligne précoce, les gommes, les syphilides 
serpiginouses tertiaires, etc. 

Les fragments de tissu ont été prélevés sur le vivant ou à 
l'autopsie, ils ont été fixés par l'alcool ou le bichromate. Toutes 
les conditions de l'expérience ont été variées : le colorant et le 
temps d'immersion dans le colorant, le chauffage qui a été 
porté jusqu'à 130*^, la durée elle-même du chauffage, l'alcool de 
lavage qui a été supprimé, ou dont l'action a été diminuée par 
la saturation du même colorant, lo titre des solutions de per- 
manganate et d'acide sulfureux, le temps de leur action. Jamais 
je n'ai rencontré le bacille de Lustgarten ni aucun bacille qui lui 
ressemblât. 

Sans doute des faits négatifs, même très nombreux, prouvent 
moins qu'un fait positif bien observé, aussi je ne puis tirer des 
expériences que j'ai faites d'autre conclusion que celle-ci : 

Même en admettant pour vraie la découverte de Lustgarten, 
on ne peut reproduire à volonté les résultats qu'il a obtenus — 
en se servant des procédés qu'il a donnés. 

Et sans discuter le bien fondé des affirmations positives sur 
ce sujet, une méthode sûre pour déceler le microbe delà syphilis 
est encore à découvrir. 

II 

MÉTHODE DE LUSTGARTEN APPLIQUÉE A LA COLORATION DU BACILLE 
TUBERCULEUX. 

Parmi les lésions qui ont été examinées au point de vue 
bactériologique, l'une a été pour moi l'occasion d'une méprise 
qui pourrait expliquer peut-être les affirmations de Lustgarten. 

Comme les circonstances dans lesquelles cette méprise s'est 
produite ajoutent à l'intérêt qu'elle présente, nous donnerons 
brièvement l'observation du malade qui en fut l'objet. 

En juin 1891, se présenta dans un service de l'hôpital 
Saint-Antoine, un homme porteur d'une tumeur de la grosseur 


486 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

du poing siégeant sur la dixième côle. La tumeur, lég-èrement 
conique, portait en son centre une ulcération cratériforme ronde 
contenant un énorme bourbillon nécrosé en voie d'élimination. 
Le diagnostic de g-omme syphilitique fut porté, ^"t le traitement 
spécifique interne institué. En quinze jours la tumeur diminua 
des trois quarts et le bourbillon nécrosé s'élimina. 

C'est dans cette période que le pus de celte gomme, recueilli 
par moi et examiné, à la fois comme du pus tuberculeux par la 
méthode d'Ehrlich, et comme du pus syphilitique par la méthode 
de Lustgaiien, me montra, par cette dernière méthode seule- 
ment, des bacilles peu nombreux mais absolument évidents, 
isolés ou en chaîne. 

En présence des caractères formels de la lésion, et la 
méthode de coloration tuberculeuse d'Ehrlich étant d'ailleurs 
restée quatre fois sans résultat, je demeurai convaincu que j'avais 
retrouvé le bacille de Lustg^arten, et dans une lésion syphilitique. 
— Celte lésion fut soumise successivement au diagnoslic de trois 
médecins des hôpitaux dont l'avis fut unanime. Son aspect élait 
assez caractéristique pour que la photographie en fût prise 
comme un témoignage de sa nature. 

Au bout de trois semaines l'ulcère parut en telle voie d'amé- 
lioration que le malade fut congédié, et ce fut dans l'intention 
de voir la lésion guérie par le seul Iraitement interne que je fis 
entrer le malade dans le service de M. le D"" Tapret dont j'étais 
alors l'interne. 

Or, malgré la continuation du traitement, l'ulcération ne se 
détergea pas complètement et demeura stationnaire. Dans le 
doute je recommençai indéfiniment l'examen microbien du j)us, 
après décoloration à l'acide nitrique au 1/3. Et en même temps 
j'inoculai un cobaye. 

Le neuvième examen me montra des bacilles colorés malgré 
la décoloration acide — et le cobaye mourut tuberculeux. 

Dans tous mes examens antérieurs de produits syphilitiques, 
comme dans celui-là, j'avais pris d'extrêmes précautions pour 
ne pas èlro trompé sur la nature spécifique des lésions, etmalgré 
ces précautions, j'y ai élé trompé une fois. Est-ce que la même 
erreur ne serait pas arrivée à Lustgarten? Et par exemple la 
nature de cette tumeur du deltoïde qu'il examina avec Weigert 
et qui fourmillait de bacilles, lui était-elle bien prouvée? Il ne 


METHODE DE COLORATION DE LUSTGARTEN. 187 

parle pas d'inoculations négatives au cobaye, et un examen par 
les seules réactions colorantes ne suffit pas, nous venons de le 
voir, à trancher absolument la question. 

Du reste, ce double examen bacillaire me donnait un résultat 
qui valait la peine d'être repris. 

L'examen par la méthode de Lustgarten montrait toujours 
des bacilles (sauf dans une préparation sur quinze) et l'examen par 
la méthode d'Ehrlich avait échoué 8 fois sur 10. — J'ai déjà dit 
que les bacilles étaient fort rares : les plus riches préparations 
n'en contenaient pas une vingtaine. 

En contrôlant ces résultats, je me suis assuré plusieurs fois 
que la méthode de Lustgarten, bien maniée, car elle est un peu 
délicate, est d'une extrême sensibilité pour le bacille tuber- 
culeux. 

Pareillement et dans un cas où les bacilles étaient aussi fort 
rares — dans une pérityphlite tuberculeuse do diagnostic di- 
w/^;/^ impossible, c'est par cette méthode que j'ai réussi à prouver 
l'existence du bacille, contrôlée ensuite parles réactifs ordinaires. 

Et non seulement la méthode de Lustgarten est bonne pour 
déceler le bacille dans des tissus où il est rare, mais aussi pour 
le mettre en évidence dans certains parenchymes organiques 
comme celui du foie par exemple, où la fuchsine phéniquée de 
Ziel et la décoloration nitrique donnent de si médiocres résultats. 

En résumé la méthode de Lustgarten qui, pour ne pas dire 
plus, est au moins très infidèle dans Ja recherche du microbe de la 
syphilis, est une très fine méthode pour déceler le bacille tuber- 
culeux. Elle mériterait donc de prendre rang parmi les procédés 
usuels de colorations bactériennes, et du reste, il est facile de la 
simplifier beaucoup sans l'altérer en rien. 

Pour la recherche du bacille tuberculeux, dix ou quinze 
minutes au plus d'immersion dans le colorant suffisent quand la 
coloration est faite à chaud. 

Rien n'est plus simple que cette coloration quand il s'agit 
d'une lamelle enduite d'exsudat. Quand il s'agit d'une coupe, je 
la colle d'abord sur une lame porte-objet ou sur une lamelle, au 
moyen de caoutchouc dissous dans le xylol, ou d'eau albuminée 
légèrement phéniquée. On évite ainsi la difficulté d'avoir à 
étendre après la coloration une coupe que le chauffage a pelo- 
tonnée sur elle-même. 


188 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


Une deuxième simplification vise la préparation de la solution 
fraîche d'acide sulfureux. 

On prend une pipette Miquel à moitié remplie d'eau stérile 
et on la fixe sur un support métallique de laboratoire. A chacune 
de ses extrémités on monte un tube de caoutchouc : celui qui 


Fig. 1. 


part de Textrémité effilée relie la pipette à un de ces siphons 
d'acide sulfureux liquide qu'on trouve dans le commerce. — 
Celui qui part de l'extrémité supérieure plonge dans un vase 
rempli d'eau et sert à éviter tout dégagement de gaz. 

On appuie sur la pédale du siphon et l'on fait barboter le 
gaz dans l'eau de la pipette qui s'en trouve saturée en quelques 
minutes. Rien n'est plus facile même, au moyen d'une simple 
ficelle et d'une pince hémostatique, que de maintenir automati- 
quement le débit du courant gazeux. 

On peut donc préparer sur-le-champ, sur sa table, la solution 
sulfureuse fraîche et concentrée exigée par Lustgarten. La 
pipette mobile sur son support métallique devient un véritable 
tlacon compte-goulteset il suffit d'imprimer du doigt une modi- 
fication à sa position pour provoquer ou suspendre l'écoulement 
du liquide qu'elle contient. 

Ainsi réglée la méthode do Lustgarten n'est plus qu'une 


MÉTHODE DE COLORATION DE LUSTGARTEN. 189 

méthode semblable à celle de Gram, avec ces diftererices que la 
solution iodo-iodurée est remplacée par une solution de perman- 
ganate et l'alcool ou l'huile d'aniline par la solution sulfureuse. 

III 

UN NOUVKAU PROCÉDÉ DE COLORATION DE LA FIRRINE. 

En poursuivant mes recherches sur ces sujets et pensant 
que Lustgarten avait peut-être obtenu des résultats par un hasard 
de préparation, j'ai été amené à renforcer l'action colorante par 
un mordançage préalable du tissu. Et ayant observé que quelques 
mordants employés dans l'industrie, tels que le phosphate et le 
silicate de soude, le carbonate de potasse, l'émétique, avaient sur 
les tissus animaux des élections spéciales, j'ai étudié à ce point 
de vue une vingtaine de mordants usités en teinturerie. 

Par hasard j'ai rencontré ainsi un procédé de coloration de 
la fibrine qui me semble supérieur à celui que Weigert a 
proposé. Le voici : 

Qu'on prenne par exemple un fragment de chancre d'un 
centimètre de long" sur trois millimètres dans ses deux autres 
dimensions, qu'on aura préalablement fixé par le liquide de 
Muller. Qu'on le laisse passer 13 ou 20 heures dans une solu- 
tion de tannin au ^, légèrement alcoolisée (lO'"'" d'alcool pour 
eau ■= 200). Si l'on fait ensuite subir à la préparation la colo- 
ration au violet aniline d'Ehrlich suivie de la décoloration de 
Gram Weig^ert, en remplaçant dans la décoloration l'huile 
d'aniline par l'essence de girofles, on verra un feutrage fibrineux 
occuper la surface ulcérée du chancre, et de ce feutrage émaner 
un réseau extraordinairement fin et net, intercellulaire, descen- 
dant jusqu'aux limites de la néoplasie pour s'y perdre en prenant 
l'aspect dune multitude de fins cheveux coupés. 

L'élection fibrineuse est assez forte pour supporter une double 
coloration à l'éosine ou la safranine. On peut ainsi obtenir des 
préparations d'une grande netteté et d'un aspect intéressant. 

Nous mentionnons ce fait qui n'a pas une extrême impor- 
tance mais qui peut être susceptible d'extension. Si les mordants 
ont des élections, pourquoi ne pas chercher à les utiliser dans les 
recherches microbiennes, soit incorporés à des liqueurs colo- 
rantes, soit mieux, séparément pour des mordançag-es préalables? 


RECHERCHES 

SUR LA. 

S\MBI0S1 DES ALGUES ET DES PROTOZOAIRES 

Par Félix Le DANTEG. 


La présence de la chlorophylle dans les tissus de certains 
animaux a été constatée il y a fort longtemps; depuis une 
dizaine d'années seulement a été émise et discutée l'idée que 
cette chlorophylle, dans un grand nombre de cas, n'appartient 
pas en propre aux cellules animales, mais bien à des végétaux 
parfaitement distincts, vivant en hôtes bienfaisants à l'intérieur 
de leur protoplasma. 

Les partisans de la théorie de l'individualité propre des 
corpuscules verts qui existent dans quelques Infusoires ciliés, 
les Spongilles, les Hydres, etc., se sont principalement appliqués 
à répondre aux deux questions suivantes : (a). Peut-on recon- 
naître dans ces corpuscules verts les caractères distinctifs d'une 
cellule végétale complète? — [b). Ces corpuscules verts sont-ils 
susceptibles de vivre et de se multiplier en dehors du protoplasma 
des animaux dans lesquels nous les trouvons? 

[a). A peu près en même temps, C. Brandt ' el Geza-Entz -, 
qui les premiers ont considéré ces corpuscules verts comme des 
algues unicellulaires ayant une existence propre, ont décrit à 
leur intérieur un noyau et des grains d'amidon. Geza-Entz a 
également attribué à ces corpuscules une membrane d'aspect 

1. G Brandt, Ueber das Zusammenleben von Tbieren u. Algen. Sitzb. dcr qcs. 
naiurf. Freunde. Berlin, 1881. — Ueber die inorphol. u. physiol. Bedeutung des 
Chlorophylls bei Thiercn. Arch.f. anal. u. phys. {Abtli I. 2J/t//s.),1882, — /(/. :2^ arti- 
cle. Milthcil a. d. Zoolog. Station zn Neapel, 1883. 

"2. Geza-Entz, Ueber die natiir des Ghlorophyll Kiirpcrchen niedcrer Thiere. 
Biot. Centr., 1882. 


REGHEllCHES SUR LA SYMBIOSE. 191 

gélatineux, dans laquelle Brandi dit avoir reconnu chimique- 
ment la présence de cellulose. Cette substance est aussi donnée 
par Dangeard ' comme existant dans la membrane des corpus- 
cules verts du vorlicellien appelé Ophnjdiiim versatile. 

Beyerinck ^ et Famintzin * s'accordent à considérer les 
corpuscules verts comme des algues qu'ils rapprochent avec 
Brandt des Protococcacées sous le nom deZoochlorelles. Famintzin 
a mis hors de doute l'existence d'un noyau dans ces corpuscules 
par l'hématoxyline ou le carmin employés dans des conditions 
bien déterminées ; il a démontré par plusieurs procédés l'exis- 
tence de la membrane gélatineuse d'enveloppe, mais n'a pas 
trouvé de cellulose dans cette membrane. Il a décrit comme 
accidentel chez la Zoochlorelle un point roug-e qui n'est pas 
décoloré par l'alcool absolu, et comme constant un chroma- 
lophore, déjà signalé par Brandt, et qui se multiplie par divisio n 
en même temps que la Zoochlorelle. 

Lankaster * a été le plus sérieux adversaire de la théorie de 
l'individualité des corpuscules verts. Déjà avant les travaux de 
Brandt et Geza-Entz, il les avait assimilés aux leucites chloro- 
phylliens des végétaux. Son argument morpholog-ique le plus 
important pour nier leur individualité était qu'il n'avait pas pu 
trouver de noyau à leur intérieur. Les procédés de coloration 
employés par Brandt et Famintzin ont réduit cette objection à 
néant. Il en reste une autre, moins fondamentale, purement 
physiolog-iqne. Geza-Entz et Brandt avaient considéré les 
zoochlorelles comme devant, à la lumière, se charger d'hydro- 
carbures par assimilation chlorophyllienne, et en fournir une 
partie à leur hôte. Or, Lankaster, et en ceci Famintzin est 
d'accord avec lui, n'a pas trouvé d'amidon dans les Zoochlorelles, 
et en a découvert au contraire à leur extérieur dans les cellules 
amiboïdes de la Spongille ; cet amidon existait concurremment 
avec des matières albuminoïdes dans des vacuoles de ces cellules ; 

1. Daxgeard, Étude sur l'Ophrydium versatile. Botaniste, 1890. 

2. Beverinck, Giilturversuche mit Zooclilorellen, Lichengonidien und anderen 
Algen. Bot. Zcitunçi, 1890. 

3. Famin-tzix, Beitrag zur Symbiose von Algen und Thieren. Mem. Ac. Iinp. Se. 
Pctershourg, t. XXXVIII, 1891. 

i. Lankaster, The mode ot'occurence of Ghlorophyll in Spongilla. Quart. Journ., 
1874. — Ghlorophyll in Turbellarian Worms and other Animais. Quart. Journ., 
1879. — On the chlorophyll-corpuscles and amyloïd deposits of Spongilla and 
Hydra. Quart. Journ., 1882. 


192 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

il provenait probablement de l'extérieur, peut-être de proies 
animales qui en étaient préalablement chargées, comme ces 
Chilomonas Paramœcium que Famintzin a vu ingérer en grande 
abondance par des iiifusoires verts. Dans tous les cas, cette 
observation n'infirme en rien l'hypothèse de l'individualité des 
Zoochlorelles, et restreint seulement le rôle que l'on peut accorder 
à ces êtres dans la symbiose avec les cellules animales. 

{b) Déjà en 1863, Balbiani, plus tard Geza-Entz et Brandt, 
ont observé que les corpuscules verts se multiplient par 
division à Tintérieiir des Infusoires. Trompé par ce fait que 
])lusieurs êtres peuvent rester vivants un temps plus ou moins 
long dans les vacuoles d'ingestion des Protozoaires, Geza-Entz 
a dit que les corpuscules verts mis en liberté par l'écrasement 
d'un Infusoire continuent de vivre sous les formes les plus 
variées {Palmella, Totraspora, etc.). Brandt affirme seulement 
que les Zoochlorelles ainsi mises en liberté continuent de vivre 
et produisent à la lumière des grains d'amidon. 

Beyerinck a découvert une algue vivant librement et 
ressemblant beaucoup aux Zoochlorelles ; il l'a appelée Chlorella 
vulgaris. Elle se cultive très bien sur la gélatine peptonisée addi- 
tionnée de sucre ou d'extrait de malt concentré. Après avoir dit 
d'abord qu'il n'a jamais pu obtenir de culture des Zoochlorelles 
sur ce milieu, cet auteur ajoute brièvement et sans donner de 
détails, à la fin de son mémoire, qu'il a, dans les derniers temps, 
réussi à cultiver abondamment sur gélatine les Chlorelles de 
l'Hydre, et que cette culture lui a permis de constater une 
identité certaine des dites algues avec les Chlorella vulgaris. 

Famintzin donne des détails bien plus précis. Un individu 
de Paranupcium Bursaria, isolé dans une goulie stérilisée de l'eau 
de son aquarium, est écrasé entre un porte-objet et un couvre- 
objet. Les Zoochlorelles mises en liberté adhèrent au verre avec 
assez de ténacité pour qu'un léger courant liquide produit entre 
les deux lames ne les déplace pas. Ceci permet de suivre longue- 
ment au microscope l'une d'entre elles bien déterminée. L'auteur 
fait pénétrer sous le couvre-objet une couche liquide, fréquem- 
ment renouvelée, d'une solution contenant pour 100 parties d'eau 
distillée, une partie de phosphate acide de potasse et une partie 
de sulfate d'ammoniaque. En opérant ainsi on voit les Zoochlo- 
relles se diviser en 4 ; chacun des produits de la division atteint 


RECHERCHES SUR LA SYMBIOSE. 193 

à peu près la dimension normale des Zoochlorelles, et se divise 
de nouveau. 

Le même auteur est arrivé à un résultat semblable avec les 
Zoochlorelles du Stcnlor poh/tnorpJins, en tuant ces Protoozaires 
avec une solution de soude et ajoutant à la préparation, faite 
comme précédemment, un peu de gélose ou un peu de silice 
gélatineuse pour éviter le déplacement des algues dans le 
liquide. L'individualité des corpuscules verts est démontrée par 
ces expériences, qui montrent la possibilité de leur multiplica- 
tion dans un liquide parement inorganique. 

Da)is quelles conditions ces Zoochlorelles se mettent-elles en 
symbiose avec les Infusoires, c'est cette question que je me 
propose d'élucider dans ce travail, et les faits que je vais exposer 
donneront une nouvelle preuve de l'individualité des corpus- 
cules verts. 

' Dans deux réservoirs distincts, j'ai conservé longtemps deux 
infusions renfermant en grande quantité des Ciliés d'une 
même espèce Paramœciam Biirsaria. Quoique ces deux réser- 
voirs fussent tous deux, depuis le début de mes observations, 
dans les mêmes conditions de température et d'éclairement, les 
Paramécies de l'un deux étaient toutes hyalines ', celles de l'autre 
presque toutes vertes. Ce fait qui serait assez étonnant si la 
chlorophylle de ces Infusoires était une production de leur propre 
substance, s'explique très facilement si l'on admet l'individualité 
des corpuscules verts. 

En réunissant dans un même tube des portions à peu près 
égales des deux infusions précédentes, j'ai constaté qu'au bout 
de quelques jours les Paramécies hyalines étaient devenues 
presque introuvables dans ce troisième réservoir; ce résultat 
pouvait tenir soit à la supériorité des Paramécies vertes dans la 
lutte pour l'existence, soit à la nature contagieuse pour ces 
Infusoires de la propriété d'être vertes. Une expérience très 
simple m'a permis de m'assurer que la deuxième de ces hypo- 

1. Une eau contenant des Paramœcium Bursaria, toutes hyalines, est une 
chose très rare dans la nature ; j'ai recueilli celle dont je parle ici dans une 
mare remplie d'algues vertes, située sur le plateau qui domine la grève de 
Vimereux. Il m'a semblé intéressant de remarquer que le Vimereux, qui coule à 
peu de distance de cette mare, contient des Paramécies presque toutes infectées 
de Zoochlorelles. 

13 


194 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

thèses est vraie (sans que pour cela je puisse affirmer que la 
première ne l'est pas). 

Dans une goutte d'eau filtrée de la première de mes infu- 
sions, i'ai écrasé des Paramécies vertes débarrassées autant que 
possible des substances étrangères par des passages successifs 
dans de l'eau filtrée ; puis j'ai introduit une Paramécie incolore 
dans cette goutte que j'ai suspendue sous un couvre-objet, sur 
un porte-objet creusé, c'est-à-dire dans une chambre humide. 
En opérant ainsi, j'avais à peu près complètement éloigné de 
rinfusoire hyalin toute nourriture autre que les débris de ses 
congénères verts. 

J'ai fait un très grand nombre de fois des préparations de ce- 
genre et dans quelques-unes d'entre elles j'ai vu que la Para- 
mécie, incolore au début, était, au bout de quelques jours, por- 
teuse d'un certain nombre de Zoochlorelles, La question de 
la supériorité pour la lutte des individus verts étant naturelle- 
ment éliminée dans ce cas, il était bien évident qu'il y avait 
contagion de la propriété d'êlre vert. 

La préparation que je viens de décrire est facile à faire et 
très peu fatigante à observer puisqu'il suffit d'y jeter un coup 
d'œil rapide tous les jours; mais elle ne donne pas toujours de 
résultat; quelquefois la Paramécie meurt avant d'avoir été por- 
teuse d'une seule Zoochlorelle. Si, au lieu d'abandonner cette 
préparation à elle-même, on la suit au microscope sans perdre 
de vue i'Inftisoire, l'observation est bien plus fastidieuse, mais 
donne quelquefois un renseignement nouveau. Souvent, en 
effet, j'ai vu par ce moyen l'ingestion d'une Zoochlorelle par 
rinfusoire incolore, et je me suis assuré que, plusieurs heures 
après, cette Zoochlorelle était encore verte. Contrairement à ce 
qui se passe pour une Protococcacée ordinaire, elle n'était pas 
digérée. En conservant la préparation, je voyais, au bout de 
quelques jours, un nombre variable dezoochlorelles vertes dans 
le corps de l'Infusoire, comme je l'ai déjà dit plus haut. 

Cette simple observation prouve que la zoochlorelle s'inocule 
par ingestion dans le protoplasma animal; mais un doute reste; 
toutes les Zoochlorelles que nous ^voyons au bout de quelques 
jours dans la Paramécie ont-elles été ingérées séparément et 
ont-elles seulement continué à vivre, ou bien l'Infusoire a-t-il 
éringé un nombre moindre de ces algues qui se sont ensuite 


RECHERCHES SUR LA SYMBIOSE. 195 

miiltiplices à son intérieur? [1 m'a élé facile de m'assurer que la 
seconde hypolhèse est la vraie. 

Pour cela, dès que j'avais vu la Paramécie avaler une 
Zoochlorelle, je la prenais avec une petite pipette et je la portais 
dans un verre de montre plein de l'eau filtrée du réservoir d'où 
elle provenait; je la transportais ainsi successivement dans plu- 
sieurs verres de montre et je la montais de nouveau en goutte sus- 
pendue. Je m'assurais que la goutte ne contenait aucune 
Zoochorelle en dehors de la Paramécie, et je conservais la prépa- 
ration pour l'observer de temps en temps. En opérant ainsi, j'ai 
souvent vu la Zoochlorelle rejetée par l'Infusoire, mais souvent 
aussi le nombre des Zoochlorelles a augmenté de jour en jour 
par quadripartitions successives. lime semble que ceci démontre 
d'une façon irréfutable la nature parasitaire des corpuscules 
verts, puisqu'un seul d'entre eux, inoculé à une Paramécie, se 
multiplie à son intérieur et arrive à l'envahir complètement'. 

Par quel mécanisme se produit cette inoculation après 
ingestion? 

Pour l'étudier, je transporte sur un porte-objet non creusé 
le couvre-objet porteur de la goutte de liquide dans laquelle une 
Paramécie vient d'avaler une Zoochlorelle; cette g-outte se 
trouve ainsi aplatie, et en aspirant avec précaution le superflu 
de l'eau de la préparation au moyen d'un papier buvard, je com- 
prime légèrement l'infusoire et je ralentis assez son mouvement 
pour pouvoir l'observer sans peine avec un fort grossissement. 
Au début, comme dans le cas d'une protococcacée quelconque, 
l'algue avalée est comprise dans une vacuole , c'est-à-dire 
qu'elle se montre à l'œil entourée d'une aire circulaire claire à 
bords très nets. Mais ce qui est très particulier au cas de l'inges- 
tion d'une Zoochlorelle, c'est qu'au bout d'un temps très court, 
9 à 10 minutes environ, cette aire circulaire a disparu. 

Elle ne disparaît pas en se rétrécissant de façon à ce que 
son contour apparent vienne se confondre avec celui de la 
Zoochlorelle; au contraire, elle conserve son diamètre initial, 


4. Il est intéressant de rapprocher ce fait du pliénomène contraire observé par 
M. Hafkine [Annales de l'Instllut Pasteur, mars 1890, p. 16"2). Quand les Paramécies 
avalaient les spores da microba causant la maladie infectieuse étudiée par lui, ces 
spores ne poussaient jamais dans le protoplasma, mais étaient rejetées par l'Infu- 
soire comme une nourriture indigeste. 


196 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


mais ses bords perdent progressivement leur netteté, la réfran- 
gibilité du liquide que contient la vacuole devenant de plus en 
plus voisine de celle du protoplasma ambiant. Je pense qu'à 
partir de ce moment, on doit considérer la Zoochlorelle comme 
se trouvant eri contact direct avec le protoplasma animal. Le 
protoplasma végétal est donc séparé de celui du Protozoaire 
seulement par une membrane de cellulose à travers laquelle 
peuvent se faire par osmose des échanges réciproques utiles à 
chacun'. La symbiose est établie. 


1. Voici une observation que je n'ai malheureusement pu faire qu'une fois et 
qui, si elle est difficile à interpréter, semble au moins prouver que les relations de 
symbiose entre l'algue et le protoplasma animal sont assez étroites. 

Quand on emprisonne sous un couvre-objet une Paramécie contenant des 
Zoochlorelles, on remarque que, la pression augmentant par suite de l'évaporatioa 
de l'eau (il faut pour cela qu'aucun grain solide volumineux n'existe dans la pré- 
paration), il y a uu degré d'aplatissement que l'animal ne peut dépasser sans 
danger. Eu un ou plusieurs points de son contour apparent son protoplasma fait 
hernie à l'extérieur, et si l'on n'a pas soin à ce moment d'ajouter de l'eau, l'ani- 
mal se crève et meurt. Il reprend, au contraire, ses mouvements si l'on diminue 
la pression par addition de liquide. Si la pression a été très lente et très ménagée, 
il n'y a pas eu déchirure de l'enveloppe réticulée de l'animal, le protoplasma 
extravasé est dépourvu de Zoochlorelles, celles-ci ayant précisément été retenues 
par le filtre réticulé. Le protoplasma, quand il n'est pas sorti en trop grande 
abondance, rentre petit à petit dans l'animal après que la compression a cessé; 
quand il en est sorti beaucoup, il s'en isole une partie qui estentraînée dans l'eau 
sous forme d'une peiite sphère hyaline. Si la pression a été un peu brusque et 
qu'on n'ait pas complètement tué la Paramécie, ce qui arrive malheureusement le 
plus souvent, on a quelquefois produit chez l'animal une déchirure partielle le 
long du contour apparent. Par cette déchirure sort du protoplasma contenant, dans 
le cas actuel, des Zoochlorelles; et souvent, quand on diminue la pression par 
l'addition de liquide, on voit s'isoler dans le milieu ambiant une sphère proto- 
plasmique contenant une ou plusieurs zoochlorelles (ci-joint un croquis représen- 


Fig. l. 


tant la mise en liberté d'une sphère protoplasmique contenant 8 de ces algues). 
Le reste du protoplasma extravasé demeure fixé à l'animal, et il se produit une 
cicatrisation que je ne m'arrête pas à décrire ici. Cette sphère protoplasmique peut 
se maintenir longtemps dans le liquide, roulant au gré des courants sans changer 


RECIIEUCHES SUR LA SYMBIOSE. 197 

Il m'a été impossible de l'aire ingérer eu même temps qu'une 
Zoochlorelle un grumeau d'alizarine sulfoconjuguée, je ne sais 
donc pas s'il y a sécrétion d'acide dans la vacuole éphémère qui 
entoure l'algue au moment de son ingestion; c'est peu probable 
puisque la Zoochlorelle reste verte et qu'une Zoochlorelle bien 
vivante introduite, en dehors de la paramécie, dans une solution 
acide faible, se laisse pénétrer par cette solutioti et brunit rapi- 
dement. 

Il est assez rare de trouver dans les infusions naturelles des 
Pantmœciuni Dursaria dépourvues de Zoochlorelles: on peut se 
procurer assez facilemeht ces Infusoires à l'état incolore en con- 
servant plusieurs jours à l'obscurité le liquide qui les contient. 
Dans ces conditions, la plupart des Zoochlorelles brunissent, 
subissent probablement une digestion plus ou moins complète 
et sont rejetées brunes par l'Infusoire ; des Zoochlorelles brunes 
se trouvent d'ailleurs, en général, en nombre variable mais res- 
treint dans les Paramécies vertes. 

On débarrasse difficilement par le séjour à l'obscurité toutes 
les Paramécies de toutes les Zoochlorelles, mais on en obtient 
quelques-unes qui sont parfaitement hyalines; ces Paramécies, 
isolées avec soin, restent ensuite indéfiniment incolores, mais 
les individus restés dans l'infusion redeviennent rapidement 
verts si on laisse l'infusion au jour, ceux d'entre eux qui ont 

de forme, mais je pense que sa substance doit se modifier assez rapidement dans 
ces conditions anormales. 

Dans une de ces expériences que je faisais dans le but d'étudier la cicatrisa- 
tion, j'ai vu la Paramécie même qui venait d'éprouver cette perte de substance 
avaler, environ une demi-heure après son accident, la sphère protopiasmique con- 
tenant deux Zooclilorelles qu'elle avait abandonnées. Tout se passa comme si les 
Zoochlorelles avaient été des algues ordinaires; la sphère protopiasmique fut 
digérée, les deux algues devinrent brunes au bout de 3/4 d'heure environ; or, 
il serait difficile de considérer ces algues comme déjà mortes au moment de i'in- 
gestioo puisque, isolées de leur hùte, elles conservent, en générai, bien plus 
d'une demi-heure la propriété de s'inoculer dans un être nouveau. Il y a donc 
relation tellement étroite entre la Zoochlorelle et le protoplasma ambiant, qu'une 
sphère de cette substance, extraite une demi-heure du contenu cellulaire, se com- 
portant vis-à-vis du reste du protoplasma comme un corps étranger, les Zoochlo- 
relles qu'elle contient sont également traitées comme un corps étranger. N'y a-t-il 
pas quelque chose d'analogue dans ce qu'a remarqué Famintzin (op. cit., p. 10, 
lignes 31-33), au cours de ses essais de culture des Zoochlorelles du Stentor poly- 
morphus : « Chose étonnante, restaient vivantes dans l'agar-agar, seulement les 
Zoochlorelles qui se trouvaient isolées et en dehors du plasma du stentor ; celles 
qui étaient entourées d'une masse de plasma mouraient presque toutes ; il m'est 
impossible de m'expliquer cette particularité. » 


198 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

conservé des parasites étant une cause d'infection pour Jes 

autres. 

Il semble probable qu'à l'obscurité les Zoochlorelles, ne pou- 
vant plus exercer leurs fonctions chlorophylliennes ordinaires, 
dépérissent ou même peut-être meurent, et c'est alors qu'elles 
sont digérées par leur hôte. 

En résumé, ce que l'on peut affirmer actuellement, c'est que 
les corpuscules verts des Paramécies sont des algues unicellu- 
laires très voisines, sinon identiques à une algue vivant en 
liberté que Beyerinck a appelée C/dorcUa vulgaris. 

Elles ont une vie propre et sont susceptibles de vivre en 
iehors de l'organisme animal dans des milieux absolument 
inorganiques. 

Elles s'inoculent dans les Paramécies quand elles sont ingé- 
rées par ces Infusoires et se développent à leur intérieur par 
quadripartitions successives. 


REVUES ET ANALYSES 


LA lllFFÉI!ENflAT10\ DES MATIÈRES ALBFMIMDES 

REVUE CRITIQUE 

Gan.xal, Gazette médicale de Paris, i8o8. — Denis, Mémoire sur le 
sang. Paris, 1859. — Etude sur les substances albuminoïdes. 
Paris, 1859. — W. Kuhne, Zeilsclir. f. BioL, passim. — S. Lewith, 
Atrhir. f. exp. PathoL, 24, et Malifs Jahresb. 17. — J. Sebelien, 
Recherches sur le dosage des matières albuminoïdes. Zeitschr. f. 
plu/s. Cheniie, t. XIll, 1889. — 11 a été publié sur ce sujet une mul- 
titude de travaux dont il serait trop long de citer les auteurs et 
les titres. On les trouvera surtout dans la collection du Zeitschrift 
fur Biologie, du Mali/s Jahresbericlit, de Pfluger's Archiv. et de 
Archiv. f. exp. Patliol, dans ces 20 dernières années. — Consulter 
à ce sujet le livre très condensé et très clair de 0. Hammarsten, 
Lehrhuch der plujsiologischen Cheniie. Wiesbaden, i89i,ei\e Cours 
de chimie biologigue, très bien documenté, de M. A. Gautier. 
Paris, 1892. 

Je terminais ma dernière revue (décembre 1891) en disant que nous 
n'avions pas encore réussi à pénétrer les secrets de construction de 
la molécule albuminoïde. Ouelles sont les dispositions relatives et 
les liaisons réciproques des atomes de carbone, d'hydrogène, d'azote, 
d'oxygène, et éventuellement de soufre et de phosphore, qui forment 
la trame de tous nos tissus? Quelles sont les modifications de structure 
qui distinguent une matière albuminoïde d'une autre, la caséine de 
l'albumine, la fibrine du gluten? Nous l'ignorons. Tout ce que nous 
révèle jusqu'ici l'expérience, c'est que ces diverses substances n'ont 
pas la même composition, mais diffèrent peu l'une de l'autre. D'un 
autre côté, elles ne sont pas identiques au point de vue de leurs 
propriétés et de leur rôle fonctionnel, mais elles se rapprochent beau- 
coup. De là l'idée toute naturelle d'expliquer à la fois ces ressemblances 
et ces différences par les mêmes moyens que pour d'autres groupes 
chimiques mieux connus, c'est-à-dire par des notions d'homologie ou 
d'isomérie. 

Les corps gras sont, par[] exemple, des mélanges de substances 
homologues. Chacune d'elles renfermant un alcool trivalent, la glycé- 
rine, combiné à trois groupements d'acides gras, comme on passe de 
l'un de ces acides à l'acide immédiatement supérieur en ajoutant au 


200 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR, 

premier une molécule G îP, un triglycéride gras diffère de celui qui 
le précède dans la série en ce qu'il contient G^H*^ en plus, pour la 
même quantité d'oxygène. 

Peut-être les matières albuminoïdes sont-elles aussi des mélanges 
de substances homologues, dont les formules, ramenées à contenir une 
même quantité d'oxygène, ou d'azote, montreraient des gradations 
dans les proportions de carbone et d'hydrogène permettant de les 
arranger en séries homologues. Mais à coup sûr il y a autre chose, et 
les questions d'homologie s'y superposent à des questions d'isomérie 
qui sont peut-être prépondérantes. 

J'ai indiqué, dans ma dernière Revue sur ce sujet, comment se 
produisaient les isoméries dans les groupes les plus simples, soit de la 
série grasse, soit de la série aromatique. Le nombre des isomères 
possibles croît à mesure qu'augmente le nombre d'atomes de carbone 
de la molécule, c'est-à-dire le nombre de places auxquelles on peut 
souder un maillon latéral destiné à devenir lui-même le point de départ 
d'une chaîne nouvelle, et il n'y a pas de meilleure image à donner du 
genre de prestidigitation auquel la chimie se livre avec succès sous ce 
rapport, que de rappeler ce que chacun a vu faire sur les théâtres de 
foire, oii, avec un certain nombre d'anneaux qu'il enchevêtre savam- 
ment, le magicien de la bande réussit à faire les ensembles les plus 
variés, une chaîne ouverte, fermée, une croix latine, grecque, russe, 
un polygone régulier, étoile, etc. Toutes ces figures si diverses, dont le 
nombre possible croît évidemment beaucoup plus vite que le nombre 
des anneaux, sont des métamères, lorsque les figures formées par un 
même nombre d'anneaux sont très différentes, des isomères, lorsque 
ces figures sont établies sur un plan commun. Si dans chacun des 
isomères variés ainsi obtenus par un mode de groupement des atomes 
de carbone, d'hydrogène et d'oxygène, on remplace un des anneaux 
représentant un atome d'hydrogène par un triangle fixé au groupe- 
ment par un de ces sommets, pendant que les deux autres portent 
chacun un anneau d'hydrogène, on aura l'image de la substitution 
d'une molécule d'amidogène AjIP à un atome d'hydrogène, et la 
représentation schématique de la formation des amides ou des acides 
amidés. Get atome triangulaire d'azote, entrant à diverses places dans 
le groupement, amène une série d'isoméries nouvelles, suivant qu'il 
sera soudé ici ou là, et on pourra ainsi avoir une multitude de corps 
de même composition élémentaire, contenant le même nombre d'atomes 
de carbone, d'hydrogène, d'oxygène, d'azote, présentant entre eux des 
analogies résultant du plan général de la construction, et des diffé- 
rences résultant des changements dans le détail de l'arrangement des 
atomes. Telle est en ce moment l'image la plus nette que nous 
puissions nous former des diverses matières albuminoïdes. 


REVUES ET ANALYSES. 201 

Seulement, si la chose est ainsi, voici une conclusion qui s'impose. 
A mesure qu'augmente, avec la complication de la molécule, le nombre 
d'isomères de même composition atomique, mais de structure diffé- 
rente, ces isomères en arrivent à ne plus être séparés que par des 
points de détail, à présenter par suite des propriétés très voisines, à 
avoir par exemple presque les mêmes points de fusion, d'ébuUition, à 
se comporter à peu près de même quant à leur solubilité, leur indice 
de réfraction, etc. 

Quelques-uns peuvent, lorsque de certaines dissymétries se 
sont produites dans leur structure, prendre le pouvoir rotatoire, 
et d'autres en rester privés. Ainsi, parmi un groupe d'alcools 
isomères relativement simple, celui des alcools amyliques, groupe 
qui, avec cinq atomes de carbone seulement, compte huit mem- 
bres possibles, dont sept réalisés, il y en a un qui est actif sur 
la lumière polarisée. Mais cette différence de propriétés ne l'a pas 
moins lais'sé confondu avec les autres, jusqu'au jour où les progrès 
de nos connaissances en chimie atomique ont permis d'aborder l'étude 
de la formule de constitution de ces alcools. C'est par des dislocations 
ménagées, par des synthèses adroites qu'on est arrivé à percer le 
secret de cet édifice relativement simple; ce n'est pas en isolant les 
divers alcools par les procédés de l'analyse immédiate qu'on est arrivé 
à les distinguer; et ce qu'on n'a pu faire dans un cas aussi facile, com- 
ment espérer y arriver avec les matières albuminoïdes, qui sont si 
rétives à la combinaison, dont nous ne savons faire ni la dislocation 
ménagée, ni la synthèse, et qui se comportent à peu près de même 
vis-à-vis de tous les réactifs? Tout ce que nous savons sur elles nous 
indique qu'il faudra employer des procédés délicats pour manifester 
leurs différences. 

I 

C'est pourtant ce problème difficile qui se trouverait résolu par 
les moyens en apparence les plus simples, s'il fallait en croire aveu- 
glément les indications de la science actuelle de celle qu'on trouve 
dans presque tous les livres élémentaires et dans les mémoires les plus 
savants. Il suffirait, pour distinguer les diverses matières albumiaoïdes 
les unes dos autres, d'actions banales, comme l'est, par exemple, celle 
des sels alcalins ou alcalino-terreux. Qu'il s'agisse de l'albumine de 
l'œuf, de la caséine du lait, d'une sérosité d'hydrocèle ou d'ascite, du 
sérum sanguin, bref d'un liquide quelconque contenant plusieurs 
matières albuminoïdes, il suffit, nous dit-on, pour séparer les uns des 
autres les divers éléments du mélange, d'appliquer leformulaire suivant. 
Prenons, par exemple, du blanc d'œuf, agitons-le longuement dans 


202 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR, 

l'eau après avoir coupé avec des ciseaux les membranes qui l'em- 
pêchent de s'y répandre. En filtrant, nous obtenons un liquide lim- 
pide et homogène dans lequel nous introduirons, à 20'^, du sulfate 
de magnésie en nature, ou que nous mélangerons, ce qui revient à 
peu près au môme, avec son volume d'une dissolution saturée de 
sulfate d'ammoniaque. Il se fait un précipité volumineux qu'on filtre 
et qu'on lave avec une solution saturée de sulfate de magnésie. Le 
précipité, bien lavé, est remis en solution dans l'eau pure, et soumis à 
une longue dialyse, de façon à éliminer la presque totalité du sel 
qu'il a retenu. On obtient ainsi la (jlobuline de l'œuf. 

Le liquide qui a passé au travers du filtre, lors de la filtration du 
précipité de globuline, coniie^iiV albumine de V œuf . On peut la précipiter, 
à son tour, soit en saturant la liqueur de sulfate d'ammoniaque, si 
on a employé ce sel comme précipitant, soit, si on s'estservi de sulfate 
de magnésie, en ajoutant à refus du sulfate de soude, toujours à 20''. 
L'albumine se précipite; on filtre, on sèche de son mieux le précipité 
en le comprimant entre plusieurs doubles de papier Joseph, on le 
soumet à la dialyse jusqu'à disparition du sel, et on évapore la solu- 
tion dans le vide à 40° ou 50°. Si on chauffait davantage, ou si on 
précipitait par l'alcool, l'albumine deviendrait insoluble. 

Dans l'albumine de l'œuf, cette méthode ne permet de découvrir 
que deux matières différentes. Il est vrai que Corin et Bérard ont 
distingué deux globulines se coagulant l'une à 57°, 5, l'autre à 67°, et 
trois albumines, avec des températures de coagulation de 07°, 72° et 
82». Avant eux, MM. Gautier et Béchamp n'en avaient distingué que 
deux. Mais ce sont là des finesses qui ne sont pas admises par tout le 
monde. Contentons-nous, pour le moment, d'étudier les grandes 
divisions. 

Nous venons d'en voir deux : la globuline et l'albumine. Il y en a 
une troisième, la nucléo-albumine, dont la caséine du lait nous fournit 
un exemple. Pour la séparer, il suffit de saturer du lait avec du chlo- 
rure de sodium en nature, et finement pulvérisé. La nucléo-albumine 
se précipite. Elle est malheureusement mélangée d'un peu de globu- 
line, car les globulines ne sont pas absolument insolubles dans les 
solutions saturées de sel marin. Nous n'en avons pas moins un nou- 
veau type de matière albuminoïde, la nucléo-albumine, à ajouter aux 
deux premiers. 

Si on s'en tient aux renseignements fournis, les caractères distinc- 
tifs de ces trois types sont faciles à écrire. Les nudéo-albumines et les 
globulines sont insolubles dans l'eau pure, tout à fait débarrassée de 
sels; les albumines sont solubles. Quand on emploie comme dissol- 
vants des solutions pauvres en sels, comme le sont, par exemple, les 
liquides naturels de l'économie, les globulines se dissolvent, lesnucléo- 


REVUES ET ANALYSES. 203 

albumines restant insolubles. Enfin, en présence de solutions concen- 
trées, les globulines se précipitent à leur tour, pendant que les albumines 
restent dissoutes pour ne se précipiter qu'en présence des solutions 
saturées de certains sels très solubles. Toutes ces distinctions se trou- 
vent résumées dans le tableau suivant, où S signifie soluble et I 
insoluble: 

Eau pure. Sels étendus. Sels concentri?s. 

Nucléo-albuinines I I I 

Globulines I S I 

Albumines S S S 

On voit qu'en principe, au moins, la distinction des types est très 
nette. 

A ces différences, on en ajoute d'ordinaire d'autres. Ainsi, les 
nucléo-albumines, très répandues dans le monde animal et végétal, 
sont considérées comme formant la partie principale du protoplasma 
cellulaire, pendant que les globulines et albumines sont surtout des 
éléments des liquides organiques. Les nucléo-albumines se distinguent 
aussi en ce qu'elles contiennent du phosphore, et en ce que leur diges- 
tion pepsique en sépare un produit phosphore, la nucléine, qui, 
d'après Lieberman, est une combinaison d'albumine et d'acide phos- 
phorique. En échange, elles contiennent, en moyenne, moins de soufre 
que les globulines, qui en renferment pourtant moins de 1 0/0, et 
surtout que les albumines, chez lesquelles la teneur en soufre peut 
s'élever de 1,6 à 2 0. Je laisse de côté d'autres différences rela- 
tives à l'action des acides et des alcalis, et à la température de 
coagulation. Elles sont plus contingentes que les précédentes, et nous 
les retruverons dans une autre Revue. 


II 

Demandons-nous maintenant ce que valent les distinctions que 
nous venons de faire, et, d'abord, celles qui nous ont servi à 
établir notre classification, et qui résultent de l'emploi des sels 
neutres. Jusqu'ici, les définitions que nous avons données des 
nucléo-albumines, globulines et albumines, est, remarquons-le, une 
simple définition de mots, non une définition de choses. Nous avons 
appelé globuline tout ce qui se précipite sous l'action du sulfate de 
magnésie en excès, albumine tout ce qui se précipite sous l'action du 
sulfate d'ammoniaque en excès, sans nous être assurés que les subs- 
tances ainsi nommées avaient chacune leur individualité. C'est ainsi 
qu'en chemin de fer, on classe, suivant certaines conventions, les 
voyageurs en premières, secondes ou troisièmes, sans pourtant qu'au 


204 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR, 

fond ces voyageurs soient différents. N'en serait-il pas de même de 
notre classement au moyen des sels neutres? En chimie, les réactions 
de précipitation ne servent qu'à séparer et à purifier les corps, mais 
non à les définir. Cette définition ne résulte que de leur étude à l'état 
pur, de leur analyse, de la mise en évidence de celles de leurs pro- 
priétés permanentes qui les distinguent de leurs voisins, et quand on 
ne trouve dans des livres, à propos des nucléo-albumines, globulines 
et albumines, que les distinctions, évidemment flottantes et sans 
précision, que nous avons résumées plus haut, on se demande où sont 
les caractères de l'espèce chimique. La nucléo-albumine, nous dit-on, 
existe surtout dans le protoplasma et se rencontre de préférence dans 
les organes les plus riches en cellules; les globulines et les albumines 
existent surtout dans les sécrétions et les liquides organiques. Nous 
voilà bien avancés I Ce n'est pas là une distinction d'ordre chimique, ni 
même d'ordre physiologique, tant, physiologiquement, les liquides 
organiques et les sucs cellulaires sont confondus. En fait, nous trou- 
vons de la caséine, qui est une nucléo-albumine, dans le lait, qui 
est une sécrétion. Cette caséine y est accompagnée de phosphate de 
chaux en nature, comme je l'ai montré; le phosphate de chaux est 
entraîné par la caséine au moment où elle se précipite, en liqueur 
neutre, sous l'influence d'une cause quelconque; et voilà peut-être 
l'origine de la distinction relative à l'existence d'un élément phos- 
phore dans les nucléo-albumines, élément qui n'existe pas ou est plus 
rare ailleurs. En outre, dans ces nucléo-albumines, il y a sûrement, vu 
leur origine et leur insolubilité dans l'eau, un mélange d'éléments 
cellulaires détruits ou en voie de destruction, de globules blancs, de 
noyaux qui passent au travers des filtres, se précipitent avec la 
nucléo-albumine, et dont on compte les éléments si variés avec ceux 
de cette substance. En voilà assez pour nous enlever toute confiance 
dans les caractères donnés comme distinctifs pour les trois types pro- 
venant de l'action des sels neutres, et nous sommes conduits à nous 
retourner du côté de la méthode de séparation pour lui demander ce 
qu'elle vaut. 


III 

Notre première remarque sera celle-ci. Nous nous sommes servis 
pour nos précipitations du sel marin, des sulfates de magnésie, d'am- 
moniaque et de soude. Nous aurions pu nous servir d'un sel neutre 
quelconque, car tous sont capables, à des degrés divers, de précipiter 
les diverses matières albuminoïdes. Les moins solubles ou les moins 
actifs ne précipitent que les matières les plus facilement précipitables, 


REVUES ]':T analyses. 205 

les nucléo-albumines et les globulines. Beaucoup s'arrêtent à ce der- 
nier terme, et il n'y en a guère que deux, le sulfate d'ammoniaque et 
l'acétate de potasse, qui soient à la fois assez solubles et assez actifs 
pour précipiter les albumines. Mais tous les sels neutres des métaux 
alcalins et alcalino-terreux, que l'acide soit minéral ou organique, 
ont une action qu'ils poussent plus ou moins loin. Voilà donc ces 
matières albuminoïdes, si réfractaires à la combinaison, comme nous 
l'avons dit plus haut, qui contractent maintenant alliance avec tous 
les sels, quels qu'ils soient, car l'action ne se borne pas aux sels 
du commencement de la série des métaux, elle s'étend à la série tout 
entière. Ces précipitations dites wétdlliqMi's, au lieu d'avoir ce carac- 
tère individuel et précis qui, seul, leur donne de la valeur en chimie, 
ont donc un caractère banal des mieux accusés. 

Cette banalité s'accuse encore par ce fait que ces mêmes solutions 
de sels neutres ne précipitent pas seulement les matières albumi- 
noïdes, elles précipitent aussi une foule de corps colloïdaux, le 
savon, l'amidon cuit, l'aiiiiduline, l'inuline, le glycogène, Tiodure 
d'amidon, la gélatine, diverses matières colorantes; elles précipitent 
aussi les dissolutions colloïdales de silice, d'alumine, d'oxyde de fer. 
Bref, il semble que la substance sur laquelle elles agissent soit indiffé- 
rente, il suffit, comme l'a fait observer Nasse, qu'elle soit à l'état 
colloïdal. 

La surprise que pourrait produire cette conclusion disparaît en 
présence des considérations suivantes. Les corps en dissolution col- 
lo'ïdale passent, comme on sait, plus ou moins facilement au travers des 
filtres de papier, mais sont presque entièrement arrêtés par les filtres 
en porcelaine dégourdie, dont les canaux sont beaucoup plus fins, et 
n'admettent que les liquides et les substances qui peuvent entrer 
en solution véritable, comme les sels. Les substances en solution 
colloïdale se rassemblent à la surface des filtres, et y forment une 
barrière plus ou moins épaisse qui devient bientôt elle-même le prin- 
cipal obstacle à la filtration, parce que, si le filtre a des canaux très 
fins et peu perméables, ces canaux, au moins, ne s'obstruent pas, 
tandis que le dépôt colloïdal de la surface n'a que des interstices qui 
se bouchent bientôt, à mesure que la pression de filtration les remplit 
de matériaux et les comprime plus étroitement sur la surface de por- 
celaine. 

Il en est ainsi pour la caséine du lait qui, ainsi que je l'ai montré, 
est presque en totalité à l'état de suspension colloïdale. Pour l'albu- 
mine de l'œuf, qu'on a diluée dans l'eau, la proportion de matière 
qui peut passer au travers du filtre en porcelaine est variable suivant 
que l'œuf est plus ou moins frais, mais elle est toujours plus grande 
que pour la caséine, et peut atteindre et dépasser la moitié de l'albu- 


206 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR, 

mine totale. Il y a de même pour chaque liquide albumineux une 
portion filtrable et une portion non filtrable à travers la porcelaine, 
ces deux portions pouvant toutes deux filtrer au travers du papier 
et donner ainsi l'illusion d'une solution parfaite. 

Gela posé, voici ce qui se passe. L'addition d'un sel neutre quel- 
conque, àfaible concentration, dans ce mélange, apoureffet de condenser 
en grumeaux, de rendre par conséquent insolubles en apparence, et 
non filtrables.au travers du papier, les portions de substance qui étaient 
les plus gélatineuses, les plus voisines de l'état solide, celles qui en 
venant se coller à la surface du filtre de porcelaine, en diminuaient 
rapidement la perméabilité. La chose est facile à voir avec l'albumine 
d'œuf. Sitôt qu'on a obtenu, par l'addition d'un sel du reste quelconque, 
un coagulum qui entraîne les éléments les plus grossiers de la solution 
apparente du blanc d'œuf, la filtration au travers du papier, comme 
aussi celle à travers du filtre de porcelaine, deviennent très faciles et 
très promptes. Mais les éléments arrêtés n'ont pas été précipités par 
le sel : ils n'étaient pas plus en solution avant qu'après son action. 
Avant comme après, ils ne pouvaient passer au travers d'une 
bougie Ghamberland. Ils étaient seulement filtrables au travers du 
papier, et ne le sont plus; en sorte que si on voulait donner une défi- 
nition précise des globulines de l'œuf, il faudrait les définir comme des 
matières albumino'id es qui, enprésencedes sels, ne passent pas au travers 
du papier à filtre, tandis qu'elles y passent en l'absence des sels ou 
quand on les dilue. Ce caractère ne semble pas suffisant pour une 
distinction d'espèces. 

A mesure que la proportion de sel neutre dissous augmente dans 
le liquide, la rétrogradation vers cet état insoluble, la transformation 
en grumeaux non filtrables au travers du papier, gagne des portions 
de matières plus voisines de celles qui sont en solution véritable ; 
puis, à leur tour, celles qui pourraient passer au travers du filtre en 
porcelaine, et on finit ainsi par tout précipiter, ou plutôt presque 
tout. Mais à quel niveau faut-il placer la barrière entre les nucléo- 
albumines, les globulines et les albumines, c'est ce qu'il est fort 
délicat de décider, tant qu'on n'a pas bien démontré qu'il y en a une. 
Sans avoir la notion précise des faits sur lesquels je viens d'in- 
sister, et convaincus qu'ils assistaient à de véritables précipitations 
chimiques, les premiers savants qui ont essayé de ces moyens de 
classification s'étaient pourtant bien aperçus que tous leurs précipités 
n'avaient rien de net, et s'enchevêtraient parfois les uns dans les autres. 
C'est alors qu'ils avaient été contraints de faire intervenir les conven- 
tions, de fixer la nature et la proportion du sel à employer, sulfate de 
magnésie ou sulfate d'ammoniaque, de définir la température, 20° dans 
un cas, 30° dans un aulre, de tenir compte aussi de la concentration 


REVUES ET ANALYSES. 207 

des liqueurs à analyser, etc. Toutes ces conventions sont au fond très 
innocentes, et l'histoire des matières albuminpïdes a de quoi régaler 
ceux qui les aiment. Mais on voit combien elles sont artificielles, et 
indignes de fournir les éléments d'une classification. Je reconnais 
toutefois que ce serait leur manquer de respect que de s'en tenir avec 
elles àcette condamnation sommaire, prononcée au nom des principes. 
Il faut les voir à l'œuvre et les étudier dans leurs résultats. C'est ce 
que nous ferons dans une Revue prochaine. 

E. DUCLAUX. 


INSTITUT PASTEUR 


Personnes traitées prises de rage pendant le traitement. 

Georgette Dpouet, 6 ans, d'Issy (Seine). 

Georgetle Drouet, mordue le 7 février, s'est présentée à l'Institut 
Pasteur et a été inoculée pour la première fois le 25 février. Elle 
portait à la tête une hlessure partant de l'arcade sourcillièi'e gauche 
remontant sur le crâne et se prolongeant sur une longueur de 11 centi- 
mèti'es, la paupière avait été déchirée. 

Le 9 mars, la jeune Drouet présente une aérophobie très marquée; 
elle est conduile à l'Hôpital des enfants où elle meurt lé 11 ; d'après les 
renseignements fournis par son père, les premiers symptômes se sont 
manifestés vers le 7 mars. 

Le chien mordeur avait été abattu le 9 février et soumis le 24 à 
l'examen de M. Lecomte, vétérinaire à Issy, qui avait conseillé l'envoi 
à l'Institut Pasteur de l'enfant mordue. 


208 


ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 


INSTITUT PASTEUR 

STATISTIQUE ' DU TRAITEMENT PRÉVENTIF DE LA RAGE — FÉVRIER 1892. 


Morsures aux mains 


Morsures à la tête ( simples 

et à la figure ( multiples. . . . 
Cautérisations efficaces 

— inefficaces 

Fas de cautérisation 

simples 

multiples . . . . 
Cautérisations efficaces 

— inefficaces 

Pas de cautérisation 

Morsures aux mem- l simples 

bres et au tronc | multiples . . . . 
Cautérisatiotis efficaces 

— inefficaces ....... 

Pas de cautérisation 

Habits décliirés 

Morsures à nu 

Morsures multiples en divers points du 

corps 

Cautérisatio?is efficaces 

— inefficaces 

Pas de cautérisation 

Habits déchirés 

Morsures à nu 


T/^ta„ir S Français et Algériens . 
lotaux. ^ Etrangers 


6 fQ 


3; 

25 


13 

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13 


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13 


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2 


» 


» 


1 


» 


67 
13 


80 


26/ 
16) 

1 


22 


19 


42 


i. La colonne A comprend les personnes mordues par des animaux dont la 
rage est reconnue expérimentalement; la colonne B celles mordues par des ani- 
maux reconnus enragés à l'examen vétérinaire; la colonne C les personnes mordues 
par des animaux suspects de rage. 


Les animaux mordeurs ont été 
5 fois. 


chiens, 130 fois; chats, 


Le Gérant : G. Masson. 


Sceaux. — Imprimerie Cbaï'aire et C'o. 


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V. Rousse 


6'»« ANNEE. AVHII. d892. N« 4. 

ANNALES 

DE 

L'INSTITUT PASTEUR 


SUR CERTAINS CARACTÈRES 

DES LÉSIONS HISTOLOGIQUES DE LA RAGE 

Par m. V. BABES. 

(Travail de l'Institut de pathologie et de bactériologie de Bucarest.) 


Les symptômes et les lésions de la rage du chien sont bien 
connus; leur ensemble, quand ils sont bien prononcés, ne 
-laisse aucun doute sur la nature de la maladie. Cependant il 
arrive que Ton n'ait pas eu l'occasion d'observer les symptômes de 
l'animalmordeur, de sorte que le médecin hésite à recommanderle 
traitement antirabique, et le malade à s'y soumettre. Même 
quand la rage de l'animai mordeur est probable, toujours est-il à 
désirer d'avoir aussi vite que possible la certitude du fait, et de 
pouvoir, le cas échéant, rendre la tranquillité au malade. 

Enfin, il y a des cas où les symptômes de la rage peuvent 
être confondus avec ceux d'une maladie différente, l'épilepsie, par 
exemple. Il y en a d'autres où la moelle de l'animal mordeur 
nous arrive putréfiée ou altérée, ou bien conservée dans l'alcool, 
de sorte que les animaux inoculés avec cette moelle succombent 
par le fait d'une septicémie, ou restent bien portants quoique 
le chien mordeur fût enragé. 

Toutes ces difficultés journalières m'ont décidé, dès le com- 
mencement de mes études sur la rage, à chercher un moyen de 


210 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUK. 

diagnostic plus rapide et plus sûr que la présence des corps 
étrangers dans l'estomac congestionné des animaux suspects, ou 
d'autres lésions moins constantes encore. Cette maladie, si bien 
caractérisée par tout un cortège de symptômes assez constants, 
doit présenter aussi des lésions caractéristiques dans les centres 
nerveux, et notamment dans les noyaux qui président à la pro- 
duction de ces symptômes. 

J'ai donc cherché l'existence de lésions dans les noyaux 
moteurs du bulbe, de la moelle, et surtout dans la substance 
grise qui circonscrit la grande cavité du cerveau. 

Des recherches dans ce sens ont été déjà faites par différents 
auteurs. Benedikt avait publié en 1874 des observations sur les 
lésions rabiques *. En 1875, le même auteur commence un 
mémoire" sur les lésions rabiques, par ces mots : « la cause 
pour laquelle les lésions pathologiques de la rage ont échappé, 
doit être cherchée dans la forme mUiaire des foyers patholo- 
giques ». Cependant ce savant décrit comme lésions rabiques 
un état qu'il identifie avec la granular-clesintegration des Anglais. 
D'après lui il s'agirait ici de l'exsudation périvasculaire d'une 
substance grenue ou hyaline, et il admet même la rupture et la 
compression des vaisseaux au niveau de la lésion. Quelques 
dessins de son mémoire montrent une diapédèse des globules 
rouges et des leucocytes qui forment des noyaux autour des 
vaisseaux sanguins. En même temps il existe de petites hémor- 
ragies par rupture des parois des vaisseaux, des masses jaunes 
pigmentaires autour des vaisseaux, et une accumulation de 
leucocytes dans certains vaisseaux lymphatiques. Quant à la 
topographie de cette lésion, l'auteur constate la fréquence des 
foyers surtout dans le lobe olfactif, la fosse sylvienne, au niveau 
du trijumeau moteur, et enfin entre l'anse et le processus cerebelli 
ad pontem. 

On sait que la granular-desintegration a été reconnue depuis 
comme étant en partie une modification artiiîcielle, et, en effet, 
les dessins qui accompagnent le mémoire laissent reconnaître 
des foyers qui certainement ne sont pas d'origine vitale. Cepen- 
dant dans d'autres dessins on voit des masses hyahnes autour 
des vaisseaux, des hémorragies dans les espaces péri-vasculaires, 

1. Wiener mediz. Presse, 1874, n. 27. 
"2. Virchoivs Archiv, 1873, t. 64, p. 537. 


LÉSIONS HISTOLOGIQUES DE LA RAGE. 211 

et de petits foyers hémorragiques pigmentaires et inflam- 
matoires autour des vaisseaux. 

Dans la même année, Kolesnikofl"' pouvait constater à peu 
près les mêmes lésions, en ajoutant que les masses hyalines 
produisent aussi l'ohlitération de certains vaisseaux. 

Plitz et Friedberger ^ ont constaté aussi des masses hyalines 
dans les vaisseaux et dans leurs parois, de même qu'une coloration 
jaunâtre des parois et de l'entourage des vaisseaux. 

M. Coats ^ avait trouvé des lésions étendues dans trois cas de 
rage humaine, à savoir, des foijers miUaires surtout dans la partie 
axiale, mais aussi dans les circonvolutions. Ces foyers sont 
formés par des cellules lymphatiques accumulées non seulement 
autour des vaisseaux, mais aussi autour des cellules nerveuses. 
Il ne parle pas des masses hyalines décrites' par Benedikt. 
C'est donc sans doute M. Coats qui décrit les lésions les plus 
caractéristiques; cependant sa description est défectueuse et il 
ne spécifie point la topographie des lésions. 

M. Benedikt revient en 1878* sur les lésions rabiques. Il 
constate les lésions décrites chez un cheval mort delà rage; pour 
lui, les foyers miliaires se trouventtoujours autour des vaisseaux 
des cornes antérieures de la moelle cervicale, et dans Taxe du 
système nerveux central; aux mêmes endroits, il constate de 
nouveau des anévrysmes miliaires disséquants, produits souvent 
par une dégénérescence hyaline des parois des vaisseaux. 

Bollinger, Forel% de même que Fr. Schullze, n'ont pu trouver 
d'autres lésions qu'une hypérémie et une lymphostase, lésions 
qui, d'après ces auteurs, n'ont rien de particulier. 

En 1887, Govvers ^ en examinant les cerveaux de quatre indi- 
vidus morts de la rage, constate aussi les hyperlymphoses autour 
de petites veines qui, en section transversale, correspondent aux 
foyers décrits par les auteurs. 

Ce savant, de même que Friedberger et Benedikt, décrivent 
dans les régions mentionnées des thromboses vasculaires réti- 
culées, grenues, hyalines, souvent imbibées de pigment sanguin, 

1. Clralblatt f. med. Wiss., 187o. p. &o.S. 

2. Zeitschr. f. priicl. Veterinàrwiss., 1876, p. 59. 

3. Lancet, 3 février ^877 (cité d'après Beuedikt). 

4. Archives de Virchow, t. 72, p. 4"i5. 

5. D. Zeitsch. f. Thiermed. und vergl. Pat/i , 1876, t. III. 

6. Pathol. Ti-ansactions. 


512 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

renfermant des leucocytes en dissolution. Il croit, de même que 
Benedikt, que ces lésions sont caractéristiques pour la rage, 
tandis qu'on trouve des foyers embryonnaires périvasculaires 
aussi dans d'autres maladies. Ainsi Benedikt mentionne un cas 
de paralysie progressive des nerfs cérébraux (bulbaire?) avec 
des foyers semblables sur le plancher du IV® ventricule. 

Weller' trouve, comme la plupart des auteurs, des foyers de 
cellules embryonnaires dans les espaces périvasculaires, qui 
renferment en même temps des masses jaunes uniformes, comme 
des gouttes d'une substance grasse. Les mêmes cellules existent 
souvent aussi autour des cellules nerveuses voisines. 

Kolesnikofî -, en rapportant le résultat de l'examen de 
-20 chiens enragés et tués le 4® ou 5® jour de la maladie, constate 
^e nouveau les lésions décrites dans ses recherches antérieures, 
et insiste surtout sur ce point que les lissions microscopiques ont été 
dans tous les cas toujours les mêmes; elles étaient localisées dans le 
corps strié, les couches optiques, dans le bulbe et la moelle. Les 
lésions les plus profondes existent au niveau des vaisseaux 
sanguins. Elles consistent : 1° en une prolifération des cellules 
endothéliales; 2° en une prolifération du tissu conjonctif de la 
tunique externe, avec inliltration par des éléments lymphoïdes; 
S** en une accumulation d'éléments lymphoïdes entre la tunique 
moyenne et externe; 4° en une propagation de l'infiltration dans 
la tunique moyenne, avecprolifération des éléments musculaires. 
Dans ce cas, toutes les couches de la paroi vasculaire ont été 
intiltrées par des éléments lymphoïdes. 

Ces lésions sont au commencement nodulaires, et deviennent 
plus tard diffuses. Elles étaient compliquées d'hémorragies par 
rupture ou par diapédèse. Ces hémorragies sont surtout causées 
ou par la lésion des parois, ou par l'oblitération des vaisseaux 
par des thrombus formés de masses hyalines et par des leucocytes. 
L'auteur entre ensuite dans l'analyse de la substance hyaline 
qui se trouve dans les parois des vaisseaux modifiées; il trouve 
que ces masses donnent tantôt la réaction amyloïde, tantôt celle 
des colloïdes et des substances albuminoïdes. D'après lui, ces 
masses résultent d'une modification des globules rouges du 
sang. Sans diriger son attention sur la localisation des lésions 

1. Archiv. f. Psychiatrie, 1879. 
"2. Virchow's Archiv. 1888, p. 44o. 


LÉSIONS HISTOLOGIQUES DE LA RAGE. 213 

autour des cellules nerveuses, il insiste sur le caractère insulaire 
des lésions rabiques, surtout manifeste dans la substance grise 
du cerveau et de la moelle; mais en examinant les cas décrits par 
cet auteur, on voit facilement que les noyaux autour des cellules 
nerveuses ne sont pas si répandus que les noyaux vasculaires* 
Les premiers nodules existent surtout dans la substance grise 
au voisinage de l'épendyme des ventricules, dans la protubérance 
et dans les noyaux de l'hypoglosse, du pneumogastrique et de 
l'accessoire de Willis, et enfin dans les cornes antérieures de la 
moelle. 

Dans une petite publication parue dans le journal hongrois, 
Orvosihctilap, de 1886, j'avais donné le résultat d'une longue série 
d'examens faits sur des organes d'hommes et d'animaux morts 
de rage, et dans ma publication détaillée sur la rage (Virchoiu's 
Archivai. 110, 1887), je résume le résultat de mes recherches sur 
les lésions rabiques, qu'on peut j)réciser de la manière suivante ; 
1° Chez les animaux morts de la rage des rues, on trouve 
ordinairement une hypérémie et un œdème aigu général des 
méninges cérébrales et médullaires, des hémorragies aiguës et 
localisées autour de certains vaisseaux, en même temps que des 
lésions inflammatoires. Au microscope, on constate une multipli- 
cationdes cellules plasmatiques, et l'augmentationdela substance 
réticulaire, de nature fibrineuse, entre les couches des méninges. 
2° L'épithélium du canal central cérébro-spinal a proliféré. 
Dans la substance grise qui entoure le canal et surtout dans celle 
du plancher on trouve souvent des hémorragies, parfois symé- 
triques. Au microscope on voit souvent une oblitération ou une 
thrombose du vaisseau par une substance réticulée, hyaline, 
pigmentée, ou par des leucocytes, de même que des globules 
hyalins, et parfois une dégénérescence hyaline, ou bien une 
inflammation des tuniques vasculaires. Le sang extravasé renferme 
aussi beaucoup de substance hyaline. Les hémorragies sont 
souvent limitées par la gaîne lymphatique des vaisseaux. En 
même temps on trouve souvent des défauts dans l'épithélium 
des ventricules et du canal central. Ce dernier est parfois rempli 
de sang et de masses hyalines ou grenues. 

3° On observe parfois à l'œil nu de petits foyers de dégéné- 
rescence dans la substance grise, mais souvent on les cherche 
en vain. 


214 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

4" Les lésions les plus constantes sont de nature microsco- 
pique; elles se trouvent surtout dans la substance grise qui 
entoure le canal cérébro-spinal, et dans les noyaux moteurs du 
bulbe et de la moelle. Ces lésions consistent d'abord dans l'hypé- 
rémie et dans l'accumulation de cellules embryonnaires autour 
des petits vaisseaux, d'orig-ine périthéliale ou migratrice, souvent 
avec le caractère d'une multiplication indirecte; enfin on y 
trouve encore des lésions des cellules nerveuses. 

5° La lésion des cellules nerveuses des régions indiquées est 
assez caractéristique; elle consiste dans des signes de proliféra- 
tion (PI. YIII, fig. 1 et 4) et même dans la présence de plusieurs 
petites cellules au lieu d'une grande, ou dans une dégénérescence 
uniforme, et souvent vacuoiaire avec réduction ou disparition du 
noyau (PI. VIII, fig. 6), ou bien avec disparition de son réseau 
chromatique. Ces cellules renferment souvent du pigment. Sou- 
vent des éléments ronds mononucléaires, plus rarement polynu- 
cléaires, de nature lymphatique, font leur invasion dans le 
protoplasme même de la cellule (PI. YIII, 8), et remplissent les 
espaces lymphatiques péri-cellulaires dilatés en formant de 
petits noyaux. 

0° La lésion de la substance médullaire est moins prononcée; 
elle consiste surtout dans un œdème delà gaine myélinique des 
fibres nerveuses. 

7° On trouve dans certaines cellules plasmatiques, dans l'in- 
térieur et autour des vaisseaux, souvent dans les leucocytes, dans 
les espaces lymphatiques, des parties altérées dans certaines 
cellules nerveuses, et, dans la gaine dilatée des fibres nerveuses, 
des grains arrondis ou amiboïdes de l ij- de diamètre environ, 
pigmentés ou colorables par les couleurs d'aniline, et qui en 
partie semblent posséder des mouvements propres. 

Les mêmes lésions ont été décrites plus tard par ditïérents 
auteurs, qui ont ajouté encore des détails controversés. Ainsi 
Schaiïer croit pouvoir regarder certaines granulations proto- 
plasmiques ou pigmentaires des cellules nerveuses et du noyau, 
de même que des stries protoplasmiques plus prononcées, 
comme quelque chose de particulier, et il prétend que les lésions, 
qu'il regarde comme une myélite aiguë, seraient toujours plus 
prononcées à l'endroit correspondant à l'entrée du nerf de la 
région mordue dans la moelle ou dans le cerveau. Cet auteur 


LÉSIONS HISTOLOGIQUES DE LA RAGE. 215 

insiste aussi sur raccumulation des cellules lymphatiques autour 
des cellules nerveuses, surloul dans les cornes antérieures. Il 
donne une certaine importance aux lésions des fibres nerveuses 
et à l'atrophie pigmentaire trouvées dans la rage; il insiste sur 
la localisation des lésions au niveau des noyaux moteurs. Cepen- 
dant Popoll", de même que moi, nous ne pouvons pas confirmer 
les données de ce savant concernant la localisation constante 
indiquée de la myélite, et la spécificité du pigment ou de 
certaines granulations; de plus j'avais constaté, dans plusieurs 
autres lésions aig-uës de la moelle, les lésions des cellules gan- 
g-lionnaires décrites par Schaffer. 

Dans un récent travail en collaboration avec M. Mihailescu, 
j'ai constaté, en outre des lésions indiquées, que l'altération des 
cellules nerveuses est ordinairement accompagnée d'une modi- 
fication de leur réseau protoplasmique, mise en évidence par le 
bleu de méthylène sur les pièces durcies dans l'alcool. Ce 
réseau et ses modifications ont été démontrés par moi au Con- 
grès international de Berlin en 1890 ({\g. 1, 2 et 3, PI. VllI). 

Les cellules modifiées sont entourées d'une zone de cellules 
embryonnaires. Entre ces cellules, on distingue un réseau lym- 
phatique dilaté et un peu de substance rigide, à l'aspect kératinisé, 
formant des fragments d'un mince réseau. Souvent ce foyer 
renferme aussi un peu de pigment noir intra et interceliulaire ' 
(fig. 7). 

Comme l'état embryonnaire des petits vaisseaux, surtout des 
rég'ions motrices, de même que les autres lésions indiquées, se 
retrouvent dans beaucoup d'autres troubles aigus du système 
nerveux central, ces lésions, quoique assez constantes, ne suffi- 
sent pas pour nous fournir un moyen de diagnostic de la mala- 
die; tandis que les petits foyers embryonnaires bien nets, autour 
d'une seule cellule nerveuse d'origine motrice, ou d'un très 
petit g-roupe de cellules provenant probablement de la multipli- 
cation d'une seule cellule (PI. YIII, fig. 1), donnent un ensemble 
très caractéristique, que je n'ai pas remarqué dans d'autres ma- 
ladies du système nerveux. 

-1. Je n'entre pas ici dans les détails d'autres lésions microscopiques de la rage, 
cenime celles des nerfs, des glandes et des ganglions mentionnées par Wagner, 
Kolessnikofr, Polaillon, Mepveii, Botkin, Klebs, Heschl, etc., et d'autres, que j'avais 
décrites en partie dans mes « Éludes sur la rage », insérées dans les Aimales de 
l'Instilut de pathologie et de bactériologie, de Bucarest, 1888-89, t. I, vol. 2. 


216 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

La lésion inflammatoire occupe, dans certaines de ces mala- 
dies, des régions plus étendues, les vaisseaux et ordinairement 
en même temps la substance médullaire. La lésion des noyaux 
moteurs dans les affections non rabiques est plus étendue, plus 
systématisée et rarement si aiguë; on n'y trouve pas enfin la 
localisation indiquée des lésions rabiques. 

Pour m'assurer de la spécificité des lésions trouvées dans la 
rage, j'ai examiné un nombre de maladies nerveuses aiguës avec 
participation des régions motrices, chez le chien et chez 
l'homme. Chez le chien, ce sont certains cas de maladie des 
jeunes chiens avec caractère nerveux qui montrent des lésions 
plus ou moins semblables aux lésions rabiques. Cependant on y 
observe facilement les difi'érences suivantes : l*' dans cette der- 
nière maladie, la lésion périvasculaire (diapédèse, masses 
hyalines) est beaucoup plus intense et surtout les foyers 
sont beaucoup plus étendus que dans la rage; 2° on n'y trouve pas 
unelocalisation des foyers inflammatoires autour des cellules ner- 
veuses; 3° on y observe ordinairement une participation mani- 
feste de la substance blanche; 4° le bulbe, la substance grise 
autour du canal cérébro-spinal, sont dans cette maladie moins 
altérés et ne présentent pas les petits noyaux caractéristiques. 

Dans des maladies expérimentales, toxiques ou traumati- 
ques, surtout celles décrites par Popoff" {Beitr. zur Kenntn. d. 
acuten tox. Myelitis, 1882) et par moi-même {Experim. Beitr., etc. 
Arch. f. Dermat., i878), on observe une lésion plutôt paren- 
chymateuse, avec hypérémie, exsudation de masses hyalines, 
dégénérescence des cellules et surtout des fibres nerveuses, 
tandis que les lésions inflammatoires des vaisseaux sont moins 
prononcées, et je n'ai pas vu dans ces formes des noyaux 
embryonnaires localisés autour des cellules nerveuses des noyaux 
moteurs. 

Si on tue des chiens par asphyxie, on observe parfois, en 
même temps que la congestion, la présence de quelques cellules 
lymphatiques autour de certaines cellules ganglionnaires, mais 
les cellules lymphatiques sont peu nombreuses, les cellules gan- 
glionnaires sont intactes, et la lésion ne présente pas Ja topogra- 
phie indiquée. 

Chez l'homme, c'est surtout la paralysie bulbaire, l'atrophie 
musculaire progressive et la paralysie infantile qui pourraient 


LÉSIONS HISTOLOGIQUES DE LA RAGE. 217 

donner des lésions quelque peu semblables aux lésions rabiques. 
Mais, dans la paralysie bulbaire, la moelle est ordinairement 
intacte; la lésion commence dans toutes ces maladies par une 
prolifération de la névroglie, qui amène une atrophie des groupes 
cellulaires, et je n'ai pu constater dans mes préparations prove- 
nant de cette maladie la zone d'éléments embryonnaires migra- 
teurs, qui est si caractéristique dans la rag-e. 

Ainsi les nodules rabiques, toujours aigus, et moins limités 
aux cornes antérieures, ne pourront être confondus avec 
les lésions sclérotiques et atrophiques de l'atrophie muscu- 
laire. 

La myélite aiguë de l'homme est, comme on le sait, tantôt 
systématique, tantôt insulaire ou diffuse, transversale, ascen- 
dante ou descendante. Elle présente, même dans des cas aigus, 
des lésions parenchymateuses, et surtout l'œdème, la proli- 
fération de la névroglie, l'apparition de cellules granulo-grais- 
seuses, tandis que les vaisseaux sont ordinairement moins modi- 
fiés. De plus ses lésions sont rarement limitées à la partie grise 
et motrice du système nerveux central. On ne pourra donc 
jamais confondre les lésions bien évidentes et macroscopiques 
de cette maladie avec les lésions histologiques de la rage. 

Bien que la myélite aiguë présente dès le commencement 
une dégénérescence bien prononcée, avec apparition de glo- 
bules granulo-graisseux en grandes masses autour des vaisseaux 
du parenchyme, avec des lésions intenses et limitées aux 
parties qu'on reconnaît ordinairement à l'œil nu comme les 
plus atteintes par la maladie, il y a cependant des cas de myé- 
lite aiguë, 011 on ne trouve que des lésions nodulaires microsco- 
piques. Mais dans ces cas aussi, on ne décrit pas les noyaux 
d'inflammation limitée presque aux régions motrices de la sub- 
stance grise, et surtout ceux qui se trouvent dans la rage autour 
de certaines cellules nerveuses. 

C'est surtout dans un cas de tétanos chez l'homme et dans un 
autre d'éclampsie puerpérale (néphritique), que j'ai trouvé des 
lésions du système nerveux central qui ressemblent le plus aux 
lésions rabiques. Cependant les accumulations cellulaires, quoique 
souvent miliaires, existent surtout autour des petits vaisseaux, 
les régions sont moins limitées, et même des petits nodules 
trouvés dans le cas d'éclampsie, dont le rapport avec ces vais- 


218 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

seaux ne sont pas évidents, ne sont pas non plus situés autour 
des cellules nerveuses. 

Tout en admettant que les lésions de la rage n'ont rien 
d'absolument caractéristique, et qu'il se pourrait que dans un 
cas de myélite diffuse très aiguë on trouvât des lésions sembla- 
bles, il faut tout de même constater que ni dans les livres, ni 
dans mon expérience personnelle, je n'ai jamais rencontré un 
cas semblable, de sorte que jusqu'ici nous pouvons regarder 
les lésions rabiques comme caractéristiques. Dans d'autres 
maladies infectieuses, on avait aussi trouvé des lésions histologi- 
ques caractéristiques comme ensemble, quoique faites d'éléments 
non absolument spécifiques. C'est ainsi qu'on avait reconnu 
et regardé comme spécifiques les lésions de la tuberculose avant 
la découverte du bacille qui la produit, quoique cette maladie 
n'offrît alors aucun élément absolument spécifique. 

Peut-être aussi que dans la rage, dans laquelle le cerveau et 
la moelle sont le siège du virus, la virulence est liée aux éléments 
qui font partie des nodules caractéristiques; il serait moins pro- 
bable que ces nodules soient l'expression d'une action éloignée 
toxique, comme le sont, par exemple, les lésions nerveuses dans 
le tétanos, dans lequel la moelle n'estpas virulente. De plus, nous 
nous sommes convaincus que la moelle rabique stérilisée ne 
produit ni la rage, ni les nodules caractéristiques pour cette 
maladie. 

En effet, en comparant la moelle rabique avec celle des 
animaux succombés au tétanos, ou par le fait d'une intoxication, 
on constate souvent, dans ces dernières maladies, la même 
hypérémie et même l'infiltration cellulaire et de masses hyalines 
dans les parois vasculaires ; mais on y cherche en vain une 
localisation miliaire de ces lésions aux parties indiquées, et on 
n'y trouve pas les îlots inflammatoires péricellulaires de la rage. 
Il résulte de ces examens comparatifs, de même que des cons- 
tatations des auteurs sur les lésions de la rage, qu'il s'agit dans 
cette maladie de foyers miliaires, surtout dans la substance grise 
et de préférence dans les régions motrices, qui par leur forme 
et leur siège présentent des particularités, parmi lesquelles les 
noyaux embryonnaires autour de certaines cellules nerveuses 
modifiées sont, d'après moi. les plus caractéristiques. 

Pour m'assurer de la valeur diagnostique de l'ensemble des 


LÉSIONS IIISTOLOGIQUES DE LA RAGE. 219 

lésions rabiques et surtout des petits foyers péricellulaires, 
j'examine depuis plusieurs mois les pièces, moelle ou cerveau, 
qu'on nous envoie avec les personnes mordues. 

Voici la manière dont je procède : des tranches de moelle ou 
de cerveau, de o-lO mm. carrés sur 3 mm. d'épaisseur, sont 
durcies dans l'alcool absolu, tandis qu'une partie de la moelle 
est inoculée par trépanation à un cobaye ou un lapin. Le lende- 
. main on peut très bien en faire des coupes minces qu'on 
teint par le bleu de méthylène ou la fuchsine de Lôftler. En 
quelques minutes les pièces sont colorées ; on les lave à l'eau 
distillée, et après les avoir fait déshydrater, on les éclaircit 
dans l'essence de girofle et on monte dans le baume de 
Canada. 

Par ce procédé, la substance médullaire n'est pas bien con- 
servée, mais, comme mes recherches l'ont montré, la substance 
blanche est peu modifiée dans la rage, et encore ces modifica- 
tions ne sont-elles que peu caractéristiques, de sorte qu'on peut 
s'en passer dans cet examen. La substance grise et les produits 
de jirolifération et d'inflammation, au contraire, sont très bien 
conservés et colorés par ce procédé rapide. On voit déjà à un 
faible grossissement, d'une manière éclatante, les groupes de cel- 
lules motrices des régions intéressées; parmi ces cellules il y en 
a quelques-unes qui sont ordinairement pâles, vacuolaires, aux 
prolongements cassés, au noyau modifié (en karyokinèse par- 
fois), envahies par de petitescellules rondes mono-nucléaires et 
formant le centre d'un petit nodule, composé lui-même par les 
éléments migrateurs mono-nucléaires que nous avons ton ta l'heure 
signalés. On voit bien en même temps les vaisseaux prolifères, 
dilatés souvent, renfermant beaucoup de leucocytes, et entourés 
d'espaces lymphatiques dilatés et remplis d'éléments embryon- 
naires, parfois pigmentés. 

Ce qui caractérise surtout la lésion, c'est la [)résence de ces 
nodules péricellulaires. 

Voici enfin, comme exemples de notre procédé, quelques cas 
dans lesquels cet examen nous a donné des renseignements 
utiles. 

I. — Petrache Grigoru', âgé de 37 ans, de Hàleni (Covurh'u), est mordu 
le 13 octobre par son chien, de retour à la maison après une absence de 


220 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 

3 jours. Le même jour l'animal est abattu, et on envoie à l'Institut le bulbe 
et le cerveau du chien dans la glycérine. L'autopsie a été négligée. 

Le 17 on reçoit les pièces ; on les fait durcir dans l'alcool, après les 
avoir' fixées parla liqueur de Flemming, et le 20 octobre on fait des coupes; 
on les colore par le bleu de méthylène et nous constatons d'abondants nodules 
rabiques autour des cellules nerveuses du bulbe, surtout dans les noyaux du 
pneumogastrique et du nerf hypogastrique. ^ 

Le lapin inoculé est mort de la rago. 

IL — Le paysan GavrilPrepelita, âgé de 40 ans, de Ciumulesti (Suceava) 
est mordu le 22 octobre par un chien étranger, suspect de rage, sur lequel 
on ne nous donnait pas de renseignements. 

Le 3 novembre on reçoit le cerveau du chien dans la glycérine, on fait 
durcir dans l'alcool absolu, et le 5 on fait des coupes, dans lesquelles on 
constate au microscope beaucoup de nodules rabiques dans l'épendyme du 
ventricule latéral. 

Le lapin infecté est mort après 30 jours de la rage. 

m. — M. Anton Sichni, âgé de 43 ans, de Roman, est mordu le 31 octo- 
bre par un chien suspect, qu'on a tué. 

Dans les coupes qu'on a obtenues des pièces envoyées, après durcissement 
dans l'alcool, on observe des nodules rabiques caractéristiques en grand 
nombre, surtout autour des cellules nerveuses de la paroi du ventricule laté- 
ral au-dessous de l'épendyme. 

Le lapin inoculé en même temps, meurt rabique le 24 novembre, 

IV. — Un chien présentant des symptômes suspects, meurt de la rage 
à l'Institut. On constate les lésions anatomiques de la rage. On fait durcir 
le cerveau, le bulbe et la moelle de l'animal dans l'alcool absolu, et deux 
jours après on peut observer, dans les coupes 'colorées par la fuchsine, de 
nombreux nodules autour des cellules motrices dans les noyaux du plan- 
cher du IV^ ventricule, surtout du nerf hypoglosse, et dans les cornes an- 
térieures de la moelle cervicale. 

Le lapin inoculé avec cette moelle meurt de la rage 18 iours après la 
trépanation. 

V. — Le mêmejour on fait abattre un chien suspect, on durcitle bulbe et la 
moelle dans l'alcool, et, deux jours après, on fait des coupes dans lesquelles 
on n'observe pas de nodules péricellulaires. 

Le lapin inoculé avec la moelle de ce chien reste bien portant. 

VI. — L'enfant Maria Jonica Feraru, de Slatina, âgée de 8 ans, est 
mordue le 7 novembre par un chien pr